Name: Incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il Duct Wharton (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-05-14T14:00:00.000+00:00
Duration: 5 min 18 s
Description: Impara la cannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il dotto di Wharton. Questa tecnica consente di infondere cellule staminali per la rigenerazione ghiandolare, con applicazioni potenziali in medicina rigenerativa.

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Gli autori sono grati al Dott. Ana Cotrim per la consulenza tecnica e al Dott. Monzur Murshed per le attrezzature. Questo lavoro è stato in parte finanziato dal Canadian Institutes per la ricerca medica.

1. Descrizione procedurali <ol><li> Iniettare per via sottocutanea 1 ml / g di peso corporeo di 0,5 mg / ml monoidrato atropina solfato (Cat # 11330, Fluka, USA) in ogni mouse per evitare che le secrezioni salivari di compromettere il movimento delle infusioni. </li><li> Anestetizzare ogni mouse con 1 peso corporeo microlitri / g di un mg / 100 ml di ketamina e 20 mg / ml xylazina (Phoenix scientifico, AR, USA) soluzione iniettata intraperitoneale (IP) </li><li> Posizionare il mouse su una misura piattaforma in plastica in posizione ventrale: incisivi superiori sono bloccati su un filo metallico, e gli incisivi mandibolari sono agganciati su una corda elastica per tenere la bocca aperta. </li><li> Utilizzare una siringa per insulina con una 29-gauge (Cat # 600145, Tyco Healthcare, MA, USA) posto all'interno di un tubo in polietilene 0,58 mm di diametro (Cat # 427410, Becton Dickinson, MD, USA; Fig. 2). Il tubo in polietilene è inserita 5mm rispetto alla punta di una 29-gauge. L'ago viene utilizzato come una guida rigida per spostare il tubo in polietilene nel condotto della Wharton. Il tubo in polietilene è inserita 3-5 mm all'interno del condotto. Da notare che solo il tubo in polietilene entra nel condotto della ghiandola salivare mentre l'ago rimane al di fuori del condotto. Iniettare 50ul del filtrata 0,4% soluzione trypan blu macchia (Cat # 15250, Gibco, USA) nella ghiandola sottomandibolare tramite il dotto di Wharton, che si trova proprio sotto la lingua. L'infusion viene consegnato costantemente con pressione positiva sul pistone siringa; il dito rimane sul pistone anche dopo tutti l'infusione è stata consegnata alla ghiandola, al fine di evitare un riflusso di infusione intra-orale. La soluzione trypan blu è usato nel video come colorante per dimostrare la tecnica. </li><li> opo l'iniezione della soluzione trypan blu, il mouse è stato l'eutanasia prima dissezione. La ghiandola salivare è esposto chirurgicamente al fine di determinare la quantità delle infusioni hanno effettivamente rimaste nella ghiandola. </li></ol> 2. Rappresentante dei risultati: Dopo le infusioni sono state iniettate, il mouse è stato sezionato per mostrare chirurgicamente post-cannulata ghiandole salivari. Come mostrato su Immagine-2, la colorazione scura del condotto della Wharton fornisce la prova che la soluzione trypan blu è stato infuso con successo. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig1.jpg" alt="Figura 1"> Figura 1. Incannulamento della ghiandola sottomandibolare del mouse. <img src="/files/ftp_upload/3074/3074fig2.jpg" alt="Figura 2"> Figura 2. Polietilene tubo è racchiuso attorno alla punta di una 29-gauge. L'ago della siringa è usata come una guida rigida per spostare il tubo in polietilene nel condotto della Wharton. Il tubo in polietilene è inserita (cannulata) 3-5 mm all'interno del condotto. Da notare che solo il tubo in polietilene entra nel condotto della ghiandola salivare mentre l'ago rimane al di fuori del condotto.

<ol><li>Fox, P. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Acquired+salivary+dysfunction.+Drugs+and+radiation%5BTitle%5D)+AND+%22Ann+N+Y+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Acquired salivary dysfunction. Drugs and radiation.</a> Ann N Y Acad Sci. 842, 132-137 (1998).</li>
<li>Bhide, S. A., Miah, A. B., Harrington, K. J., Newbold, K. L., Nutting, C. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Radiation-induced+xerostomia%3A+pathophysiology%2C+prevention+and+treatment%5BTitle%5D)+AND+%22Clin+Oncol+%28R+Coll+Radiol%29%22%5BJournal%5D)">Radiation-induced xerostomia: pathophysiology, prevention and treatment.</a> Clin Oncol (R Coll Radiol). 21, 737-744 (2009).</li>
<li>Redman, R. S., Ball, W. D., Mezey, E., Key, S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dispersed+donor+salivary+gland+cells+are+widely+distributed+in+the+recipient+gland+when+infused+up+the+ductal+tree%5BTitle%5D)+AND+%22Biotech+Histochem%22%5BJournal%5D)">Dispersed donor salivary gland cells are widely distributed in the recipient gland when infused up the ductal tree.</a> Biotech Histochem. 84, 253-260 (2009).</li>
</ol>

Tutti gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato di Animal Care Università ed erano in linea con gli orientamenti del Consiglio canadese di prodotti per animali.

Una difficoltà con questo metodo incannulazione è quello di impedire il riflusso della soluzione iniettata. Anche se la soluzione trypan blu ha temporaneamente migrato nella ghiandola salivare con successo, la secrezione della saliva potrebbe interferire con le infusioni e causare riflusso della soluzione trypan blu fuori della ghiandola. Come precauzione, oltre a utilizzare atropina per inibire la secrezione di saliva, la cannula di polietilene dovrebbero rimanere nel canale della Wharton e il pistone della siringa det...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Tipo </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Atropina </td><td> Droga </td><td> Fluka </td><td> 11330 </td><td> Per inibire la secrezione della saliva </td></tr><tr><td> Ketamina </td><td> Droga </td><td> Phoenix scientifico </td><td></td><td> Sedazione </td></tr><tr><td> Xylazina </td><td> Droga </td><td> Phoenix scientifico </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Tubi in polietilene (0,58 mm di diametro) </td><td> Tubo </td><td> Intramedic PE-10, Becton Dickinson Diagnostic Systems </td><td> 427410 </td><td> Per inserire più di punta dell&#39;ago per evitare lesioni durante l&#39;inserimento nel tessuto del dotto di Wharton. </td></tr><tr><td> Ultra insulina siringa Comfort (con un ago 29G) </td><td> Siringa </td><td> Tyco Healthcare </td><td> 600145 </td><td></td></tr><tr><td> 4% trypan blu </td><td> Macchia </td><td> Gibco </td><td> 15250 </td><td></td></tr></tbody></table>

incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il duct wharton

Cannulation of the Mouse Submandibular Salivary Gland via the Wharton's Duct

Grave ipofunzione della ghiandola salivare si trova frequentemente nei pazienti con sindrome di Sjögren e quelli che ricevono l&#39;irradiazione terapeutica nella loro testa e del collo per il trattamento del cancro. Entrambi i gruppi di sintomi esperienza pazienti come xerostomia (secchezza delle fauci), disfagia (compromissione della masticazione e della deglutizione), gravi carie dentale, alterazione del gusto, oro-faringeo infezioni (candidosi), mucosite, dolore e disagio. Un approccio innovativo della medicina rigenerativa per il trattamento delle ghiandole salivari ipo-funzione è speculato in RS Redman, E Mezey et al 2009:. Cellule staminali possono essere depositati direttamente dal incannulazione nella ghiandola come metodo potente nel far rivivere le funzioni della compromissione organo. Presumibilmente, le cellule staminali migrati stranieri differenziarsi in cellule ghiandolari a funzionare come parte della ghiandola salivare ospite. Inoltre, questa tecnica di incannulazione è un metodo di consegna conveniente ed efficace per l&#39;applicazione clinica di trasferimento genico. Qui si illustrano i passaggi necessari per eseguire la procedura incannulazione sulla ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il dotto di Wharton (Fig. 1). C3H topi (Charles River, Montreal, QC, Canada) vengono utilizzati per questo esperimento, che sono stati tenuti in condizioni di pulizia convenzionali alla risorsa McGill University centro animale. Tutti gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato di Animal Care Università ed erano in linea con gli orientamenti del Consiglio canadese di prodotti per animali. Per questo esperimento, una soluzione trypan blu è infusa nella ghiandola attraverso l&#39;apertura del canale della Wharton usando una siringa per insulina con una 29-gauge racchiuso all&#39;interno di un tubo in polietilene. Successivamente, il mouse è sezionato per mostrare che le infusioni migrati nella ghiandola con successo.

Un protocollo per l&#39;incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il dotto di Wharton è descritto. Per questo esperimento, la soluzione trypan blu è usato come un tintore per dimostrare quanto questa tecnica offre efficacemente infusi nella ghiandola mirati, e di suggerire l&#39;affidabilità di questo nuovo approccio clinico come un potenziale farmaco / terapia cellulare per la rigenerazione delle ghiandole salivari.

Incannulazione della ghiandola salivare sottomandibolare del mouse tramite il Duct Wharton

L'ipofunzione grave delle ghiandole salivari è riscontrata frequentemente nei pazienti affetti da sindrome di Sjögren e in coloro che sono sottoposti a irradiazione terapeutica nella loro...

Tutti gli esperimenti sono stati approvati dal Comitato per la Cura degli Animali dell'Università McGill e siamo in conformità con le linee guida del Consiglio Canadese per la Cura degli Animali. L'obiettivo di questo esperimento è quello di somministrare cellule progenitrici o staminali nella ghiandola salivare mandibolare del topo attraverso la cannulazione del dotto di Wharton. Per questo video, viene utilizzata una soluzione di tripan blu come colorante per visualizzare l'infusione cellulare.La ipofunzione delle ghiandole salivari è uno degli effetti collaterali più comuni della sindrome di Sjögren e della radioterapia impiegata nel trattamento del cancro alle regioni della testa e del collo. Il malfunzionamento delle ghiandole salivari può spesso portare a malattie dentali, come infezioni della mucosa orale e carie dentale. Un approccio innovativo della medicina rigenerativa per il trattamento delle ghiandole salivari danneggiate è il seguente.Le cellule staminali possono essere depositate direttamente nella ghiandola mediante cannulazione attraverso i dotti della ghiandola salivare, un metodo potente per ripristinare le funzioni della ghiandola compromessa; presumibilmente, le cellule staminali esterne migrate si differenzieranno in cellule ghiandolari, assumendo un ruolo all'interno della ghiandola salivare. Illustreremo qui i passaggi necessari per eseguire la procedura di cannulazione sulla ghiandola salivare sottomandibolare del topo attraverso il dotto di Wharton. Per questo esperimento, una soluzione triplo blu viene iniettata nella ghiandola attraverso l'apertura del dotto di Wharton utilizzando un ago da 29 gauge e una siringa ultra comfort.Successivamente, il mouse viene dissezionato per dimostrare che le infusioni sono migrate correttamente nella ghiandola. Passaggio uno: un microlitro per grammo di peso corporeo di solfato di atropina monoidrato allo 0,5 milligrammi per millilitro viene iniettato sottocutaneamente in ciascun mouse per impedire che le secrezioni salivari interferiscano con il movimento delle infusioni. Passaggio due: un microlitro per grammo di peso corporeo di una soluzione contenente 100 milligrammi per millilitro di chetamina e 20 milligrammi per millilitro di xilazina viene iniettato intraperitonealmente in ciascun mouse per sedarlo.Passaggio tre. Dopo il processo di sedazione, il topo viene posizionato su una piattaforma. Nella posizione ventrale, l'incisivo mascellare viene bloccato su un filo metallico e l'incisivo mandibolare viene agganciato a un elastico in modo da mantenere la bocca aperta.Passaggio quattro: utilizzando un ago da 29 Gau ultra comfort e una siringa, viene infusa una soluzione di trian blu 0,4% filtrata nella ghiandola salivare sottomandibolare attraverso il dotto di Wharton, che si trova proprio al di sotto della lingua. L'ago è ora orientato verso l'apertura del dotto di Wharton ed è entrato nel dotto per somministrare l'infusione. Passaggio cinque.Immediatamente dopo la procedura di cannulazione, la ghiandola salivare viene esposta chirurgicamente per determinare quanto del liquido infuso è effettivamente rimasto nella ghiandola. Dopo l'iniezione delle infusioni, il topo è stato dissezionato per esporre chirurgicamente la ghiandola salivare post-cannulazione. Come si può osservare in questa immagine, la colorazione scura del dotto di Wharton fornisce una chiara evidenza che la soluzione di blu tripina è stata infusa con successo nel caso di ipofunzione della ghiandola salivare.L'applicazione locale, ovvero l'iniezione di farmaci e cellule mediante questa procedura di cannuolazione, può essere considerata un modo più diretto ed efficace per ripristinare le funzioni delle ghiandole salivari parotidee, sottomandibolari e sottolinguale. Come evidente nei risultati rappresentativi, l'infusione, in questo caso la soluzione di Trian blue, è stata correttamente depositata nella ghiandola salivare sottomandibolare del mouse attraverso il dotto di Wharton. Pertanto, questa tecnica di cannuolazione può essere utilizzata come modello affidabile per la medicina rigenerativa della ghiandola salivare del mouse.Inoltre, come prospettiva futura, questa procedura potrebbe rappresentare un metodo pratico per l'applicazione clinica del trasferimento genico. Sarebbe una grande soddisfazione che questo articolo visivo possa essere utilizzato come strumento efficace per studenti e ricercatori interessati a ulteriori studi nel campo della medicina rigenerativa della ghiandola salivare.

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