Caricamento di microsfere per introdurre acidi nucleici in cellule coltivate aderenti: una tecnica per caricare plasmidi codificanti proteine fluorescenti in cellule di mammifero aderenti

Inizia con una coltura di cellule di mammifero aderenti in una piastra di coltura. Trasferisci le perle di vetro sterilizzate trattate con alcali, di dimensioni micron, nella camera di un caricatore di perle personalizzato. Coprire l'apertura della camera utilizzando una rete con aperture di dimensioni ottimali per consentire il passaggio delle perle durante il caricamento. Fissare la rete con un gruppo camera di imaging.

Rimuovere il supporto dalla piastra. Pipettare una sospensione di DNA plasmidico codificante la proteina reporter fluorescente nella piastra per una distribuzione uniforme sulle cellule. Utilizzando l'apparato caricatore di perline, disperdere delicatamente un monostrato di perle di vetro sulle celle. Picchiettare brevemente la piastra di coltura con forza adeguata.

Le perle di vetro rotolano brevemente sopra le celle aderenti, mentre il trattamento alcalino le rende meno aderenti alle cellule. L'impatto delle collisioni tra le perle e le cellule trasmette una deformazione adeguata creando interruzioni localizzate nelle membrane cellulari. Questi pori transitori formati di piccole dimensioni facilitano l'assorbimento del DNA plasmidico nelle cellule, impedendo l'i