Saggio di invasione della neurosfera con cellule staminali tumorali cerebrali (BTSC): un test in vitro per analizzare l'effetto del trattamento farmacologico sull'invasione di BTSC dalla neurosfera

Le cellule staminali tumorali cerebrali o BTSC, un sottoinsieme di cellule all'interno dei tumori cerebrali, possiedono capacità di autorinnovamento e contribuiscono alla progressione del tumore e alla resistenza alla terapia. Per determinare l'effetto dei farmaci sull'invasione di BTSC in vitro, iniziare con le sospensioni di BTSC in un terreno adatto in fiasche di coltura. Trattare una delle sospensioni con il farmaco di interesse.

Incubare i flaconi. I componenti del terreno promuovono la proliferazione cellulare. Le cellule rimangono in sospensione, formando così ammassi sferici chiamati neurosfere. Al raggiungimento della dimensione desiderata, raccogliere le neurosfere. Lasciali sedimentare per gravità e rimuovi i substrati. Quindi, risospendere le neurosfere non trattate e trattate con il farmaco in un terreno refrigerato contenente una proteina della matrice extracellulare adatta e il farmaco.

Piastra le sospensioni in una piastra a più pozzetti raffreddata. Lasciare che le neurosfere sedimentino sul fondo del pozzetto per un migliore imaging. Successivamente, incubare per la polimerizzazione delle proteine della matrice, incorporando le neurosfere all'interno. Immagini del