Valutazione del trattamento con plasma a pressione atmosferica in cellule di neuroblastoma prive di glucosio

Prelevare una coltura di cellule di neuroblastoma in una piastra multipozzetto con terreno.

Sostituire i terreni nei pozzetti con mezzi neuronali privi di glucosio per indurre lo stress ossidativo.

Posizionare la lastra sotto l'ugello del getto di plasma a una distanza ottimale per un'esposizione uniforme.

Trattare pozzi selezionati con una bassa dose di getto di plasma a pressione atmosferica a base di elio (APPJ), che genera livelli controllati di specie reattive dell'ossigeno e dell'azoto.

Incubare le cellule per consentire l'attivazione delle vie di risposta allo stress e l'upregulation degli enzimi antiossidanti nei pozzetti trattati con APPJ.

Le cellule in pozzetti non trattati in condizioni di privazione di glucosio subiscono un ulteriore danno cellulare ossidativo.

Aggiungere il reagente per il test di vitalità cellulare e incubare. Le cellule vitali riducono il reagente a un prodotto colorato.

Misura l'intensità del colore utilizzando un lettore di micropiastre.

I pozzetti trattati con APPJ mostrano una maggiore intensità del colore a causa della maggiore vitalità cellulare, mentre i pozzetti non trattati mostrano un'intensità inferiore, confermando l'effetto neuroprotettivo dell'APPJ in condizioni di privazione di glucosio.

Regolare la distanza tra l'ugello del tubo di quarzo e la piattaforma in cui verrà posizionata la piastra a 96 pozzetti a tre centimetri per garantire che il raggio possa toccare la superficie del terreno di coltura. Prima del trattamento, cambiare il terreno di coltura in ciascun pozzetto con RPMI 1640 senza terreno di glucosio. Ora, posiziona la piastra sotto l'ugello del getto di plasma a pressione atmosferica. Quindi trattare le cellule in pozzetti separati per 0, 1, 2, 4, 8 e 12 secondi.

Dopo il trattamento, incubare le cellule per un'ora in un incubatore cellulare a 37 gradi Celsius, dopo l'incubazione a 10 microlitri di soluzione del kit di conteggio cellulare 8 per ciascun pozzetto. Quindi, incubare le cellule a 37 gradi Celsius per quattro ore. Infine, misurare l'assorbanza a 450 nanometri con un lettore di micropiastre.