Name: Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 15 min 1 s
Description: Impara a preparare uova di pollo per esperimenti neurobiologici con tecniche di finestre e iniezione di coloranti. Questo metodo ottimizzato migliora la sopravvivenza embrionale per studi di mappatura del destino cellulare.

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1. Rimuovere le uova da incubatore <ol><li> Mantenere a 37 ° C con umidità relativa di sopra del 60%. </li><li> Rimuovere le uova; girare le uova 90 ° in modo che la base di grandi dimensioni si trova orizzontale. </li></ol> 2. Tampone uova di sterilizzare <ol><li> Saturare una pila di garza non sterile con 70% di etanolo. </li><li> Utilizzare 2-3 pezzi per tampone fino a 5 uova. Scartare quando la garza è sporca. </li></ol> 3. Preparazione albume sito rimozione <ol><li> Tagliare e inserire un 1 pezzo &quot;x 1&quot; di nastro in plastica 3M appena lasciato la base per proteggere la zona dove l&#39;albumina saranno tratti. </li></ol> 4. Rimozione di albume <ol><li> Utilizzare la punta di un paio di forbici per fare un piccolo foro al centro del nastro. </li><li> Usando una siringa da 10 cc con una 18-gauge, 1-inch ago, forare lentamente l&#39;ago attraverso il foro praticato dalle forbici. </li><li> Guidare l&#39;ago fino ad un angolo di 45 ° C verso il fondo dell&#39;uovo. </li><li> Inclinare l&#39;ago verso il centro ed elaborare 3-4 ml di albume. </li></ol> 5. Windowing <ol><li> Tagliare un 3 &quot;x 3&quot; pezzo di nastro adesivo di plastica e si estendono per adattarlo in cima l&#39;uovo. Estendere gli angoli della piazza intorno alle estremità arrotondate della superficie orizzontale delle uova, facendo attenzione a non tirare troppo duro. Tirare il nastro in modo che sia tenuta contro la superficie delle uova, senza pieghe. </li><li> Utilizzando un paio di nitide-dritto 4 &quot;forbici dissezione, torcere un buco in basso al centro dell&#39;area dove è stato messo del nastro. Lentamente guidare la lama inferiore delle forbici nell&#39;uovo avendo cura di tenere le punte contro l&#39;interno della il guscio. diretto la lama verso la base e lentamente cominciano a tagliare il guscio. procedere in senso antiorario moda, fermandosi poco prima di raggiungere il centro in alto. Rimuovere le forbici e ripetere andando nella direzione opposta fino a quando solo un po &#39;piccolo del uovo rimane attaccato. Verificare che l&#39;ovulo è fecondato. chiudere la finestra. </li></ol> 6. Chiusura, la riapertura e la sigillatura l&#39;uovo. <ol><li> Taglio di un 2-3 &quot;lungo da 1 / 2&quot; nastro di plastica largo e chiudere la finestra in modo che si inserisce di nuovo nel buco che è stato tagliato. Prendiamo un altro x 1 &quot;1 pezzo di nastro adesivo e sigillare il foro da cui è stato drenato l&#39;uovo. Utilizzare un paio di pinze per riaprire l&#39;uovo di fare qualsiasi manipolazione. Quando si è pronti a tornare le uova nell&#39;incubatrice, tagliare un pezzo del nastro che è abbastanza grande per sigillare la finestra e coprire l&#39;intera superficie orizzontale dell&#39;uovo. </li></ol>

<ol><li>Cramer, K. S., Fraser, S. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 224, 138-151 (2000).</li>
<li>Cramer, K. S., Bermingham-McDonogh, O., Krull, C. E., Rubel, E. W. Dev Biol. 269, 26-35 (2004).</li>
<li>Cramer, K. S., Cerretti, D. P., Siddiqui, S. A. Dev Biol. 295, 76-89 (2006).</li>
<li>Huffman, K. J., Cramer, K. S. Dev Neurobiol. 67, 1655-1668 (2007).</li>
<li>Krull, C. E. Dev Dyn. 229, 433-439 (2004).</li>
<li>Gerlach-Bank, L. M., Cleveland, A. R., Barald, K. F. Dev Dyn. 229, 219-230 (2004).</li>
</ol>

Questo metodo permette di lunghi tempi di sopravvivenza dopo manipolazioni sperimentali. Per esempio, dye-etichettatura studi hanno permesso la sopravvivenza di E10 o poi in uno studio di rilevamento destino (1). Inoltre, è stato utilizzato per gli studi in elettroporazione ovo che forniscono l&#39;alterazione dei livelli di espressione genica e sviluppo necessari per procedere alle fasi successive di sviluppo (2-6). Questa tecnica finestre può essere utilizzato in combinazione con qualsiasi procedura che richiede la sopravvivenza dopo le m...

<table><tbody><tr><td>Incubatrice rotante</td><td> </td><td>Profi</td><td></td><td>Mantenere a 37&amp;deg; gradi con umidità relativa superiore al 60%</td></tr><tr><td>EtOH al 70 %</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Garza</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Nastro plastico 3M</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr><tr><td>Siringa da 10 cc</td><td> </td><td></td><td></td><td>1/singolo uovo</td></tr><tr><td>Aghi da 18G</td><td> </td><td></td><td></td><td>Ago da 1&amp;#189; pollice, 1/siringa</td></tr><tr><td>Forbici da dissezione</td><td> </td><td></td><td></td><td>Lame dritte affilate da 4&quot;</td></tr><tr><td>Uova fecondate</td><td> </td><td></td><td></td><td> </td></tr></tbody></table>

le uova di pollo finestre di studi sullo sviluppo

Windowing Chicken Eggs for Developmental Studies

Lo studio di sviluppo è stato molto semplificato dall&#39;uso del embrione di pollo come modello sperimentale. La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. Inoltre, consente di perturbazioni molecolare di diversi tipi, tra cui il posizionamento di proteine ​​rivestite perle e l&#39;introduzione di DNA plasmidico mediante elettroporazione in ovo. Questi esperimenti hanno fornito dati importanti per lo sviluppo del sistema nervoso centrale e periferico. Per molti di questi studi, è necessario aprire il guscio d&#39;uovo e richiudere senza perturbare la crescita dell&#39;embrione. L&#39;embrione può essere esaminata a successivi stadi di sviluppo con la riapertura del guscio d&#39;uovo. Mentre ci sono diversi metodi eccellente per l&#39;apertura di uova di gallina, in questo articolo si dimostra un metodo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza. In questo metodo, l&#39;uovo si basa su un lato e una piccola finestra è tagliata nella shell. Dopo la procedura sperimentale, la shell viene utilizzato per coprire l&#39;uovo per la durata del suo sviluppo. Nastro in plastica trasparente sovrastante il guscio protegge l&#39;embrione e aiuta a mantenere l&#39;idratazione durante il resto del periodo di incubazione. Questo metodo è stato utilizzato a partire due giorni di incubazione e ha permesso la sopravvivenza attraverso matura età embrionale.

La facilità di accessibilità di un embrione ha permesso per gli esperimenti di mappare i destini delle cellule utilizzando diversi approcci, tra cui pulcino di quaglia chimere ed etichettatura colorante focale. In questo articolo mostriamo un metodo di preparazione uovo che è stato ottimizzato per i lunghi tempi di sopravvivenza.

Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo

Lo studio dello sviluppo è stato notevolmente agevolato dall'impiego dell'embrione di pollo come modello sperimentale. La facilità di accesso all'embrione ha...

Benvenuti al Kramer Lab. Sono Matt Korn, dipartimento di Neurobiologia e Comportamento presso l'Università della California di Irvine. Oggi vi mostrerò come preparare uova di pollo per diverse manipolazioni, inclusa la collocazione di microsfere, l'iniezione di coloranti o l'esplorazione in ovo.Quindi, senza ulteriori indugi, iniziamo. Bene, procederemo a pulire l'uovo. Il motivo è che nell'incubatrice potrebbero essersi depositate numerose sostanze.Chiuderemo questo con del nastro adesivo. Non vogliamo che piccole particelle penetrino nell'area in cui la finestra verrà aperta per accedere all'uovo, aumentando così la probabilità che l'embrione muoia prima che lo preleviamo. Quindi, come avete visto dall'incubatrice, le uova sono posizionate con il lato più grande rivolto verso l'alto.Quello che faremo è prendere l'uovo e girarlo semplicemente di lato. Questo avrà due effetti: innanzitutto, la nostra finestra si troverà proprio qui, e in secondo luogo, l'embrione dovrà galleggiare verso l'alto in modo da poter effettuare qualsiasi tipo di manipolazione.Quindi ne preleverò alcuni dal rack che si trovava nell'incubatrice per posizionarli in un portauova di cartone. Questo è effettiva

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Biology

Biologia

Un approccio per l'analisi della migrazione e il destino finale di aviaria cellule della cresta neurale a quaglie-chick embrioni chimera è descritta. Questo metodo è una tecnica semplice e diretto per il tracciamento cellule della cresta neurale durante la migrazione e la differenziazione che sono altrimenti difficili da distinguere all'interno di un embrione di pollo non manipolata.

Analisi della migrazione cresta neurale e la differenziazione delle specie da Cross-trapianto

In questo video, descriviamo una tecnica per aprire il guscio di un uovo di gallina fecondato per esporre la sua membrana corioallantoica o CAM che trasporta una rete di vasi sanguigni ramificati. La CAM esposta può essere utilizzata per la modellazione di ovuli tumorali.

Finestra dell'uovo: un metodo per aprire il guscio dell'uovo di gallina fecondato per esporre la vascolarizzazione della membrana corioallantoica

Visualizzare e accedere all'embrione di pollo durante lo sviluppo può essere impegnativo. Abbiamo sviluppato un metodo ex ovo che è semplice, economico e può essere facilmente utilizzato in classe o in un ambiente di ricerca. Questo metodo consente l'accesso all'embrione nelle fasi avanzate dello sviluppo embrionale (HH 40).

Ottimizzato Ex-ovo Coltura di Chick embrioni a stadi avanzati di sviluppo

Questo protocollo descrive tre metodi su come ottenere e utilizzare embrioni di pollo di età compresa tra 5 e 8 giorni e la loro membrana corioallantoica (CAM) come modello in vivo per studiare l'imaging ecografico con contrasto e la somministrazione di farmaci mediata da microbolle.

La preparazione di embrioni di pollo ex ovo e vasi della membrana corioallantoica come modello in vivo per l'imaging ecografico con mezzo di contrasto e studi di somministrazione di farmaci mediati da microbolle

Questo è un metodo efficace per lo screening di soppressori o driver di metastasi del cancro. Le cellule, trasdotte con una libreria di espressione, vengono iniettate nella vascolarizzazione della membrana corioallantoica di pollo per formare colonie metastatiche. Le colonie con ridotta o aumentata invasività vengono asportato, espanse, reiniettate per confermare il loro fenotipo e, infine, analizzate utilizzando il sequenziamento ad alto rendimento.

Scoperta di regolatori metastatici utilizzando un modello di membrana corioallantoica di pulcino intravitale rapido e quantitativo

Gli embrioni di pollo, come modello di sviluppo classico, vengono utilizzati nel nostro laboratorio per valutare le cardiotossicità dello sviluppo a seguito dell'esposizione a vari contaminanti ambientali. I metodi di esposizione e i metodi di valutazione morfologica/funzionale stabiliti sono descritti in questo manoscritto.

Utilizzo dell'embrione di pollo come potente strumento nella valutazione delle cardiotossicità dello sviluppo

È stata sviluppata una solida metodologia per condurre studi di ricerca sull'alimentazione ovo utilizzando uova di pollo commerciali non incubate per testare la capacità di composti naturali e sintetici, in questo caso, nicotinamide riboside, di influenzare lo sviluppo e la crescita muscolare.

In zona Ovo Alimentazione di uova di pollo commerciali: un metodo accurato e riproducibile per influenzare lo sviluppo e la crescita muscolare

Il test del tallone imbevuto prevede la consegna mirata del reagente di prova in qualsiasi momento dello sviluppo per studiare la regolazione della differenziazione cellulare e della morfogenesi. Viene presentato un protocollo dettagliato, applicabile a qualsiasi modello animale sperimentale, per preparare tre diversi tipi di perline imbevute e impiantarle nell'interdigit di un embrione di pollo.

Analisi della differenziazione cellulare, della morfogenesi e del pattern durante l'embriogenesi del pollo utilizzando il test Soaked-Bead

Abbiamo usato tecniche standard di risposta uditiva del tronco cerebrale (ABR) e le abbiamo applicate ai polli da cova, un modello aviario precoce per la funzione uditiva. Il protocollo delinea in dettaglio le tecniche di preparazione degli animali e di acquisizione ABR, con passaggi che potrebbero tradursi in altri modelli aviari o roditori.

Valutazione della risposta uditiva del tronco cerebrale nei cuccioli di pollo

Il pulcino è un organismo modello economico, accessibile e ampiamente disponibile per una varietà di studi. Qui, una serie di protocolli è dettagliata per comprendere i meccanismi molecolari alla base dello sviluppo e della rigenerazione dell'orecchio interno aviario.

Metodi Ovo ed Ex Ovo per studiare lo sviluppo dell'orecchio interno aviario

Impara a preparare uova di pollo per esperimenti neurobiologici con tecniche di finestre e iniezione di coloranti. Questo metodo ottimizzato migliora la sopravvivenza embrionale per studi di mappatura del destino cellulare.

Le uova di pollo finestre di Studi sullo sviluppo

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