Zimografia peptidica fluorescente: una tecnica modificata per rilevare l'attività della proteasi utilizzando substrati fluorogenici in gel per zimogrammi

La zimografia è una tecnica elettroforetica che coinvolge un substrato proteico copolimerizzato con gel di poliacrilammide per rilevare gli enzimi idrolitici e la loro attività. Per iniziare, sciogliere i campioni in un tampone per zimografia contenente glicerolo, dodecil solfato di sodio o SDS e blu di bromofenolo.

Il glicerolo rende il tampone del campione più denso del tampone di scorrimento circostante del gel, consentendo un facile caricamento nelle tasche del gel. L'SDS - un detergente anionico - denatura gli enzimi nel campione e li ricopre di una carica negativa. Il blu di bromofenolo, un colorante tracciante, aiuta a monitorare l'avanzamento del campione nel gel.

Caricare i campioni in gel di poliacrilammide incorporato con substrati fluorogenici per rilevare l'attività della proteasi. Ora collega gli elettrodi e inizia l'elettroforesi. Il campo elettrico generato fa sì che tutti gli enzimi legati alla SDS migrino attraverso il gel verso l'elettrodo caricato positivamente.

Dopo il completamento dell'elettroforesi, rimuovere il gel e lavarlo in un tampone rinaturalizzante contenente un detergente non ionico che sposta la SDS per consentire la rinaturazione enzimatica. Succe