Un rilevamento basato su array di peptidi di alloanticorpi HLA anti-donatore nei riceventi di organi

Prendi un array di peptidi derivato dall'antigene leucocitario umano di un donatore di organi o da una sequenza HLA comprendente diversi peptidi sulla membrana di cellulosa.

Ogni peptide porta almeno una discrepanza di aminoacidi tra la sequenza HLA del donatore e quella del ricevente, rappresentando un potenziale epitopo per il rigetto d'organo mediato da anticorpi.

Trattare con un tampone bloccante per prevenire l'interazione anticorpale non specifica.

Aggiungere il siero ricevente raccolto dopo il trapianto d'organo, contenente alloanticorpi.

Questi anticorpi, formati contro l'HLA del donatore, si legano al loro epitopo bersaglio.

Aggiungere un anticorpo secondario coniugato con perossidasi che si lega all'alloanticorpo.

Aggiungere il substrato chemiluminescente e il perossido di idrogeno. La perossidasi utilizza il perossido di idrogeno per ossidare il substrato, emettendo luce.

Scansiona la membrana per ottenere un'immagine.

Aggiungere un tampone per rimuovere gli anticorpi legati. Riprobe con il siero del ricevente pre-trapianto e ottieni un'immagine.

Rispetto all'immagine pre-trapianto, le macchie scure sull'immagine post-trapianto indicano epitopi HLA specifici del donatore