Valutazione della distribuzione intracellulare dei coniugati di anticorpi modificati con peptidi derivati da virus
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:59 min. • July 8th, 2025
Inizia con le cellule di eritroblasto umano aderenti.
Introdurre coniugati anticorpali modificati con peptidi derivati da virus. Questi coniugati contengono una sequenza di localizzazione nucleare, o NLS, dal virus e un residuo di acido colico.
Durante l'incubazione, i coniugati anticorpali interagiscono con i recettori della superficie cellulare e internalizzano all'interno degli endosomi.
L'acido colico nel coniugato aiuta a fuoriuscire dal compartimento endosomiale, consentendo l'accumulo intracellulare, mentre le proteine di trasporto e l'NLS facilitano la loro localizzazione nucleare.
Introdurre la tripsina e il tampone contenente EDTA per staccare le cellule e rimuovere i coniugati legati alla superficie.
Aggiungere terreni arricchiti con siero per inibire l'attività della tripsina.
Centrifuga per raccogliere le cellule, fissarle e permeabilizzarle.
Introdurre anticorpi secondari marcati con fluoroforo rosso lontano, legandosi a coniugati localizzati e wash.
Trattare con un colorante colorante nucleare.
Osserva al microscopio confocale e acquisisci immagini a varie profondità planari.
Dopo l'elaborazione dell'immagine, la cellula mostra piccoli focolai fluorescenti verdi all'
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