Generazione di varianti di fuga dal virus dell'influenza contro gli anticorpi neutralizzanti

Prendi una sospensione del virus dell'influenza, contenente sia ceppi wild-type che mutanti.

Una glicoproteina dell'involucro virale chiamata emoagglutinina, o HA, si lega all'acido sialico sulla superficie della cellula ospite, mediando l'ingresso virale.

Aggiungere un anticorpo neutralizzante in concentrazioni decrescenti che si lega all'HA, bloccando il sito di legame dell'acido sialico.

I ceppi mutanti, portatori di mutazioni nell'HA che aiutano a evitare la neutralizzazione degli anticorpi, sono chiamati varianti di fuga.

Iniettare la miscela in uova di gallina embrionate prive di agenti patogeni, rilasciando i virus nel liquido allantoideo, e incubare.

I

virus neutralizzati dagli anticorpi non possono entrare nelle cellule della membrana corioallantoidea. I virus mutanti non neutralizzati entrano nelle cellule, si replicano e vengono rilasciati nel liquido allantoico.

Raccogliere il liquido allantoico contenente la popolazione virale.

Introdurre un anticorpo specifico per l'HA in concentrazioni decrescenti, che neutralizza gli altri ceppi ad eccezione delle varianti di fuga.

Introdurre i globuli rossi di pollo o RBC. Le varianti di fuga non neutralizzate si legano alle cellul