Elettroforesi su gel di poliacrilammide di sodio dodecil solfato per l'analisi delle proteine: una tecnica per separare e visualizzare le proteine in base al peso molecolare

Iniziare trattando il campione di proteine con un tampone denaturante comprendente un detergente - dodecil solfato di sodio, SDS e un agente riducente - beta-mercaptoetanolo. Scaldalo brevemente. Durante questa fase, il beta-mercaptoetanolo interrompe i legami disolfuro, creando una conformazione dispiegata della proteina.

Le proteine dispiegate con i loro amminoacidi idrofobici esposti si legano alla SDS caricata negativamente e acquisiscono una carica negativa uniforme. Aggiungere un colorante di tracciamento adatto al campione per la visualizzazione in tempo reale.

A questo punto, caricare il campione e il marcatore di dimensioni molecolari standard in pozzetti separati presenti nel gel di impilamento, lo strato superiore del gel di poliacrilammide contenente una concentrazione inferiore di polimeri di acrilammide reticolati.

Collegare l'apparecchio in gel riempito di tampone all'alimentazione.

In presenza di un campo elettrico, le proteine caricate negativamente migrano liberamente verso l'anodo e si impilano insieme per entrare nel gel risolutivo, lo strato inferiore contenente un gel a concentrazione più elevata.

Nel gel risolutivo, le proteine iniziano a migrare in base alle