Un test basato su cellule per valutare l'assorbimento della proteina tau da parte della microglia
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:22 min. • July 8th, 2025
Inizia con una piastra a fondo piatto contenente microglia murina aderita, cellule fagocitiche nel cervello.
Introdurre un terreno privo di siero contenente immunocomplessi. Questi complessi sono costituiti da anticorpi attaccati ad aggregati proteici Tau fosforilati, che si formano durante alcune malattie neurodegenerative.
Gli aggregati Tau sono marcati con un colorante fluorescente verde sensibile al pH.
Durante l'incubazione, questi immunocomplessi interagiscono con i recettori Fc delle cellule microgliali, facilitandone l'inghiottimento.
Questo endosoma contenente immunocomplessi si fonde con un lisosoma, formando un endolisosoma. L'ambiente acido dell'endolisosoma provoca la fluorescenza delle molecole del colorante.
Lavare per rimuovere gli immunocomplessi non internalizzati.
Trattare con una soluzione di tripsina-EDTA per staccare le cellule.
Trasferire la sospensione cellulare su una piastra con fondo a U posizionata sopra il ghiaccio per stabilizzare l'endolisosoma. Pellettare le celle e scartare il surnatante.
Lavare e risospendere le celle con il tampone FACS.
Utilizzando FACS, identificare le singole cellule vive e quantificare l'intensità della fluorescenza verde per
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