Una tecnica semplificata per produrre un modello di lesione ischemica

L'obiettivo generale del seguente esperimento è quello di rendere possibile la creazione di ferite ischemiche, non solo nei conigli normali, ma anche nei conigli con resistenza ridotta, come quelli anziani o diabetici. Tutte le tecniche attualmente utilizzate per la creazione di ferite ischemiche sono altamente invasive e, finora, nessuna di queste tecniche può essere utilizzata negli animali diabetici. Questa procedura utilizza un intervento chirurgico minimamente invasivo che inizia con l'esecuzione di tre piccole incisioni cutanee sui tre fasci vascolari.

Il passo successivo consiste nell'isolare e proteggere la vena centrale e il fascio vascolare in modo che la circolazione sanguigna all'orecchio sia ridotta ma non totalmente eliminata. Infine, i vasi, i nervi e i tessuti sottocutanei rimanenti vengono tutti recisi o legati attraverso le incisioni cutanee. L'ischemia dell'orecchio è confermata dall'assenza di polso arterioso, dall'aspetto dell'orecchio, dalla differenza di temperatura e dalla saturazione di ossigeno sottocutanea.

Questo intervento chirurgico minimamente invasivo può sembrare difficile da eseguire, ma in realtà è molto semplice. Il vantaggio principale di questa tecnica è che ha pochissime interruzioni della pelle. Da quando abbiamo pubblicato questa tecnica per la prima volta nel 2007, abbiamo ricevuto molte domande.

Da allora abbiamo ulteriormente semplificato questa procedura. Per rendere ancora più facile fare a meno dell'uso di un microscopio, Inizia pesando il coniglio selezionato, anestetizza il coniglio, usando una miscela di ketamina e xilazina. Monitora i segni vitali del coniglio, sul lato dorsale possono essere identificati tre fasci vascolari che irrorano l'orecchio.

Questi sono il fascio centrale, che è il più grande con garanzie che si collegano ad altri vasi. Il fascio di coccole in cui l'arteria è solitamente molto piccola o assente, e il fascio cranico. Sul lato ventrale, la pelle distale non riceve l'afflusso di sangue dai vasi prossimali.

Invece, i fasci di vasi sull'orecchio dorsale hanno numerosi rami penetranti attraverso la cartilagine per fornire l'afflusso di sangue alla pelle ventrale distale. In alcuni conigli, sul lato ventrale si trova anche un vaso sottocutaneo molto piccolo, che fornisce sangue a non più di un terzo della pelle ventrale. In un'incisione cutanea circonferenziale aperta, non c'è essenzialmente sanguinamento da un'incisione ventrale.

Prima di procedere, assicurati che il coniglio non risponda agli stimoli dolorosi usando un pizzico di dita dei piedi e un riflesso oculare, proteggi gli occhi dell'animale applicando una lacrima artificiale. Unguento. Mantieni il coniglio al caldo durante l'intervento chirurgico con un termoforo. Quindi, usando Betadine e scrub alcolico, entrambe le orecchie e le pelli circostanti drappeggiano il coniglio, in modo che solo le due orecchie siano esposte.

Un orecchio sarà reso ischemico mentre l'altro fungerà da controllo. Gli strumenti utilizzati per l'intervento sono un bisturi chirurgico con lama numero 15, due paia di pickup, uno per la pelle e un altro per gli altri tessuti molli. Tre pinze per zanzare, una o due paia di micro forbici curve, un paio di piccole forbici per tagliare suture e fazzoletti duri, un porta aghi e alcuni punzoni in acciaio inossidabile.

Inizia l'intervento identificando i tre peduncoli vascolari in base alle arterie e alle vene. Utilizzando una lama numero 15. Praticare con cura un'incisione cutanea verticale sul peduncolo vascolare centrale.

Isolare la vena centrale dai tessuti circostanti e proteggerla. Questo passaggio è in cerchio. La vena centrale per la retrazione.

Sezionare il nervo centrale liberamente. Normalmente si trova sul lato della vena. Il nervo viene tagliato con le forbici.

Sezionare l'arteria centrale liberamente. Normalmente si trova sul lato cranico e più profondo della vena, lega l'arteria e la divide. Pulisci i tessuti intorno alla vena centrale sopra la cartilagine dell'orecchio.

Una seconda incisione cutanea viene praticata sul peduncolo della coccola. Per conservare il fascio. I vasi vengono sezionati liberi e circondati per protezione.

Ciò è particolarmente utile quando la vena è grande, come in questo coniglio. Fai un tunnel tra questa e la prima incisione. Tagliare i tessuti sottocutanei sopra la cartilagine.

Una terza incisione cutanea viene praticata sopra il fascio cranico. L'intero fascio viene legato e separato. La pelle sopra il terzo fascio viene tagliata.

Questa vena è molto vicina alla pelle, quindi non tagliare troppo in profondità. L'intero fascio di vasi viene quindi sezionato liberamente, legato e separato. Usando un coltello e le forbici, praticare un tunnel sottocutaneo.

Le tre incisioni interrompono tutti i tessuti sottocutanei, i muscoli, i nervi e i piccoli rami vascolari. Utilizzare ulteriori dissezioni affilate e smussate per ripulire la base, lasciando la cartilagine nuda larga da cinque a 10 millimetri. Il sanguinamento può essere controllato con la pressione della garza.

L'elettrocauterizzazione non è necessaria. La pelle all'interno dell'orecchio non viene tagliata in quanto non trasporta molto sangue. L'aspetto importante di questa procedura è garantire l'adeguata dissezione del tunnel sottocutaneo proteggendo i vasi.

Questa non dovrebbe essere una procedura così difficile. Dopo l'emostasi, le tre incisioni cutanee vengono chiuse utilizzando quattro o cinque suture oh e controllate nuovamente per assicurarsi che le incisioni cutanee siano correttamente chiuse e che non si vedano sanguinamenti Per i test antidroga della ferita, quattro. Ferite cutanee circolari a tutto spessore possono essere create sul lato ventrale di ciascun orecchio con un punzone in acciaio inossidabile da sei millimetri.

La distanza tra le ferite è di almeno 20-30 millimetri. La pelle e il pericondrio all'interno del punzone vengono rimossi, ma la cartilagine non viene danneggiata. Dopo che le ferite sono state create su entrambe le orecchie, coprirle temporaneamente con una garza e trasferire il coniglio in una sala operatoria per l'applicazione del farmaco.

Dopo che le ferite sono state pulite da eventuali coaguli di sangue, applicare farmaci di prova e controllo. Le ferite vengono coperte con medicazione occlusiva per evitare l'essiccazione. Quando si confrontano due farmaci, applicare ciascun farmaco sia su una ferita prossimale che distale.

Questo controlla i tassi di differenza di guarigione delle ferite nell'orecchio distale e prossimale dopo l'intervento. L'orecchio ischemico di solito diventa freddo e cianotico con una ridotta sensibilità distale all'incisione. L'edema I lieve può presentarsi per alcuni giorni, ma scompare da solo e non è necessario alcun trattamento.

Il polso dell'arteria centrale è assente. Il movimento dell'orecchio è ridotto, ma non totalmente eliminato perché alcuni muscoli sono ancora attaccati alla base dell'orecchio. Se il tunnel è realizzato correttamente, è possibile vedere una chiara rientranza tra le incisioni.

Un cerotto al fentanil è attaccato alla pelle della schiena per alleviare il possibile dolore postoperatorio. La temperatura della pelle viene misurata quotidianamente su ciascun orecchio con un termometro. La circolazione sanguigna nell'orecchio viene misurata utilizzando un misuratore di tensione transcutanea dell'ossigeno o un flussometro laser doppler.

Dopo una settimana, le suture delle incisioni cutanee possono essere rimosse a partire dal 2007. La procedura è stata utilizzata in più di 70 conigli. Ciò include 23 conigli diabetici e quattro anziani.

Le differenze di temperatura tra l'orecchio non ischemico e quello ischemico variavano da uno a 10 gradi Celsius, con la maggior parte dei conigli che rientrava nell'intervallo da due a sei gradi Celsius. La differenza di temperatura era più alta nei primi giorni dopo l'intervento chirurgico, diminuendo gradualmente dopo il giorno 15, ma era ancora mantenuta alla fine di un mese. Sono stati prelevati sei campioni di tessuto da ciascun orecchio e il contenuto di fosfato ad alta energia è stato misurato mediante HPLC, sia un TP che un'energia totale.

Le concentrazioni erano più alte nelle orecchie normali rispetto alle orecchie ischemiche. I tempi di guarigione della ferita sono sempre stati più lunghi per l'orecchio ischemico rispetto all'orecchio non ischemico negli animali non diabetici e diabetici in 15 conigli non diabetici. Il tempo medio di guarigione è stato di 17,8 giorni sull'orecchio non ischemico rispetto a 21,8 giorni sull'orecchio ischemico.

In 10 animali diabetici di 12 mesi, il tempo medio di guarigione è stato di 18,3 giorni sull'orecchio non ischemico rispetto a 29,1 giorni sull'orecchio ischemico. In tutti gli animali, compresi i conigli diabetici, le incisioni cutanee sono guarite normalmente senza complicazioni nei conigli. Con un periodo di diabete di 24 mesi, le ferite ventrali hanno una maggiore tendenza a infettarsi.

Questa caratteristica lo rende più vicino alle ferite diabetiche umane. Un campione istologico mostra la guarigione del tunnel sottocutaneo in cui il muscolo è assente ed è sostituito da tessuti fibrosi. Tuttavia, la pelle è intatta.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di trattare gli animali in modo umano. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in meno di un'ora. Abbiamo utilizzato questa tecnica in più di 70 conigli, tra cui 23 conigli diabetici, senza complicazioni come sanguinamento o infezione.

È una procedura molto sicura seguire questa procedura. Altri metodi come l'ischemia aggiuntiva, il danno ai nervi e l'inoculazione batterica possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive come ulcere vascolari, ulcere da pressione e neuropatia diabetica.