Coltura di cellule endoteliali da microvasi cerebrali di ratto: una procedura per isolare e coltivare cellule endoteliali da microvasi di cervello di ratto

Per isolare le cellule endoteliali cerebrali, in primo luogo, trasferire un cervello di ratto raccolto in un piatto contenente tampone refrigerato.

Dopo aver rimosso il cervelletto e i nervi ottici, dividere il cervello in emisferi cerebrali. Quindi, separare il mesencefalo dal proencefalo.

Rimuovere le meningi e la sostanza bianca contenente mielina dal proencefalo, lasciando dietro di sé la corteccia cerebrale per isolare i microvasi.

Successivamente, omogeneizzare la corteccia per rompere il tessuto nervoso e i costituenti.

Centrifugare l'omogeneizzato per rimuovere i detriti cellulari e la mielina.

Successivamente, trattare il pellet di tessuto con un cocktail digestivo contenente collagenasi, dispasi ed enzimi desossiribonucleasi.

Le collagenasi e le dispasi digeriscono la matrice extracellulare che incorpora i microvasi, allentando i frammenti dei microvasi dal tessuto. Le desossiribonucleasi degradano il DNA libero rilasciato dalle cellule lisate.

Miscelare il volume desiderato dell'omogenato digerito con un mezzo di gradiente di densità appropriato e centrifugare.

Scartare lo strato superiore contenente la mielina e le cellule parenchimali cerebrali, seguito dal surnatante.