Name: Laser Microdissezione Cattura di tessuti di mammiferi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 16 min 34 s
Description: Impara la microdissezione laser con il microscopio Leica A-S-L-M-D per isolare campioni di tessuto mammifero con precisione. Questa tecnica avanzata migliora la qualità della ricerca biologica e delle analisi molecolari.

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laser microdissezione cattura di tessuti di mammiferi

Laser Capture Microdissection of Mammalian Tissue

Microscopia laser capture, noto anche come microdissezione laser (LMD), permette all&#39;utente di isolare un piccolo numero di cellule o tessuti da congelati o fissati in formalina, incluse in paraffina e sezioni di tessuto. LMD tecniche si basano su una membrana termo labile posizionato sia sulla parte superiore di, o sotto, la sezione di tessuto. In un metodo, l&#39;energia laser focalizzato è usato per fondere la membrana sulle cellule sottostanti, che possono poi essere tirato fuori dalla sezione di tessuto. Negli altri, l&#39;energia laser vaporizza il foglio lungo un percorso &quot;disegnato&quot; sul tessuto, permettendo alle cellule selezionate per cadere in un dispositivo di raccolta. Ogni tecnica consente la selezione di cellule con una risoluzione minima di alcuni micron. DNA, RNA, proteine, lipidi ed i campioni possono essere isolati e analizzati da micro-campioni sezionati. In questo video, che dimostrano l&#39;uso del Leica AS-LMD strumento microdissezione laser in sette segmenti, compreso una introduzione ai principi del LMD, inizializzare lo strumento per l&#39;uso, considerazioni generali per la preparazione del campione, il campione di montaggio e la creazione di tubi di cattura , allineando il microscopio, regolando i controlli di cattura, e la cattura campioni di tessuto. Laser-capture micro-dissezione consente al ricercatore di isolare campioni di popolazioni di cellule pure piccolo come un paio di cellule equivalenti. Questo permette l&#39;analisi delle cellule di interesse che sono privo di contaminanti vicini, che possono confondere i risultati sperimentali.

Laser Microdissezione Cattura di tessuti di mammiferi

La microscopia a cattura laser, nota anche come microdissezione laser (LMD), consente all'utente di isolare piccoli numeri di cellule o tessuti da campioni congelati o...

Ciao, mi chiamo Rob Edwards. Sono il direttore della struttura di microscopia a cattura laser dell'Università della California di Irvine. Vi illustrerò l'utilizzo del microscopio a cattura laser che abbiamo qui.Il nostro strumento è un Leica A-S-L-M-D, acquistato circa tre anni fa. Esistono due tipi diversi di sistemi di cattura laser. Uno può essere paragonato a un saldatore a punti, in cui un frammento di tessuto su un vetrino è posto sopra una membrana di plastica, che ricopre il tessuto.Si utilizza quindi una sorgente laser per fondere la membrana, saldando in pratica il tessuto sulla membrana; successivamente la membrana viene rimossa, portando con sé il tessuto catturato. Per iniziare, per attivare il sistema di LCM, accendiamo in sequenza diversi strumenti. Cominceremo con il box di controllo A-S-L-M-D, che viene acceso qui.Quindi accendiamo il computer, il che è abbastanza semplice. Se si dispone di un campione che richiede un'ottica a fluorescenza per identificare le cellule da catturare, si accenderebbe la lampada a mercurio per l'illuminazione in fluorescenza. Tuttavia, non utilizzeremo tale modalità per questa dimostrazione.Se si desidera acquisire immagini di alta qual

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Biologia

Il video descrive la dissezione laser del modello 3D di co-coltura organotipica con precisione a livello di micron. Nei modelli organotipici 3D, i costituenti stromali come i fibroblasti sono co-coltivati tridimensionalmente con cellule epiteliali tumorali. Il modello 3D funge da strumento sperimentale che consente di studiare l'invasione e le interazioni cancro-stroma in condizioni quasi fisiologiche.

Microdissezione laser: una tecnica per isolare le cellule tumorali del colon-retto invasive da un modello di coltura organotipica 3D

Microdissezione è stato ampiamente impiegato per l'esame di DNA, RNA e proteine ​​nel tessuto. Microscopia laser capture (LCM) è il metodo più comunemente usato, ma una nuova tecnica di fresatura, mesodissection, è da poco disponibile. Dimostriamo estrazione di RNA da mesodissected in formalina paraffina fissati diapositive tessuti integrati di Mycobacterium tuberculosis granulomi.

Un nuovo approccio Microdissezione per recuperare<em&gt; Mycobacterium tuberculosis</em&gt; Trascrizioni specifici da formalina paraffina fisso incorporato Lung granulomi

L'isolamento dei singoli neuroni dopaminergici o l'area tegmentale ventrale con immunoistochimica diretta o indiretta è dimostrata tramite microdissezione laser. Parametri per isolamento di tessuto da un vetrino utilizzando un laser a infrarossi e da diapositive membrana utilizzando la combinazione di un laser infrarosso ed ultravioletto sono discussi.

Laser Capture Microdissezione - Una dimostrazione dell&#39;isolamento individuale dopamina neuroni e l&#39;intera area ventrale tegmentale

L'obiettivo di questo protocollo è utilizzare la micro-dissezione a cattura laser come metodo efficace per isolare popolazioni pure di tipi cellulari da tessuti prostatici eterogenei per l'analisi dell'RNA a valle.

Laser-capture Microdissezione di Human prostatica Epitelio per l&#39;analisi di RNA

Qui, descriviamo un protocollo per una microdissezione laser riproducibile (LCM) per isolare il trabecolato (TM) per analisi di RNA a valle. La capacità di analizzare i cambiamenti nell'espressione genica nella TM vi aiuterà a comprendere i meccanismi molecolari delle malattie oculari correlate a TM.

Microdissezione laser di elevata purezza trabecolato dai Mouse occhi per analisi dell'espressione genica

È stato sviluppato un protocollo di microdissezione di cattura laser (LCM) per ottenere una quantità sufficiente di RNA di alta qualità per l'analisi dell'espressione genica nelle cellule ossee. L'attuale studio si concentra sulle sezioni del femore del topo. Tuttavia, il protocollo LCM riportato qui può essere utilizzato per studiare l'espressione genica nelle cellule di qualsiasi tessuto duro.

Un protocollo di microdissezione di cattura laser che produce RNA di alta qualità da ossa di mouse fresh-congelate

Questo protocollo descrive la microdissezione di cattura laser per l'isolamento della cartilagine e dell'osso da sezioni fresche congelate dell'embrione di topo. La cartilagine e l'osso possono essere rapidamente visualizzate mediante colorazione viola cresilio e raccolte proprio per produrre RNA di alta qualità per l'analisi trascrittomica.

Microdissezione laser di cattura della cartilagine embrionale del topo e dell'osso per l'analisi dell'espressione genica

La microdissezione laser (LMD) è una tecnica sensibile e altamente riproducibile che può essere utilizzata per scoprire percorsi che mediano l'eterogeneità e l'invasione del glioma. Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per isolare le aree discrete dal tessuto glioma utilizzando LMD laser seguito da analisi trascrittomica.

Microdissezione di cattura laser delle sottoregioni del Glioma per la caratterizzazione spaziale e molecolare dell'eterogeneità intratutuale, dell'Oncoflusso e dell'invasione

Viene descritto un protocollo che utilizza la microdissezione laser per isolare i singoli tessuti nematodi per il sequenziamento dell'RNA. Il protocollo non richiede toolkit genetici specie-specifici, consentendo di confrontare i profili di espressione genica tra diverse specie a livello di campioni di tessuto singolo.

Microdissezione laser per applicazioni a tessuto singolo indipendenti dalla specie

Questo protocollo descrive un flusso di lavoro ad alto rendimento per la segmentazione guidata dall'intelligenza artificiale delle regioni di interesse confermate dalla patologia da immagini di sezioni di tessuto sottile macchiate per l'arricchimento di popolazioni cellulari risolte in istologia utilizzando la microdissezione laser. Questa strategia include un nuovo algoritmo che consente il trasferimento di demarcazioni che denotano popolazioni cellulari di interesse direttamente ai microscopi...

Microdissezione laser industrializzata guidata dall'intelligenza artificiale per l'analisi proteomica microscalata del microambiente tumorale

Questo protocollo descrive un metodo per isolare l'RNA da regioni istologiche definite di tessuto epatico di topo inserito nel composto di paraformaldeide e composto Optimal Cutting Temperature, utilizzando microdissezione a cattura laser, consentendo un'analisi mirata dell'espressione genica a valle.

Microdissezione da cattura laser del tessuto epatico di topo fissato con paraformaldeide per l'analisi dell'RNA

Impara la microdissezione laser con il microscopio Leica A-S-L-M-D per isolare campioni di tessuto mammifero con precisione. Questa tecnica avanzata migliora la qualità della ricerca biologica e delle analisi molecolari.

Laser Microdissezione Cattura di tessuti di mammiferi

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