Imaging di fase quantitativo tridimensionale per la caratterizzazione di sottotipi di linfociti
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:37 min. • July 8th, 2025
Caricare una sospensione di sottotipo linfocitario in una camera di imaging.
Posizionare la camera sul tavolino del microscopio 3D per imaging di fase quantitativa.
Regola i parametri del microscopio e il piano focale per un imaging ottimale.
Durante l'imaging dei linfociti, il raggio laser si divide in fasci di riferimento e di campione.
Il dispositivo digitale a microspecchi, dotato di una serie di microspecchi nel percorso del fascio di campioni, consente al raggio di ruotare di 360 gradi attorno all'asse ottico.
Ogni fascio che passa attraverso il linfocita subisce uno sfasamento basato sulle variazioni dell'indice di rifrazione all'interno della cellula.
Il campione risultante e i raggi di riferimento si ricombinano, formando un ologramma 2D.
Una sequenza di ologrammi contenenti informazioni sulla fase e sull'ampiezza da diverse angolazioni viene catturata attraverso la rotazione del fascio attorno al linfocita.
Acquisisci più ologrammi di sfondo con angoli di illuminazione variabili, esclusi i linfociti.
Utilizzando l'algoritmo di tomografia a diffrazione, ricostruire gli ologrammi in un tomogramma dell'indice di rifrazione 3D, fornendo informazioni morfologiche e biochimiche
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici