JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:36 min. • July 8th, 2025
Per studiare la risposta immunitaria della Drosophila contro i microbi patogeni, assumere una sospensione di patogeni batterici vitali. Immergere un ago sterile nella sospensione, raccogliendone una piccola quantità.
Posizionare una mosca anestetizzata sotto un microscopio da dissezione. Con l'ago infetto, pungere la mosca sulla placca sternopleurica del torace. La puntura introduce batteri nell'emolinfa, il liquido circolatorio nella cavità del corpo.
Metti le mosche infette all'interno di una fiala contenente cibo per mosche e conservale per un periodo adeguato.
I batteri utilizzano l'emolinfa come ricca fonte di sostanze nutritive e si moltiplicano, provocando un'infezione sistemica. L'emolinfa contiene emociti, cellule effettrici immunitarie circolanti.
L'emolinfa è anche associata al corpo grasso, un tessuto specializzato per l'immagazzinamento di energia. I recettori di riconoscimento dei modelli sulle cellule del corpo adiposo interagiscono con i batteri. Questa interazione induce le cellule a secernere peptidi antimicrobici, mediando l'uccisione batterica.
Gli emociti circolanti interagiscono con i batteri tramite i recettori fagocitici, causando il loro inghiottimento nei fagosomi e provocando la degradazione batterica.
Un sottoinsieme degli agenti patogeni elude la risposta immunitaria dell'ospite, portando alla morte delle mosche.
Monitorare la mortalità delle mosche ed eseguire saggi a valle per valutare la risposta immunitaria contro l'agente patogeno.
Per preparare la penna infettante, sciogliere l'estremità di un puntale per micropipetta da 200 microlitri e inserire uno spillo da 0,15 millimetri nella plastica fusa. Lasciare solidificare la plastica in modo che il perno sia tenuto in posizione con 0,5 centimetri di perno che si estendono dalla plastica.
Anestetizzare le mosche con anidride carbonica e pungere le mosche nella placca pleurica sternale del torace con l'ago evitando i siti di attacco delle ali e delle zampe. Rimuovere le mosche dal perno delle minuzie usando una pinza morbida. Assicurati di immergere il perno nella sospensione batterica tra la puntura di ogni mosca.
Metti le mosche pungenti in una lima fresca con un nuovo mezzo di coltura per mosche appoggiando la fiala su un lato fino a quando tutte le mosche non si sono riprese dall'anestesia.