Un metodo di immunocolorazione multiplex che utilizza anticorpi primari della stessa specie ospite

Prendi una sezione surrenalica fissa e permeabilizzata che comprende una corteccia e un midollo. Trattarlo con un tampone acido bollente, rompendo i legami incrociati indotti dalla fissazione per lo smascheramento dell'antigene.

Bloccare i siti di legame non specifici e introdurre anticorpi primari che si legano ai marcatori specifici della corteccia.

Aggiungere anticorpi secondari biotinilati che prendono di mira gli anticorpi primari e perossidasi coniugate con streptavidina che si legano alla biotina.

Introdurre una tiramide marcata con fluoroforo e perossido di idrogeno.

Le perossidasi immobilizzate utilizzano il perossido di idrogeno per attivare la tirammide, che si lega alle proteine vicine, marcando la corteccia.

Quindi, trattare la sezione con il tampone bollente per rimuovere gli anticorpi legati.

Introdurre gli stessi anticorpi primari generati dalla specie ospite che hanno come bersaglio i marcatori specifici del midollo e gli anticorpi secondari biotinilati.

Introdurre perossidasi coniugate con streptavidina e una diversa tiramide coniugata con fluorofori per marcare il midollo.

La rimozione degli anticorpi primari specifici della corteccia inibisce l'anticorpo seconda