Name: Imaging adesione dei leucociti allendotelio vascolare ad alta pressione intraluminale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-08-23T12:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 20 s
Description: Scopri la visualizzazione dell'adesione dei leucociti all'endotelio in vasi pressurizzati ex vivo. Questo metodo permette di studiare l'infiammazione vascolare e l'ipertensione in condizioni fisiologiche realistiche.

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Questo studio è stato sostenuto in parte dal Programma OIS del Governo del Victoria, il National Health and Medical Research Council of Australia borse di programmi e progetti (JPF Chin-spolverare) e borsa di studio post-laurea (D Michell).

1. Isolando le arterie carotidee <ol><li> Euthanase10 settimana di vita ratti Sprague Dawley via di CO 2 / O 2 asfissia. </li><li> Accise arterie comuni a sinistra ea destra della carotide con aorta e il cuore garantendo allungamento minimo dei vasi. </li><li> Nel buffer di ghiaccio freddo Krebs separare le arterie della carotide e dell'aorta dal cuore e di eseguire la dissezione chiudere. </li><li> Mantenere i vasi isolati in Krebs sul ghiaccio prima del montaggio. </li></ol> Ca. tempo = 45 minuti 2. Priming la nave da camera <ol><li> Al connettori prossimale e distale del buffer nave camera filo Krebs mantenuta a pH fisiologico infondendo CarboGen gas (95% O 2, 5% CO 2) attraverso il buffer a 37 ° C. </li><li> Garantire tubi e cannule sono lavata completamente e sono allineati. </li><li> Flush del buffer Kreb attraverso il P1 (prossimale) e P2 (distale) trasduttori. Chiudere i rubinetti per assicurarsi che non bolle d'aria nel trasduttori. </li><li> Collegare i trasduttori ai connettori corrispondenti e ancora di più a livello di buffer di Krebs garantendo l'assenza di bolle d'aria. Chiudere i rubinetti alla camera. </li></ol> Ca. tempo = 15 min 3. Pressurizzazione della camera di nave <ol><li> Accendere attrezzature a pressione: servo di pressione, controllo della pressione, pompa peristaltica (Figura 1). </li><li> Con la pompa peristaltica sulla pressione e il servo di pressione in automatico tampone Krebs correre attraverso il tubo a 20 mmHg (quadrante a 1), garantendo l'assenza di bolle d'aria. </li><li> Collegare il tubo al trasduttore P2 chiuso. Pressione diventerà stabile. </li><li> Aprire il rubinetto P2 alla camera nave per scovare eventuali bolle poi chiudere. </li><li> Riempire il bagno con tampone Krebs (5 - 7 mL). </li></ol> Ca. tempo = 10 minuti 4. Montaggio della nave <ol><li> Sotto un microscopio a dissezione legami poliestere posto nero su ogni cannula (Figura 2). </li><li> Spostare cannule e titolari cannula a parte e montare nave ¼ (arco aortico fine) sulla cannula P1. Garantire a non strappare la nave. </li><li> Utilizzando una siringa piena di Krebs tampone delicatamente lavare il sangue in eccesso della nave tramite trasduttore P1. Chiudere P1 a camera. </li><li> Nave sicuro alla cannula P1 con la cravatta di poliestere. </li><li> Spostare cannule / titolari cannula più vicino per il montaggio su la cannula P2. </li><li> Monte fine distale del vaso (~ ¼ della lunghezza) sulla cannula distale. Fissare con cravatta poliestere. </li></ol> Ca. tempo = 20 minuti 5. Pressurizzazione della nave <ol><li> Regolare i titolari cannula per garantire che non piegare o tirare in vaso. </li><li> Con P1 e P2 chiuso alla camera di cambiare il servo di pressione da automatico a manuale. Controllare il servo di pressione non è costante riduzione della pressione entro 10 secondi. Se c'è, si sta verificando una perdita e le connessioni e trasduttori devono essere fissati al suolo. </li><li> Regolare il servo pressione a automatica P2 quindi aprire alla camera. Al microscopio osservare la nave si dilatano quando il rubinetto è aperto alla camera. </li><li> Accendere il servo pressione manuale. Anche in questo caso verificare la costante riduzione della pressione entro 10 secondi. Se c'è una perdita allora il sistema non è a tenuta di pressione e non ci sarà probabilmente un buco nel serbatoio. </li><li> Tornare alla automatica P1 aperto alla camera. L'impostazione manuale verificare che la pressione rimane stabile. </li><li> Se nessuna perdita, in linea manuale aumentare l'impostazione di 2 (40 mmHg). </li><li> Regolare in automatico e osservare la nave sotto il microscopio. Se necessario, regolare il titolare cannula per assicurarsi che non piegare in vessel.Check per perdite su impostazione manuale. </li><li> Ripetere i passaggi 5,6-5,7 aumentando il selettore per 3 (60 mmHg), 4 (80 mmHg) e così via fino a quando la pressione desiderata. </li></ol> Ca. tempo = 15 - 30 minuti 6. Incubando la nave sotto pressione <ol><li> Collegare il set di controllo della temperatura a 37 ° C. </li><li> Con una seconda pompa peristaltica profumato tampone Krebs (1 ml / min) nel bagno della camera nave. </li><li> Collegare aspiratore alla camera garantire solo lo strato superiore del bagno è stato rimosso. </li><li> Incubare nave pressurizzata a 37 ° C per 1 ora con la pressione impostato su Automatico. </li><li> Controllare la pressione non perde (il passaggio a manuale) periodicamente. </li><li> Gli effetti dei vari interventi farmacologici possono osservare semplicemente aggiungendo il composto al bagno durante l'incubazione. </li></ol> Ca. tempo = 1 ora 7. Perfusione del vaso pressurizzato con sangue intero <ol><li> Durante l'incubazione ottenere almeno 7,5 ml di sangue intero / nave raccolti in 40 eparina U / ml di sangue. Incubare in un falco da 50 ml a 37 ° C. </li><li> 10 minuti prima della fine del tsi etichetta sangue incubazione con VybrantDil (1:1000) per 10 minuti a 37 ° C al buio. </li><li> Dopo 10 minuti, raccogliere il sangue in una siringa di compensazione eventuali bolle e attaccare su una pompa a siringa con una giacca di calore a 37 ° C. </li><li> Chiudere trasduttore P1 alla camera / navi e collegare la siringa e tubo di scarico. </li><li> Sangue purga a 1000 ml / min attraverso il tubo di scarico per rimuovere eventuali bolle. </li><li> Aprire P1 alla camera. Il servo di pressione si regola automaticamente per mantenere la pressione desiderata. </li><li> Perfusione di sangue a 100 l / min. </li><li> Utilizzando un microscopio a fluorescenza accoppiato ad una fotocamera digitale registrare due campi della nave perfusi per 15 secondi a 1, 3, 5, 7,5 e 10 minuti. </li><li> Perfusione Messaggio integrità e la funzione endoteliale può essere valutata mediante tecniche farmacologiche come miografo molecola di espressione e di adesione può essere determinato mediante immunoistochimica per validare ulteriormente la risposta infiammatoria. </li></ol> Ca. tempo = 15 min 8. Rappresentante dei risultati: Un diagramma schematico della configurazione camera di pressione è mostrata in Figura 1. Con una fotocamera digitale accoppiato ad un microscopio a fluorescenza risultati possono essere visualizzati immediatamente tramite registrazioni video in diretta. Immagini video rappresentativi sono visto in Figura 3, dove sono considerati leucociti per essere aderente al endotelio se è rimasto fermo per 10 secondi. Con le registrazioni video sulle cellule ciclo continuo aderito può essere contato come un campo medio per. Mentre sia basso (Figura 3A) e alta (Figura 3B) pressione causerà una certa quantità di adesione un aumento significativo l'adesione dei leucociti con la pressione più alta intraluminale è visto e questo è anche dimostrato quantitativamente (Figura 4). <img alt="Figura 1" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig1.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Pressurizzato ex vivo camera schematica nave. Una nave cannulata collegato ad una prossimale (P1) e di un trasduttore distale (P2), trasduttori di pressione del sangue che permette di essere manipolati all'interno della nave. Perfusione è attraverso il trasduttore di P1 e la pressione viene mantenuta tramite trasduttore P2. <img alt="Figura 2" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig2.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Cannuala con legami. Cravatte in poliestere nero sono collegati a ciascun cannula. <img alt="Figura 3" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig3.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 3"> Figura 3. Immagini video rappresentativo. Adesione cellulare dinamico (freccia rossa) con fluorescenza a 80 mmHg (A) e 120 mmHg (B) dopo 10 minuti di perfusione. <img alt="Figura 4" src="/files/ftp_upload/3221/3221fig4.jpg" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 4"> Figura 4. Adesione dei leucociti in Sprague Dawley arterie carotidi dopo 1 ore di incubazione a basse (80 mmHg) e ad alta pressione (120 mmHg). *** P &lt;0,001, come analizzato da 2-way ANOVA a misure ripetute utilizzando il test post hoc di Bonferroni.

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</ol>

Il protocollo dello studio è stato approvato dal Medical Alfred Ricerca e l&#39;Educazione degli animali Precinct Comitato Etico e l&#39;Alfred Hospital Comitato Etico.

Si tratta di un metodo modificato per studiare l&#39;adesione dei leucociti all&#39;endotelio in intatti i vasi sanguigni isolato in condizioni di pressione in tempo reale. Perfusione della camera solo recipiente consente una rapida convalida dei pro-infiammatorie ceppi di topi e grandi vasi di ratto. L&#39;attivazione consente la manipolazione di pressione dinamica delle interazioni delle cellule che devono essere osservati dal basso verso l&#39;intraluminale pressioni molto elevate, quindi meglio imitare-mento fisiologico e condizioni fisiopatologiche. Diametro dei vasi può essere misurata con un sufficiente cellulare imaging programma e quindi il flusso di taglio e la velocità può essere determinato e quindi manipolata. Con le sue capacità miografo, interventi farmacologici nel bagno aggiungere un&#39;altra dimensione alle condizioni sperimentali possibile con questo modello che permette studi meccanicistici e dei percorsi di segnalazione. Mentre la conservazione endoteliali non può essere confermata durante la manipolazione di pressione, le risposte a ACh e PE può essere condotta perfusione post 9. Va notato che questa impostazione dimostra gli effetti della pressione intraluminale sulla cellula-cellula non interazioni gli effetti del flusso ematico pulsatile né sistolica o diastolica. Inoltre, mentre le variazioni di pressione acuta sulla adesione dei leucociti sono stati osservati, questa configurazione può essere utilizzata anche per guardare gli effetti della pressione cronica (cioè aumentando i tempi di incubazione e utilizzando un modello animale cronico di pressione). Sprague Dawley arterie carotidi comuni sono dimostrate in questo set up, ma altri ceppi e le specie possono essere utilizzati con gli opportuni adeguamenti alle dimensioni cannula. Infatti, è importante notare che l&#39;età e il peso degli animali sulle dimensioni del vaso e quindi che il set up deve essere personalizzato per ciascuna nave. Dissezione stretta e attenta del tessuto connettivo in grado di migliorare la visualizzazione dei leucociti immensamente.

<table border="1"><tbody><tr><th> Nome del reagente / attrezzature </th><th> Azienda </th><th> Numero di catalogo </th><th> Commenti </th></tr><tr><td> Microscopio </td><td> Carl Zeiss, Inc </td><td> STEREO Discovery V.20 </td><td></td></tr><tr><td> PHD 2000 pompa siringa </td><td> Harvard Apparatus </td><td> 70-2016 </td><td></td></tr><tr><td> Fotocamera Digitale e Controller </td><td> Hamamatsu ORCA-ER </td><td> C4742-95 </td><td></td></tr><tr><td> Sistema di illuminazione a fluorescenza </td><td> Lumen Dynamics </td><td> X-Cite 120 </td><td></td></tr><tr><td> Nave da Camera </td><td> Vivere Strumentazione Sistemi </td><td> CH/1/SH </td><td></td></tr><tr><td> Pressione Servo Controller e pompa peristaltica </td><td> Vivere Strumentazione Sistemi </td><td> PS - 200 </td><td></td></tr><tr><td> Monitor di pressione di perfusione </td><td> Vivere Strumentazione Sistemi </td><td> PM - 4 </td><td></td></tr><tr><td> 2 x Trasduttore di pressione </td><td> Vivere Strumentazione Sistemi </td><td> PT - F </td><td></td></tr><tr><td> Controllore di temperatura </td><td> Vivere Strumentazione Sistemi </td><td> TC-01 </td><td></td></tr><tr><td> Pompa peristaltica </td><td> Instech Laboratories, Inc. </td><td> P720 </td><td></td></tr><tr><td> VybrantDil cellula di etichettatura soluzione </td><td> Invitrogen </td><td> V-22885 </td><td> Usa 1:1000 </td></tr></tbody></table>

imaging adesione dei leucociti all&#39;endotelio vascolare ad alta pressione intraluminale

Imaging Leukocyte Adhesion to the Vascular Endothelium at High Intraluminal Pressure

In tutto il mondo, l&#39;ipertensione è segnalato per essere in circa un quarto della popolazione ed è il fattore principale di rischio biomedici per la mortalità a livello mondiale. Nella ipertensione vascolare è associata a disfunzione endoteliale e l&#39;infiammazione che porta a una maggiore aterosclerosi e patologie diverse come la malattia renale cronica 2, 3, ictus e scompenso cardiaco 4. Un primo passo nel processo infiammatorio vascolari che determinano l&#39;aterogenesi è la cascata di adesione che prevede la laminazione, tethering, aderenza e conseguente trasmigrazione dei leucociti attraverso l&#39;endotelio. Reclutamento e l&#39;accumulo dei leucociti all&#39;endotelio è mediata da un sovraregolazione delle molecole di adesione come la molecola di adesione delle cellule vascolari-1 (VCAM-1), l&#39;adesione cellulare molecola intracellulare-1 (ICAM-1) ed E-selectina così come gli aumenti in rilascio di citochine e chemochine e una sovraregolazione di specie reattive dell&#39;ossigeno 5. Metodi in vitro come test adesione statica aiutare a determinare i meccanismi coinvolti nella cellula-cellula l&#39;adesione, nonché l&#39;analisi delle molecole di adesione delle cellule. Metodi utilizzati in precedenti studi in vitro hanno dimostrato che un aumento acuto della pressione sul endotelio può portare ad adesione dei monociti, un sovraregolazione di molecole di adesione e marker infiammatori 6 Tuttavia, simile a molti test in vitro, questi risultati non sono stati eseguiti in tempo reale in condizioni di flusso fisiologico, né con sangue intero. Pertanto, in vivo sono sempre più utilizzati in modelli animali per dimostrare l&#39;infiammazione vascolare e lo sviluppo della placca. Microscopia intravitale è ora ampiamente utilizzato per valutare l&#39;adesione dei leucociti, lamiere, migrazione e trasmigrazione 7-9. Quando si combinano gli effetti della pressione sui leucociti per l&#39;adesione endoteliale studi in vivo sono meno estese. Uno di questi studi prende in esame gli effetti in tempo reale del flusso di taglio e sulla crescita arteriosa e marker infiammatori rimodellamento, ma sono stati valutati solo attraverso immunoistochimica 10. Qui vi presentiamo un modello per la registrazione di adesione dei leucociti in tempo reale intatta vasi sanguigni sotto pressione, utilizzando la perfusione di sangue intero. La metodologia è una modifica di un modello di nave ex camera di perfusione in vivo 9 che permette analisi in tempo reale delle interazioni leucociti-endotelio adesivo in vasi intatte. La nostra modifica consente la manipolazione della pressione intraluminale fino a 200 mmHg consentendo lo studio non solo in condizioni di flusso fisiologico ma anche condizioni di pressione. Mentre i sistemi myography pressione sono state precedentemente dimostrato di osservare nave parete e lume diametro 11 così come la contrazione nave questa è la prima volta dimostrando leucociti-endotelio interazioni in tempo reale. Qui mostriamo la tecnica utilizzando carotidi raccolti da ratti e cannulata ad una misura camera di flusso accoppiato ad un microscopio a fluorescenza. La camera di imbarcazione è equipaggiata con il coprioggetti fondo permettendo una grande lente di grande diametro obiettivo a breve distanza di lavoro per l&#39;immagine della nave. Inoltre, agonista selezionati e / o antagonisti può essere utilizzata per approfondire i meccanismi che controllano l&#39;adesione cellulare. I vantaggi di questo metodo rispetto microscopia intravitale includono alcun coinvolgimento di un intervento chirurgico invasivo e quindi un throughput più elevato può essere ottenuto. Questo metodo consente anche l&#39;utilizzo di inibitori della localizzato l&#39;imbarcazione desiderata mentre intravitale consente solo trattamento sistemico inibitore.

Questo è un metodo per visualizzare l&#39;adesione dei leucociti all&#39;endotelio in raccolte serbatoi in pressione. La tecnica consente di studiare l&#39;adesione vascolare in condizioni di flusso di taglio con differenti pressioni intraluminali fino a 200 mmHg così imitare-zione le condizioni fisiopatologiche di alta pressione sanguigna.

Imaging adesione dei leucociti all&#39;endotelio vascolare ad alta pressione intraluminale

A livello mondiale, si riferisce che l'ipertensione colpisca circa un quarto della popolazione e rappresenta il principale fattore di rischio biomedico per la mortalità globale. ...

L'obiettivo generale di questa procedura è visualizzare l'adesione dei leucociti all'endotelio in vasi prelevati e mantenuti sotto pressione. Questo risultato si ottiene isolando innanzitutto un'arteria carotide da un ratto o da un topo. Successivamente, il vaso viene montato su una camera pressurizzata.Il vaso viene quindi pressurizzato e incubato per un'ora a una pressione desiderata. Infine, sangue intero marcato viene perfuso attraverso il vaso pressurizzato. In definitiva, è possibile ottenere risultati che mostrano in tempo reale l'adesione dei leucociti all'endotelio mediante una camera vascolare personalizzata ex vivo, abbinata a un servo, a un microscopio prezioso e a un microscopio fluorescente.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come i saggi di adesione statica, è che l'adesione dei leucociti può essere osservata in arterie funzionali intatte utilizzando sangue intero. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nello studio dell'ipertensione, come l'effetto della pressione intraluminale elevata sull'infiammazione e il modo in cui essa può contribuire all'aterosclerosi. Dopo aver isolato le arterie carotidi da ratti Spread Dolly di 10 settimane, aver attivato e pressurizzato la camera di perfusione, montare il vaso sotto un microscopio stereoscopico posizionando prima dei legacci neri in poliestere su ciascuna cannula, spostare il vaso nel bagno, quindi montare un quarto del vaso sulla cannula P1.Attenzione a non lacerare il vaso utilizzando una siringa riempita con buffer di Krebs. Lavare delicatamente il sangue in eccesso dal vaso attraverso il trasduttore P uno. Chiudere il collegamento tra P uno e la camera. Con il legaccio in poliestere, fissare il vaso alla cannula P uno. Avvicinare le cannule e i supporti delle cannule per il montaggio sulla cannula P due. Montare l'estremità distale del vaso sulla cannula P due.Fissarla con un legaccio in poliestere per iniziare a pressurizzare il vaso. Regolare i supporti della cannula per garantire che non vi siano piegamenti o allungamenti nel vaso con P uno e P due chiusi alla camera. Passare il servopressore da automatico a manuale.Controllare il servopressore per verificare che non vi sia una diminuzione della pressione entro 10 secondi. Una riduzione della pressione indica la presenza di una perdita e i collegamenti nonché il trasduttore devono essere fissati correttamente per garantire una tenuta alla pressione. Riportare il servopressore in modalità automatica, quindi aprire P2 alla camera sotto il microscopio ed osservare la dilatazione del vaso.Quando il rubinetto è aperto verso la camera. Passare il servopressione in modalità manuale. Controllare nuovamente eventuali diminuzioni di pressione.Se la pressione continua a diminuire, allora il sistema non è ermetico e probabilmente è presente un foro nel contenitore. Tornare alla modalità automatica e aprire P uno verso la camera. In modalità manuale, verificare che la pressione rimanga stabile.Se stabile, aumentare la manopola a due, il che porta la pressione del vaso a 40 millimetri di mercurio. Passare alla modalità automatica e osservare il vaso al microscopio. Se necessario, regolare il supporto della cannula per assicurarsi che non vi sia alcuna curvatura del vaso in modalità manuale.Verificare le perdite. Quindi aumentare gradualmente l'impostazione di uno dei canali, passando temporaneamente in modalità automatica per osservare il vaso al microscopio fino al raggiungimento della pressione desiderata. Una volta raggiunta la pressione desiderata, spostare la camera sul microscopio stereoscopico.Collegare il regolatore di temperatura impostato a 37 gradi Celsius. Quindi collegare la pompa peristaltica e l'aspiratore per mantenere fresco il buffer di Krebs nel bagno. Incubare il vaso pressurizzato a 37 gradi Celsius per un'ora.Verificare periodicamente la presenza di perdite. Etichettare 7,5 millilitri di sangue intero prelevato, con colorante vivace al buio. Quindi incubare per 10 minuti a 37 gradi Celsius.Raccogliere il sangue in una siringa, eliminando eventuali bolle d'aria, e collegarla a una pompa per siringhe dotata di giacca riscaldata impostata a 37 gradi Celsius. Chiudere il trasduttore P uno verso la camera e collegare la siringa e i tubi di scarico. Spurgare il sangue a 1000 microlitri al minuto attraverso il tubo di scarico per rimuovere eventuali bolle d'aria, quindi aprire P uno verso la camera.Il servocontrollo della pressione si regolerà automaticamente per mantenere la pressione desiderata; perfondere il sangue a 100 microlitri al minuto utilizzando un microscopio fluorescente abbinato a una videocamera digitale per registrare due campi del vaso perfuso per 15 secondi in diversi punti temporali. Qui vengono mostrate immagini rappresentative di leucociti, considerati aderenti all'endotelio se rimangono stazionari per 10 secondi. Con registrazioni video in ciclo continuo, le cellule possono essere conteggiate come media per campo, mentre sia la pressione bassa che quella alta indurranno un certo grado di adesione.Si osserva un significativo aumento dell'adesioncità dei leucociti alla pressione intraluminale più elevata. Questo fenomeno è dimostrato quantitativamente in questo grafico, dove un numero maggiore di cellule per campo aderisce a 120 rispetto a 80 millimetri di mercurio di pressione. Dopo questa procedura, altri metodi come la PCR e l'immunohistochimica possono essere eseguiti per rispondere ad ulteriori domande, come l'espressione genica e proteica delle molecole di adesione.

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Interazioni intravitale Microscopia di leucociti-endoteliali e piastrine-leucociti in Mesenterial Vene Mice

Questo manoscritto descrive l'uso di topi transgenici reporter e vie di somministrazione differenti di coloranti fluorescenti in angiotensina II-ipertensione indotta mediante videomicroscopia video microscopia dei vasi sanguigni per valutare l'attivazione di cellule immunitarie e loro capacità di rotolare e aderire all'endotelio.

Visualizzazione del leucocita rotolamento e adesione in angiotensina II-infuso topi: tecniche e insidie

Leucociti avidamente interagiscono con le cellule vascolari e le piastrine dopo lesione di parete del vaso o durante l'infiammazione. Qui, descriviamo un semplice test a flusso laminare per caratterizzare i meccanismi molecolari che sono alla base delle interazioni tra leucociti ed i loro partner cellulari.

Analisi di flusso laminare-based per indagare il reclutamento leucocitario su cellule vascolari coltivate e piastrine aderenti

Questo protocollo dettagliato fornisce una descrizione dettagliata della messa a punto sperimentale e analisi dei dati per la valutazione delle risposte infiammatorie in hiPSC-ECs e l'analisi di adesione del leucocita sotto flusso fisiologico.

Saggio di microfluidic per la valutazione di adesione del leucocita alle cellule endoteliali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC-ECs)

In questo protocollo, un test microfluido biomimetico, in grado di riprodurre un ambiente microvascolare fisiologicamente rilevante e riprodurre l'intera cascata di adesione/migrazione leucocitaria, viene impiegato per studiare le interazioni leucocitaria-cellula endoteliale nella malattia infiammatoria.

Un sistema microfisiologico per studiare l'interazione leucocitaria-cellula endoteliale durante l'infiammazione

La microscopia a fluorescenza intravitale può essere utilizzata per studiare le interazioni leucocita-endoteliali e la perfusione capillare in tempo reale. Questo protocollo descrive i metodi per visualizzare e quantificare questi parametri nel microcircolo polmonare utilizzando un sistema di imaging polmonare stabilizzato nel vuoto.

Microscopia a fluorescenza intravitale a campo largo della microcircolazione polmonare polmonare polmonare acuta sperimentale utilizzando un sistema di imaging stabilizzato sotto vuoto

Dimostriamo un metodo per marcare le pareti del sistema vascolare retinico e i leucociti aderenti. Questi leucociti aderenti possono quindi essere contati al microscopio a fluorescenza come parametro dell'infiammazione o della risposta di tale infiammazione alle terapie.

Quantificazione dei leucociti aderenti indotti dal diabete nella vascolarizzazione retinica

Scopri la visualizzazione dell'adesione dei leucociti all'endotelio in vasi pressurizzati ex vivo. Questo metodo permette di studiare l'infiammazione vascolare e l'ipertensione in condizioni fisiologiche realistiche.

Imaging adesione dei leucociti all'endotelio vascolare ad alta pressione intraluminale

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