Trapianto di cellule precursori dell'interneurone nel cervello di un cucciolo di topo

0 visualizzazioni3:26 min • June 17th, 2025

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Inizia con un cucciolo di topo ricevente anestetizzato. Fissa la testa con del nastro adesivo, assicurandoti che il cranio rimanga esposto.

Utilizzare la lambda anatomica di riferimento per localizzare la regione cerebrale bersaglio.

Posizionare una micropipetta sulla regione bersaglio, caricata con una sospensione di cellule precursori degli interneuroni in grado di differenziarsi in interneuroni maturi.

Queste cellule precursori derivano dalla corteccia, dallo striato o dall'ippocampo di un cucciolo donatore nella stessa fase di sviluppo del ricevente.

Iniettare la sospensione nel cervello per eseguire un trapianto omotopico, in cui i precursori vengono consegnati nella loro regione di origine, o un trapianto eterotopico, in cui vengono introdotti in una diversa regione del cervello.

Lasciare che la sospensione si diffonda prima di ritrarre la micropipetta per evitare il riflusso.

Trasferisci il cucciolo su un tappetino riscaldante per il recupero.

La sopravvivenza e la maturazione dei precursori del donatore nel cervello del cucciolo ricevente possono ora essere valutate.

Caricare una micropipetta a punta fine con olio minerale. Collegare la micropipetta a un iniettore di nanolitri e fissare l'apparecchio per l'iniezione di nanolitri a un manipolatore collegato a una base magnetica. Mentre il primo cucciolo viene anestetizzato con ghiaccio, pipettare più volte la soluzione cellulare per garantire una distribuzione cellulare omogenea.

Espellere l'olio minerale e riempire completamente la pipetta con la sospensione a cella singola. Dopo aver confermato la mancanza di risposta al pizzicamento delle dita, posizionare il cucciolo su un coperchio per piastre di Petri con la testa appoggiata su stucco adesivo in modo che la parte superiore della testa sia relativamente piatta.

Copri la testa con un pezzo di nastro adesivo da laboratorio con un foro diamantato, tirando il nastro fino a quando la pelle non è tesa in modo che la testa sia saldamente fissata e la lambda sia visibile attraverso il foro. Spostare il cucciolo fissato sotto l'iniettore di nanolitri e abbassare la micropipetta in modo che la punta sia direttamente sopra lambda.

Osservare le coordinate x, y sul manipolatore e regolare le manopole del manipolatore fino a quando la micropipetta non si posiziona alle coordinate appropriate lungo gli assi mediolaterale e anteroposteriore della testa. Abbassare la micropipetta fino a quando la punta crea una piccola concavità sulla pelle e ruotare la manopola del manipolatore dell'asse z con decisione ma delicatamente per guidare la micropipetta attraverso la pelle e il cranio nel cervello.

Ritrarre leggermente la micropipetta fino a quando la punta non è circondata da un cono di pelle, a forma di tenda, e visualizzare le coordinate lungo l'asse z. Quindi abbassare la micropipetta alla profondità sperimentale appropriata e iniettare le cellule. Attendere 15 secondi dopo la somministrazione delle cellule prima di ritrarre la micropipetta e ripetere l'iniezione in una seconda posizione, se lo si desidera. Posiziona il cucciolo su un termoforo e monitoralo fino al completo recupero prima di trasferirlo di nuovo nella gabbia di casa.

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Ultimo aggiornamento: 1 agosto 2026