Elettroporazione ex vivo di fette cerebellari di embrioni di pollo: un metodo per introdurre il DNA plasmidico che codifica la proteina fluorescente verde per visualizzare lo sviluppo delle cellule granulari

Le cellule dei granuli cerebellari sono il tipo di neuroni più abbondante nel cervello. Lo strato granulare esterno, EGL, è composto esclusivamente da precursori cellulari granulari, GCP, che si differenziano e migrano verso l'interno per formare lo strato granulare interno, IGL.

Per visualizzare lo sviluppo delle cellule granulari, preparare una camera di elettroporazione collegando un anodo alla base di una piastra di Petri. Aggiungere il terreno di coltura per coprire l'elettrodo. A questo punto, posizionare un inserto di coltura sull'elettrodo ricoperto di terreno. Trasferire le fette di cervelletto dell'embrione di pollo sull'inserto di coltura con orientamento sagittale.

Il piano sagittale consente di identificare lo strato bersaglio-EGL rispetto a diversi strati del cervelletto. Aggiungere una soluzione colorante viscosa contenente un DNA plasmidico GFP su EGL. Il DNA plasmidico GFP codifica per una proteina fluorescente verde che si distribuisce in modo omogeneo all'interno del citoplasma cellulare e consente l'imaging di cellule vive.

Quindi, posizionare un catodo nel mezzo vicino all'EGL ma non direttamente sul tessuto. Quindi, applicare più impulsi elettrici a diverse re