Name: CD4 + T-linfociti Capture utilizzando un chip monouso Microfluidic per lHIV (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T13:03:52.000+00:00
Duration: 12 min 44 s
Description: Scopri la cattura di linfociti T CD4+ con un dispositivo microfluidico monouso per applicazioni HIV. Questo metodo PDMS consente l'analisi precisa delle cellule in contesti con risorse limitate.

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<ol><li> Preparare canale microfluidica con anti-CD4 + biotinlayted superficie. </li><li> Iniettare 10 ml di sangue campione a 5 ml / min nel canale di microfluidica con pompa a siringa. </li><li> Lavare il sangue a 20 ml / min per 20 min con PBS. </li><li> Iniettare una soluzione diluita di FACS lisante (diluito al 10% dalla soluzione madre con PBS) a 5ul/min per 15 minuti. </li><li> Incubare per 15 min. </li><li> Iniettare primario CD3 + soluzione di anticorpi (diluita al 10% dalla soluzione madre con PBS) a 5 ml / min per 20 min. </li><li> Incubare per 2 ore. </li><li> Scovare canale con PBS a 5 ml / min per 15 min. </li><li> Iniettare 20% AF488 CD4 + anticorpi, 0,2% soluzione stock DAPI, e il 10% CD3 + anticorpi secondari a 5 ml / min per 20 minuti, allo stesso tempo. </li><li> Incubare per 20 min. </li><li> Lavare il canale con PBS a 5 ml / min per 15 min. </li><li> Contare le cellule al microscopio a fluorescenza: <ol><li> Bianco (ottica) - Bianco e nero: cellulare e polvere </li><li> UV (DAPI) - Blu: cell solo </li><li> Blu (CD4 +) - Verde: T-linfociti e monociti </li><li> Verde (CD3 +) - Rosso: T-linfociti solo </li></ol></li></ol>

<table><tbody><tr><td>Microcanale in PDMS</td><td></td><td></td><td></td><td>Realizzato mediante stampo in SU-8</td></tr><tr><td>Sangue</td><td></td><td></td><td></td><td>Sangue donato da soggetti umani sani. Mass General Hospital, 10 X globuli bianchi ad alta densità o Brigham and Women&amp;rsquo;s Hospital.</td></tr><tr><td>PBS</td><td>Tampone</td><td>Invitrogen</td><td>14190</td><td>Soluzione salina fosfato tampone di Dulbecco&amp;rsquo;s 1x.</td></tr><tr><td>Soluzione lisante FACS</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>349202</td><td>Diluita al 10% dalla soluzione madre con PBS.</td></tr><tr><td>Ab biotinilato anti-CD4+</td><td></td><td>Beckman Coulter Inc.</td><td>IM0704</td><td>Superficie preparata con Ab biotinilato anti-CD4+, diluito al 10% dalla soluzione madre con PBS/BSA dopo miscelazione con 0,2 mg di soluzione madre e 1 ml di acqua deionizzata.</td></tr><tr><td>goat anti-hCD3delta</td><td>pAB</td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-1128</td><td>Diluito al 10% dalla soluzione madre con PBS</td></tr><tr><td>rabbit anti-goat IgG PE</td><td></td><td>Santa Cruz Biotechnology, Inc.</td><td>sc-3755</td><td>Ab secondario per anti-CD3 Ab, diluito al 10% dalla soluzione madre con PBS</td></tr><tr><td>anti-human CD4+</td><td></td><td>BD Biosciences</td><td>557695</td><td>Etichettato con Alexa Fluor 488, diluito al 20% dalla soluzione madre con PBS.</td></tr><tr><td>DAPI</td><td></td><td>Invitrogen</td><td>D1306</td><td>Soluzione di 4&amp;rsquo;,6-dianidino-2-fenilindolo cloridrato, diluita allo 0,2% dalla soluzione madre con PBS.</td></tr></tbody></table>

cd4 + t-linfociti capture utilizzando un chip monouso microfluidic per l&#39;hiv

CD4+ T-Lymphocyte Capture Using a Disposable Microfluidic Chip for HIV

CD4 + T-linfociti Capture utilizzando un chip monouso Microfluidic per l&#39;HIV

Ciao, mi chiamo Richard Lin e sono un ricercatore nel gruppo della Professoressa TI Mercy presso la Divisione di Scienze e Tecnologie Sanitarie di Harvard e MIT. Il progetto su cui sto lavorando consiste nel quantificare e isolare linfociti T positivi per CD4 e positivi per C3. Il sangue del paziente verrà utilizzato in contesti con risorse limitate.Proprio di fronte a me abbiamo un dispositivo microfill composto da PDMS, cioè polidimetilsilossano. Il dispositivo, il canale stesso, ha un'altezza di 50 micrometri e il volume totale nel dispositivo è di 10 microlitri. Si tratta quindi di un dispositivo estremamente preciso che utilizzeremo per catturare i linfociti T helper.Fondamentalmente, il parametro diagnostico di riferimento per i pazienti HIV. La superficie del dispositivo microfluidico è già stata preparata con proteine e anticorpi positivi per CD4 nella siringa. Al momento abbiamo solo tampone biologico PBS a un pH di 7,4 e ora lo faremo fluire nel canale per rimuovere l'eccesso di anticorpi positivi per CD4.In questa fase, non è necessario controllare la velocità perché stiamo semplicemente cercando di eliminare le sostanze in eccesso e non importa realmente quale sia la no

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Cattura cellula Utilizzando un dispositivo a microfluidi

Questo esperimento viene visualizzata una guida per l'utilizzo fluorescente un clone molecolare di HIV per vivere esperimenti di imaging confocale.

Visualizzazione Cell-per-cell trasferimento del virus HIV usando cloni fluorescenti di HIV e Live Microscopia confocale

Abbiamo sviluppato un vettore lentivirale che possiede, oltre alla Tat-reattiva LTR, l'Ap-risposta elemento (RRE) che possono regolare l'espressione genica giornalista in modo da HIV-1 Tat e Rev-dipendente. Il vettore consente l'individuazione specifica di replicare l'HIV nelle cellule viventi attraverso l'espressione di GFP.

Marcatura specifica di HIV-1 Cellule positive con un Rev-dipendente Vector lentivirali Esprimendo la proteina fluorescente verde

Integrato chip microfluidica termoplastico è stato sviluppato per l'utilizzo come diagnostica molecolare. Il chip esegue l'estrazione di acido nucleico, la trascrittasi inversa e PCR. Metodi per la fabbricazione e l'esecuzione del chip sono descritti.

Chip Fabrication Microfluidic e metodo per rilevare l&#39;influenza

In questo articolo vi presentiamo un chip microfluidica per l'analisi singola cellula. Esso consente la quantificazione delle proteine ​​intracellulari, enzimi, cofattori, e secondi messaggeri per mezzo di saggi fluorescenti o immunologici.

Un chip microfluidica per la Versatile analisi chimica di singole cellule

Questo protocollo descrive i metodi per costruire un modello murino umanizzato di midollo osseo/fegato/timo con immunità ingegnerizzata basata su cellule staminali contro l'infezione da HIV.

Cellule staminali base Immunità Engineered contro l&#39;infezione da HIV nel modello umanizzato mouse

Descritto è una metodologia per quantificare l'espressione di 96 geni e 18 proteine di superficie da singole cellule ex vivo, che consenta l'identificazione di differenzialmente espressi geni e proteine in cellule infettate da virus rispetto a cellule non infette. Applichiamo l'approccio allo studio SIV-infettati CD4+ T cellule isolate da macachi rhesus.

Cella singola quantificazione del mRNA e l'espressione di proteine di superficie CD4 infettati da Virus di immunodeficienza delle scimmie+ T cellule isolate da macachi Rhesus

Presentato qui un protocollo per un approccio di imaging a fluorescenza, multiplex immunofluorescent cell-based detection of DNA, RNA, and protein (MICDDRP), un metodo in grado di visualizzare simultaneamente fluorescenza singola cellula di proteine virali e acidi nucleici di diverso tipo e filamento. Questo approccio può essere applicato a una vasta gamma di sistemi.

Imaging a fluorescenza multiplexata a singola cellula per visualizzare acidi nucleici e proteine virali e monitorare HIV, HTLV, HBV, HCV, virus Zika e infezione influenzale

Qui, presentiamo un protocollo in cui le singole cellule vengono monitorate per eventi acuti e infezioni produttive da HIV-1 su un dispositivo nanofluidico. I dati di imaging definiscono le interazioni del recettore virus-host e la dinamica del percorso di segnalazione. Questo è il primo metodo per la coltura e l'imaging longitudinali a singola cellula ad alta produttività nanofluidica per studiare la cinetica segnalante e le interazioni molecolari.

Caratterizzazione a una cellula dell'afflusso di calcio e dell'infezione da HIV-1 utilizzando una piattaforma optofluidica multiparametro

Il chip microfluidico clinico è un'importante tecnica di analisi biomedica che semplifica la pre-elaborazione del campione di sangue del paziente clinico e colora immunofluorescentmente le cellule tumorali circolanti (CTC) in situ sul chip, consentendo la rapida rilevazione e identificazione di un singolo CTC.

Piattaforma di chip microfluidici clinici per l'isolamento di cellule tumorali circolanti versatili

Le cellule tumorali circolanti (CTC) sono fondamentali per lo studio della progressione e delle metastasi del cancro. Questo articolo presenta un protocollo integrato ad alta produttività per l'arricchimento di CTC e il sequenziamento di CTC singolo, migliorando l'efficienza di cattura e la purezza delle CTC riducendo al contempo i costi di contaminazione e sequenziamento, facendo progredire la ricerca oncologica di precisione e le applicazioni cliniche.

Tecnologia di selezione delle cellule tumorali circolanti ad alto rendimento e sequenziamento di singole cellule basata sulla microfluidica

Scopri la cattura di linfociti T CD4+ con un dispositivo microfluidico monouso per applicazioni HIV. Questo metodo PDMS consente l'analisi precisa delle cellule in contesti con risorse limitate.

CD4 + T-linfociti Capture utilizzando un chip monouso Microfluidic per l'HIV

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