Nano-iniezione virale intratoracica per studiare le interazioni ospite-virus nei moscerini adulti

Prendi il maschio anestetizzato wild-type e mutante Dicer-2 Drosophila su una piastra per iniezione sotto uno stereomicroscopio. Assicurati che le mosche siano prive di batteri simbiotici che sopprimono la replicazione del virus a RNA.

Inoculare i moscerini per via intra-toracica con un nano-iniettore contenente una sospensione virale di RNA a singolo filamento a senso positivo.

Il virus entra nella cellula ospite attraverso l'endocitosi mediata dal recettore e si replica producendo RNA intermedio a doppio filamento. Il recettore di riconoscimento del modello ospite Dicer-2 elabora l'RNA virale a doppio filamento in piccoli RNA interferenti, siRNA.

Il siRNA si lega al complesso di silenziamento indotto dall'RNA, RISC, dove viene rimosso il suo filamento complementare. I siRNA caricati con RISC si legano ad altri RNA virali tramite appaiamento di basi complementari, causando la degradazione dell'RNA virale e il silenziamento genico.

L'interazione tra Dicer-2 e RNA virale attiva le cascate di segnalazione antivirale a valle, producendo proteine antivirali. Queste proteine antivirali interagiscono con la Janus chinasi delle cellule ospiti vicine, o JAK, recettori delle citochine legat