Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo

Benvenuti nel Kramer Lab. Sono Matt Korn, dipartimento di Neurobiologia e Comportamento presso l'Università della California Irvine. Oggi ti mostrerò come preparare le uova di gallina per una varietà di manipolazioni, tra cui il posizionamento delle perline, l'iniezione di coloranti o l'esplorazione degli ovo.

Quindi, senza ulteriori indugi, iniziamo. Ok, quindi andiamo avanti e puliamo l'uovo. Il motivo è che ci sono molte cose che potrebbero essere messe nell'incubatrice.

Lo sigilleremo con del nastro adesivo. Non vogliamo che piccoli pezzi vadano in giro dove la finestra prenderà l'ovulo e aumentino la possibilità che l'embrione muoia nel momento in cui vogliamo estrarlo. Quindi, se hai visto dall'incubatrice, le uova sono sedute con il lato grande rivolto verso l'alto.

Quindi quello che faremo è andare avanti e prendere l'uovo e girarlo di lato. E questo farà due cose. Uno, la nostra finestra sarà proprio qui, e in secondo luogo, l'embrione deve fluttuare verso l'alto in modo da poter fare qualsiasi tipo di manipolazione.

Quindi ne esporrò alcuni qui, dalla rastrelliera che era nell'incubatrice a un portauova di cartone. Questo è in realtà il pezzo che viene fornito nella scatola quando le uova vengono consegnate. Quindi, per oggi, andremo avanti e lo useremo solo per contenere le uova.

Ora l'accordo è, dipende da te. Mi piace farlo in questo modo perché posso accedere a tutte le uova in qualsiasi momento e nessuna di esse si tocca. Nel caso in cui dovessi trovarne uno allentato che aveva una crepa e dovesse cadere, hanno tutti un po' di spazio l'uno dall'altro.

Quindi andrò avanti e prenderò la mia garza qui e tirerò fuori una bella pila come questa e la dividerò in due. Prenderò il 70% di alcol qui e lo riempirò fino a quando non riuscirò a sentire il fondo che si inumidisce. E questo perché userò l'intera pila per tamponare tutti gli ovuli.

Quindi ne tolgo un paio dalla parte superiore, vado avanti e faccio davvero la parte superiore, ma in effetti quasi giro l'intero uovo qui. E dopo che questo è fatto, l'alcol si asciuga abbastanza rapidamente e poi possiamo andare avanti e metterci sopra del nastro adesivo. Il nastro adesivo si attaccherà bene e quando finisco un set, di solito il primo è asciutto e possiamo procedere alla fase successiva della preparazione delle uova.

Quindi, di nuovo, rimettilo lì nella spazzatura e siamo pronti per passare al passaggio successivo. Ok, quindi ora che tutti i nostri ovuli sono stati tamponati con l'alcol, possiamo andare avanti e fare un foro di drenaggio sul lato grande dell'uovo, la base dell'uovo. E questo ci permetterà di entrare ed estrarre un po' di albumina perché se non estraiamo l'albumina, l'embrione non si posiziona correttamente.

Non possiamo fare alcuna manipolazione. Quindi questo implica solo che io prenda una lama e prenda questo nastro di plastica. È un po' elastico, il che è fantastico.

Non solo ci permette di espanderci su un buco se è un po' più grande di quanto vorremmo, ma quando copriamo effettivamente l'intero uovo, avremo bisogno di allungarlo. Quindi l'area in cui si troverà la finestra è interamente coperta. Quindi vado avanti e taglio il pezzo in questo modo e poi faccio una striscia di circa un millimetro.

E poi da questo posso fare un pezzo di nastro quadrato di circa un millimetro. E poi da questo andrò avanti e lo metterò appena sopra a sinistra della data. Basta metterlo lì e puoi vederlo.

Si attacca molto bene. Poi posso tornare alla striscia che ho già fatto, tagliare un altro pezzo di nastro adesivo millimetrico. E di nuovo, posizionalo a sinistra del numero lì, che in realtà è la parte superiore dell'uovo.

Ora che l'abbiamo girato lateralmente, è a destra. E un altro pezzo qui. Ora non indosso i guanti perché indossare i guanti farà aderire questo nastro adesivo ai guanti e mi sono lavato le mani.

A questo punto non sono davvero preoccupato per nient'altro che contamini l'attivo. Quindi vado avanti e prendo un paio di forbici con la punta acuminata. Vado al centro di dove ho posizionato il nastro e lo giro in senso antiorario fino a quando non lo riempio un po'.

E vedrete che c'è un piccolo buco lì. Ora il foro non deve essere molto grande perché una volta che abbiamo inserito questa siringa, il foro sarà abbastanza grande. Ma questo è così che non entriamo direttamente con un ago e cerchiamo di rompere l'uovo con quello, perché spesso questo porterà alla rottura dell'intero lato dell'uovo.

Allora non possiamo più usare l'uovo. Ok, quindi ora vado avanti e scolo l'uovo. Abbiamo quel bel foro sul lato e userò questa siringa da 10 millilitri e un ago di calibro abbastanza grande per andare avanti ed estrarre l'albumina.

Ora voglio circa tre o quattro millilitri, sicuramente più di tre, non molto più di quattro e mezzo o cinque. Questo permetterà al nostro embrione che ora si trova in cima di cadere un po' lontano dal guscio. E allora saremo in grado di fare le nostre manipolazioni.

Quindi, entrando con un angolo di 45 gradi, sono sotto il tuorlo. E poi voglio solo girarlo un po' alla mia destra solo per intrufolarmi lì sotto e puoi sentire la punta dell'ago che tocca appena il fondo dell'uovo. E andrò avanti e ne estrarrò solo circa tre o quattro e viene fuori abbastanza bene.

Vado avanti e metto quell'albumina nel mio secchio della vita qui e ora posso continuare con le altre uova. Ok, quindi vado avanti e continuo. E vedrete qui che il foro che ho fatto per lo scarico è un po' più grande di quanto vorrei, ma che va bene.

Quello di cui voglio preoccuparmi è che mentre infilo l'ago non lo rompo più. Quindi andrò avanti e lo farò. Ok, quindi posso già vedere che l'uovo ha un po' di crepa.

Ora le piccole crepe vanno bene, ma devi preoccuparti quando si estendono su un altro piano dell'uovo. E in questo caso lo fa. Lo si può vedere dal buco.

Si estende praticamente fino alla cima. E infatti, è qui che si siederà la nostra finestra. Quindi, sfortunatamente per questo uovo, andremo a scartare questo.

E non c'è niente di speciale nello scartarlo. Non è necessario scrivere un protocollo particolare o altro. Andrò avanti e lo metterò nel secchio dei rifiuti.

Usiamo questi bidoni della spazzatura neri per designarli come rifiuti animali, ma a parte questo, è già stato risolto. Possiamo passare al prossimo uovo. Ok, ora che abbiamo drenato tutte le nostre uova, possiamo andare avanti e coprire il foro di scarico.

Ora questo è importante perché se non facciamo l'interno dell'incubatrice, possiamo ottenere una tremenda evaporazione di ciò che rimane dell'albumina. E poi un uovo secco è un uovo morto. Quindi andremo avanti e prenderemo più o meno la stessa dimensione di nastro adesivo e lo posizioneremo sopra il foro e non dovremo preoccuparci di entrare di nuovo in questo buco.

In alcuni casi, se decidi di provare a drenare più albumina da un uovo, una volta aperto, questo foro funge da area sigillata in cui puoi quindi infilare un ago e non perderai molta albumina. Va bene, è vero? Ok, quindi ora andiamo avanti e copriamo le uova con un pezzo di nastro adesivo di buone dimensioni.

E lo paragono un po' come mettere un pezzo di nastro adesivo su un palloncino prima di metterci dentro un piccolo spillo. La cosa bella è che il palloncino non scoppia e in questo caso un po' di nastro adesivo sopra l'uovo. L'uovo non si rompe in più punti e poi la finestra può essere sigillata e poi quando la finestra si chiude, perché l'abbiamo usata con del nastro adesivo, crea una bella piccola tenuta e non dobbiamo preoccuparci di alcuna evaporazione.

Quindi potete vedere che la dimensione del nastro è probabilmente il più grande che ho tagliato finora, ma anche in questo caso andrò avanti e lo allungherò un po' e lo tirerò davvero, un po' di tensione lì e lo metterò sopra l'uovo. E io verrò sul retro e lo allungherò con molta attenzione sopra l'uovo in modo che non ci siano pieghe proprio sopra la mia finestra. E puoi resettare un po' il nastro.

È, non si attacca così tanto di cui devi preoccuparti. Una volta che è bloccato, è bloccato. E potete vedere che quest'area generale è dove andrò avanti e taglierò la finestra.

Ok, ora che abbiamo del nastro adesivo su tutte le uova, possiamo andare avanti e tagliare una finestra sulla parte superiore. Questa può essere la parte più difficile e spesso è qui che perderai la maggior parte delle tue uova. Quindi andrò avanti e darò una buona passata alle mie forbici con una garza che conteneva alcol e poi andrò avanti e le asciugherò semplicemente.

L'alcol si asciuga praticamente da solo, ma non vuoi che l'alcol vada direttamente nell'uovo. Quindi andrò nel mezzo di dove si trova il nastro e, di nuovo, userò quel movimento in senso antiorario in senso antiorario finché non lo sentirò rompersi un po'. E poi so che la mia lama è dentro.

E poi voglio spostare le mie forbici in modo che siano quasi piatte contro la superficie dell'uovo. E poi fai dei piccoli tagli finché non riesco a mettere l'intero pezzo di forbice lì dentro. E tornerò dall'altra parte una volta che avrò fatto circa un semicerchio e non voglio completare il cerchio perché voglio una finestra, ma poi posso semplicemente andare avanti e aprire l'uovo.

E in questo momento sembra che ci siano più o meno l'età che mi aspettavo che avessero, non hanno molti vasi sanguigni, ma c'è un po' di sangue intorno a dove si trova l'embrione, principalmente dalla regione del dente di leone che il sangue ha iniziato e il battito cardiaco è scomparso. Quindi lo chiuderò, lo lascerò stare sopra in quel modo e tornerò di nuovo e andrò avanti e chiuderò le finestre. E di nuovo, solo, semplicemente piatto in superficie e indietro dall'altra parte.

E va bene, quindi abbiamo un paio di bolle qui e si scopre che l'embrione è di lato. Ora ci sono due cose che possiamo fare in questo momento. Se abbiamo un sacco di uova e non ci preoccupiamo di usarle tutte, possiamo andare avanti e buttare queste.

Oppure quello che possiamo fare è chiudere la finestra e impostarla in modo che l'embrione fluttui fino alla cima dove lo vogliamo di nuovo. E nel momento in cui ci arriviamo nelle nostre manipolazioni, potrebbe essere dove lo vogliamo. In caso contrario, possiamo scartarlo in quel momento.

Quindi quello che ho fatto qui è semplicemente impostarlo ad angolo. Avrai un po' di deflusso di albumina, ma aiuterà quell'embrione a tornare dove deve essere. Ok, quindi ora che abbiamo tutte queste finestre, dobbiamo assicurarci che siano chiuse e vogliamo solo che siano chiuse prima di fare qualsiasi manipolazione.

E poi possiamo andare avanti e richiudere l'uovo. Ma se abbiamo una finestra aperta, a volte il giogo può scivolare fuori. Se sai che l'uovo si ribalta un po' quando cammini da una stanza all'altra, non vuoi che cada tutto.

Quindi tutto quello che sto facendo è tagliare un altro millimetro di lunghezza, o mi dispiace, un millimetro di larghezza, probabilmente circa tre, due o tre millimetri e un pezzo di lunghezza, del nastro di plastica. E mi piace metterlo lì proprio nel mezzo. E se riesco a tirarlo giù davanti all'uovo, allora lo rende stretto.

E si può vedere dove si inserisce la finestra, proprio dove c'era l'altro nastro adesivo, dove abbiamo tagliato la finestra e questo la rende abbastanza sigillata per questa volta. Voglio dire, andremo avanti e faremo alcune manipolazioni in un solo minuto, quindi non c'è bisogno che sia completamente ermetico. Ecco come prepari e metti in finestra le tue uova.

Quindi buona fortuna con i tuoi esperimenti.