Name: Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2007-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 52 s
Description: Impara l'arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep di StemCell Technologies. Questo metodo di selezione negativa garantisce alta purezza e vitalità cellulare per studi immunologici.

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Un protocollo dettagliato è incluso in ogni cocktail Rosetta isolamento settembre ed è disponibile online sul sito della StemCell tecnologie 1.

<ol><li>Procedures and instruction manuals. , 
	
 <a target="_blank" href="http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx">http://www.stemcell.com/technical/technicalrsproc.aspx</a> Forthcoming.</li>
</ol>

Le cellule isolate con questa tecnica può essere ulteriormente suddiviso in diverse popolazioni con altri kit di separazione delle cellule.

PBS integrato con il 2% FCS e soluzioni HISTOPAQUE deve essere portato a temperatura ambiente prima dell&#39;inizio della procedura.

arricchimento di cellule nk dal sangue umano con il kit rosettesep technologies stemcell

Enrichment of NK Cells from Human Blood with the RosetteSep Kit from StemCell Technologies

Natural killer (NK) sono grandi linfociti granulari citotossici che appartengono al sistema immunitario innato e svolgono ruoli importanti nella lotta contro il cancro e le infezioni, ma sono anche implicati nelle prime fasi della gravidanza e rigetto del trapianto. Queste cellule sono presenti nel sangue periferico, da cui possono essere isolati. Le cellule possono essere isolate mediante selezione sia positiva che negativa. Per la selezione positiva usiamo anticorpi diretti ad un marcatore di superficie presente solo sulle cellule di interesse mentre per selezione negativa usiamo cocktail di anticorpi mirati a marcatori di superficie presenti in tutte le cellule ma le cellule di interesse. Quest&#39;ultima tecnica presenta il vantaggio di lasciare le cellule di interesse privi di anticorpi, riducendo così il rischio di attivazione delle cellule indesiderate o differenciation. In questo video-protocollo dimostriamo come separare le cellule NK dal sangue umano per selezione negativa, utilizzando il kit RosetteSep dalle tecnologie StemCell. La procedura comporta l&#39;ottenimento di sangue periferico umano (con una revisione istituzionale bordo approvato il protocollo per proteggere i soggetti umani) e mescolandolo con un cocktail di anticorpi che si legano ai marcatori assenti sulle cellule NK, ma presente su tutte le altre cellule mononucleate presenti nel periferico sangue (ad esempio, i linfociti T, monociti ...). Gli anticorpi presenti nel cocktail sono coniugati ad anticorpi diretti a glicoforina A eritrociti su. Tutte le cellule indesiderate e globuli rossi saranno quindi intrappolati in complessi. Il mix di cocktail di sangue e anticorpo è poi diluito, sovrapposto su una pendenza HISTOPAQUE, e centrifugati. Le cellule NK (&gt; 80% puro) potranno essere ritirati presso l&#39;interfaccia tra il HISTOPAQUE e il plasma diluito. Cocktail simili sono disponibili per l&#39;arricchimento di altre popolazioni di cellule, come i linfociti T umani.

Cellule killer naturali sono una piccola popolazione di linfociti. Qui mostriamo come isolare queste cellule dal sangue umano per selezione negativa, utilizzando un kit da Technologies StemCell. Le cellule ottenute sono vitali e incontaminata dagli anticorpi, e quindi pronti per essere utilizzati per una serie di procedure.

Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell

Le cellule natural killer (NK) sono linfociti citotossici granulari di grandi dimensioni che appartengono al sistema immunitario innato e svolgono ruoli fondamentali nella lotta contro il cancro...

Ciao, sono Christine Beaton. Sono un ricercatore assistente nel laboratorio di George Chen presso il Dipartimento di Fisiologia e Biofisica dell'Università della California a Irvine. Oggi vi mostrerò come selezionare negativamente le cellule killer naturali dal sangue umano utilizzando i kit a cocktail delle tecnologie delle cellule staminali.Il motivo per cui utilizziamo questo kit di Stem Cell Technologies è che ci consente di ottenere un'elevata purezza cellulare e la selezione negativa ci permette di isolare cellule che non sono state legate a un anticorpo. In questo modo, non si verificano eventi imprevisti con queste cellule. Il funzionamento del kit Tsep prevede l'uso di anticorpi che si legano a tutte le cellule presenti nel sangue che non ci interessano.Nel mio caso, cellule T, cellule B, monociti e poi anticorpi che si legano alla glicoforina A nei globuli rossi; ciò che hanno fatto è collegare un anticorpo contro un globulo bianco a un anticorpo contro un globulo rosso. Quindi, si formerà un complesso costituito da un globulo bianco indesiderato legato a più globuli rossi e, poiché i globuli rossi hanno una densità maggiore rispetto ai globuli bianchi, una volta posizion

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Qui si descrive un metodo per estendere in modo efficiente e purificare un gran numero di cellule NK e valutare la loro funzione.

Espansione, di purificazione, e la valutazione funzionale delle cellule del sangue umano periferico NK

Questo video dimostra il metodo per analizzare il metabolismo energetico nelle cellule NK umane attivate utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare. Diversi inibitori dei complessi della catena di trasporto degli elettroni influenzano la sintesi di ATP, che viene misurata attraverso il tasso di consumo di ossigeno o OCR, fornendo informazioni sul metabolismo cellulare e sulla bioenergetica.

Monitoraggio in tempo reale del metabolismo energetico nelle cellule NK umane utilizzando un analizzatore di flusso extracellulare

Questo video dimostra una tecnica per la modificazione genetica mediata da ribonucleoproteine Cas9 di cellule natural killer primarie (NK). Una ribonucleoproteina Cas9, costituita da un'endonucleasi Cas9 legata a un RNA guida (gRNA) formata dall'accoppiamento di basi di un RNA CRISPR (crRNA) e di un crRNA transattivante (tracrRNA), viene introdotta nelle cellule natural killer primarie tramite elettroporazione. La ribonucleoproteina prende di mira e scinde il DNA ospite nel sito bersaglio,...

Una tecnica per l'editing genetico nelle cellule natural killer utilizzando CRISPR Cas9

Questo protocollo descrive lo sviluppo, l'espansione e immagini in vivo di cellule NK derivate da hESCs e iPSCs.

Sviluppo, di espansione, e<em&gt; In vivo</em&gt; Monitoraggio delle cellule NK umane da cellule staminali embrionali umane (hESC) ed e cellule staminali pluripotenti indotte (iPSCs)

Un metodo semplice ed affidabile è descritto qui di analizzare un insieme di funzioni delle cellule NK come degranulazione, citochine e chemochine ai differenti sottopopolazioni di cellule NK.

Citometria a flusso basato su test per il monitoraggio delle funzioni delle cellule NK

L'obiettivo di questo studio era quello di formulare le tecnologie che permettono per la trasduzione del gene successo in primarie cellule natural killer (NK). La trasduzione lentivirale destrano-mediata di umani o risultati primari di cellule NK del mouse in una maggiore efficienza di espressione genica. Questo metodo di trasduzione del gene migliorerà notevolmente la manipolazione genetica delle cellule NK.

Destrano migliora l'efficienza di trasduzione lentivirale di cellule NK primarie Murine ed umane

Qui, presentiamo un protocollo per produrre cellule NK murine silenziamento genico utilizzando un sistema di differenziazione privo di alimentatore per studi meccanicistici in vitro e in vivo.

Un nuovo sistema privo di alimentatore per la produzione di massa di cellule di assassino naturali murini In Vitro

Qui, presentiamo un protocollo per modificare geneticamente le cellule primarie o espanso umana naturale dell'assassino (NK) utilizzando Cas9 ribonucleoproteine (Cas9/RNP). Utilizzando questo protocollo, abbiamo generato le cellule NK umane carenti per trasformare il recettore del fattore di crescita – b 2 (TGFBR2) e ipoxantina fosforibosiltransferasi 1 (HPRT1).

Generazione di cellule Knock-out NK umano primario ed espansa utilizzando Cas9 ribonucleoproteine

Un protocollo per lo studio di eventi guidati da FcγRIIIa da anticorpi terapeutici in cellule natural killer umane è descritto qui. Questa piattaforma di stimolazione artificiale consente l'interrogazione delle funzioni emozionali a valle come la degranulazione, la produzione di chemochine / citochine e le vie di segnalazione mediate dalle porzioni FcγRIIIa e Fc degli anticorpi coinvolti nel legame.

Valutazione degli eventi delle cellule natural killer umane guidati dall'impegno di FcγRIIIa nella presenza di anticorpi terapeutici

Il presente protocollo mostra come differenziare le cellule CD3−/CD45+CD56+ con citotossicità lieve dalle cellule staminali umane a potenziale espanso (hEPSC) sia in condizioni di coltura 3D che 2D. Ciò consente la convalida fenotipica di routine senza la distruzione del complesso microambiente.

Generazione di cellule Natural Killer da cellule staminali umane espanse

Qui, presentiamo un metodo per differenziare ed espandere le cellule natural killer che esprimono il recettore dell'antigene chimerico (CAR) derivato da iPSC umano con una migliore uccisione contro vari tumori maligni. Questo protocollo dimostra la differenziazione e l'espansione di cellule CAR-NK derivate da iPSC ottimizzate per natural killer (NK) e la misurazione dell'attività antitumorale contro varie linee cellulari tumorali.

Progressi nelle cellule natural killer che esprimono il recettore dell'antigene chimerico derivato da cellule staminali pluripotenti umane

Impara l'arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep di StemCell Technologies. Questo metodo di selezione negativa garantisce alta purezza e vitalità cellulare per studi immunologici.

Arricchimento di cellule NK dal sangue umano con il kit RosetteSep Technologies StemCell

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