Name: Impianto intracranica con 3D successivi In Vivo Bioluminescent Imaging dei gliomi Murine (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-06T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 46 s
Description: Scopri l'impianto intracranico di cellule GL261 in topi C57BL/6 per modellare i gliomi murini. Questo metodo combina imaging bioluminescente in vivo con ricostruzione 3D per tracciare quantitativamente la crescita tumorale nel tempo.

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Vorremmo ringraziare il dottor Joshua B. Rubin per il generoso dono dei plasmidi per il sistema di lentivirus e Mahil Rao per il suggerimento utile per la preparazione della GL261-luc cellule. Ringraziamo gli studenti Sostenere Tumore Brain Research (SSBTR), The Barrow Neurological Fondazione e la Fondazione Wallace per il loro generoso sostegno. Esperimenti su animali sono stati eseguiti secondo le linee guida e regolamenti stabiliti dalla cura degli animali e del Comitato Istituzionale uso dell&#39;Ospedale San Giuseppe e Medical Center.

<ol><li>Candolfi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intracranial+glioblastoma+models+in+preclinical+neuro-oncology%3A+neuropathological+characterization+and+tumor+progression%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurooncol%22%5BJournal%5D)">Intracranial glioblastoma models in preclinical neuro-oncology: neuropathological characterization and tumor progression.</a> J Neurooncol. 85, 133-148 (2007).</li>
<li>Stafford, P., Abdelwahab, M. G., do, K. im, Preul, Y., Rho, M. C., M, J., Scheck, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+ketogenic+diet+reverses+gene+expression+patterns+and+redudes+reactive+oxygen+species+levels+when+used+as+an+adjuvant+therapy+for+glioma%5BTitle%5D)+AND+%22Nutr+Metab%22%5BJournal%5D)">The ketogenic diet reverses gene expression patterns and redudes reactive oxygen species levels when used as an adjuvant therapy for glioma.</a> Nutr Metab. 7, (2010).</li>
<li>Caliper Life Sciences, Inc. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Living+Image+Software+Version+4.0.+VivoVision+Systems%22">Living Image Software Version 4.0. VivoVision Systems</a>. , (2010).</li>
<li>Paxinos, G. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Mouse+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Mouse Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , 2nd Ed, Academic Press. (2001).</li>
<li>Jouanneau, E., Poujol, D., Gulia, S., Le, M. I., Blay, J. Y., Belin, M. F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dendritic+cells+are+essential+for+priming+but+inefficient+for+boosting+antitumour+immune+response+in+an+orthotopic+murine+glioma+model%5BTitle%5D)+AND+%22Cancer+Immunol+Immunother%22%5BJournal%5D)">Dendritic cells are essential for priming but inefficient for boosting antitumour immune response in an orthotopic murine glioma model.</a> Cancer Immunol Immunother. 55, 254-267 (2006).</li>
</ol>

Accesso gratuito a questo articolo è sponsorizzato da Caliper Life Sciences.

L&#39;inoculo delle cellule è infuso ad una profondità di 2,6 mm dalla superficie del cervello dopo la creazione di una tasca 0,4 mm. Per garantire il corretto posizionamento e la profondità dell&#39;ago una radiografia può essere assunto con un C-Arm o simili a raggi X dispositivo di intensificazione dell&#39;immagine, ma questo è opzionale. Le complicanze della chirurgia possono insorgere se l&#39;animale non è adeguatamente sedato, a quel punto l&#39;animale può muoversi durante l&#39;infusione delle cellule. Questo può causare perdite di miscela di cellule o sanguinamento da pista ago. Perdita di cellule causa la crescita ectopica di cellule tumorali. E &#39;anche importante non forare il ventricolo, che può essere fatto se l&#39;è fatta burrhole mediale a mm 2,3 descritte nel protocollo 4. Il corretto posizionamento della diffusione ago e cellulari è stato testato infondendo un mouse con 2 colorante blu di metilene microlitri e sezionare il tessuto cerebrale per verificare la posizione del colorante infuso. In questo protocollo abbiamo utilizzato lo spettro IVIS imaging in vivo del sistema e tha Living software Image (v 4.0) progettato per essere utilizzato con questo strumento. (Caliper Life Sciences). Qualsiasi paragonabile sistema di imaging in vivo e gli strumenti di analisi delle immagini può essere usata per ottenere risultati simili. Questi sistemi offrono alcuni vantaggi rispetto ai tradizionali risonanza magnetica (MRI) per seguire la crescita di un tumore sperimentale intracranica. Il più evidente è il costo relativo dei 2 strumenti - Macchine per animali RM sono molto più costosi e di solito richiedono i servizi di un tecnico specializzato risonanza magnetica. Imaging in vivo, come ciò che è stato qui descritto può essere effettuata dall&#39;utente finale. I dati bioluminescenza è quantitativa, mentre la quantificazione dei dati MRI è in termini di tempo e un po &#39;inesatto. Inoltre, le immagini MRI mostrano edema e infiammazione, oltre alle cellule tumorali e può essere difficile separare l&#39;effetto del trattamento di tumore. Per queste ragioni ottenere accurate misurazioni volumetriche del tumore in crescita può essere una sfida. Bioluminescenza richiede ATP, Quindi solo le cellule tumorali vive contribuire ai dati dimensioni del tumore. Nonostante questo, ci sono alcuni vantaggi a risonanza magnetica se una macchina è disponibile. Le cellule non devono essere etichettati con un pennarello bioluminescenti per essere visualizzate alla risonanza magnetica. La possibilità di visualizzare peri-tumorali edema può essere un vantaggio per alcuni protocolli sperimentali. Un punto di forza di entrambe le tecnologie è che l&#39;utilizzo di uno non esclude l&#39;uso degli altri, quindi i dati possono essere ottenuti sulla crescita del tumore così come la presenza di peri-tumorali edema e infiammazione dello stesso animale, quando le due tecnologie sono disponibili al ricercatore.

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente o fornitura </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> GL261-luc2 Bioware Ultra </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> GL261-luc2 </td><td></td></tr><tr><td> Dulbecco modificato (DMEM) </td><td> Invitrogen </td><td> 10313039 </td><td></td></tr><tr><td> Geneticin (G418) </td><td> Gibco (Invitrogen) </td><td> 11811-023 </td><td></td></tr><tr><td> Di siero fetale bovino (FCS) </td><td> Invitrogen </td><td> 26140079 </td><td></td></tr><tr><td> Soluzione salina tamponata con fosfato (PBS) </td><td> Invitrogen </td><td> 70011044 </td><td></td></tr><tr><td> C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr Mice </td><td> NCI-Frederick </td><td></td><td></td></tr><tr><td> AKWA Tears lubrificante unguento oftalmico </td><td> Akorn Inc </td><td> 17478-062-35 </td><td></td></tr><tr><td> Ketaset (cloridrato di ketamina) </td><td> Wyeth </td><td> 11570775 </td><td></td></tr><tr><td> Sedazine (cloridrato xilazina) </td><td> Wyeth </td><td> 10031894 </td><td></td></tr><tr><td> Piccoli Animali Strumento Stereotassica </td><td> Kopf Instruments </td><td> 900 </td><td></td></tr><tr><td> UltraMicroPump con SYS-Micro4 controller </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> UMP3-1 </td><td> Se non disponibile, è possibile infondere manualmente </td></tr><tr><td> Siringa 10μl con 26 gauge smussato aghi </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> SGE010RNS </td><td></td></tr><tr><td> Adison Pinza </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> 500092 </td><td></td></tr><tr><td> Penfield Dissector </td><td> Codman </td><td> 65-1015 </td><td></td></tr><tr><td> 16g 1 ½ di precisione Glide Needle </td><td> Beckton, Dickinson and Company (BD) </td><td> 305198 </td><td></td></tr><tr><td> Lama maniglia chirurgico </td><td> BD </td><td> 371030 </td><td></td></tr><tr><td> Taglia 15 Lama </td><td> BD </td><td> 371315 </td><td></td></tr><tr><td> 4-0 sutura Vicryl </td><td> Ethicon </td><td> VCP496G </td><td></td></tr><tr><td> Bone Wax </td><td> Medline </td><td> DYNJBW25 </td><td></td></tr><tr><td> Povidine Iodio-tampone Sticks </td><td> Medline </td><td> MD93901 </td><td></td></tr><tr><td> D-Luciferin Potassio Salt </td><td> Caliper Life Sciences </td><td> 122796 </td><td></td></tr><tr><td> Foraneo (isoflurano) </td><td> Baxter </td><td> 1001936060 </td><td></td></tr><tr><td> OPMI Pentero Microscopio </td><td> Carl Zeiss, Inc. </td><td></td><td> Ogni microscopio operatorio sarà sufficiente </td></tr><tr><td> Xenogen Spectrum IVIS con sistema di anestesia opzionale </td><td> Caliper Life Sciences </td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

impianto intracranica con 3d successivi in vivo bioluminescent imaging dei gliomi murine

Intracranial Implantation with Subsequent 3D In Vivo Bioluminescent Imaging of Murine Gliomas

Il mouse glioma 261 (GL261) è riconosciuto come un sistema di modello in vivo che riassume molte delle caratteristiche del glioblastoma multiforme umano (GBM). La linea cellulare è stata originariamente indotta da iniezione intracranica di 3-metil-cholantrene in un C57BL / 6 ceppo di topi singenici 1; quindi, immunologicamente competenti C57BL / 6 topi possono essere utilizzati. Mentre usiamo GL261, il seguente protocollo può essere utilizzato per l&#39;impianto e il monitoraggio di qualsiasi modello intracranica del tumore del mouse. GL261 cellule sono state progettate per esprimere stabilmente lucciola luciferasi (GL261-luc). Abbiamo anche creato la più brillante GL261-luc2 linea cellulare di trasfezione stabile del gene luc2 espressa dal promotore CMV. Topi C57BL/6-cBrd/cBrd/Cr (variante albino di C57BL / 6) dal National Cancer Institute, Frederick, MD sono stati utilizzati per eliminare l&#39;attenuazione della luce causata da pelle nera e pelliccia. Con l&#39;uso di C57BL albino / 6 topi, imaging in vivo utilizzando la Spectrum IVIS in vivo iml&#39;invecchiamento del sistema è possibile dal giorno di impianto (Caliper Life Sciences, Hopkinton, MA). Il GL261 e GL261-luc-luc2 linee cellulari hanno mostrato lo stesso comportamento in vivo come genitori GL261 cellule. Alcune delle caratteristiche istologiche condivise presenti nel GBM umano e questo modello di topo sono: necrosi tumorale, pseudopalisades, neovascolarizzazione, invasione, ipercellularità, e l&#39;infiammazione 1. Prima di animali l&#39;impianto sono stati anestetizzati con una iniezione intraperitoneale di ketamina (50 mg / kg), xilazina (5 mg / kg) e buprenorfina (0,05 mg / kg), inserito in un apparato stereotassico e una incisione è stata fatta con un bisturi il linea mediana del cranio. Un burrhole è stata fatta posteriore 0,1 millimetri al bregma e 2,3 millimetri a destra della linea mediana. Un ago è stato inserito ad una profondità di 0.4mm 3mm ritirato ad una profondità di 2,6 mm. Due ml di GL261-luc o GL261-luc2 cellule (10 7 cellule / ml) sono state infuse nel corso di 3 minuti. Il burrhole è stato chiusobonewax e con l&#39;incisione è stata suturata. In seguito l&#39;impianto stereotassico le cellule bioluminescenti sono rilevabili dal giorno di impianto e il tumore può essere analizzato utilizzando la funzione di ricostruzione delle immagini 3D dello strumento Spectrum IVIS. Gli animali ricevono una iniezione sottocutanea di 150 mg luciferina / kg di peso corporeo 20 minuti prima di imaging. Massa tumorale è quantificato mediante bioluminescenza medio del tumore nel tempo. Portatori di tumore nei topi sono stati osservati quotidianamente per valutare la morbilità e sono stati sacrificati quando uno o più dei seguenti sintomi sono presenti: letargia, incapacità di deambulare, la postura ingobbita, il mancato sposo, anoressia con conseguente perdita&gt; 10% del peso. I tumori sono stati evidenti in tutti gli animali della necroscopia.

Impianto intracranico di GL261 cellule in C57BL / 6 topi produce gliomi maligni che ricapitolano molte delle caratteristiche del glioblastoma multiforme umano. Abbiamo usato GL261 cellule che esprimono stabilmente luciferasi per permetterci di utilizzare<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging per seguire la progressione del tumore. L&#39;intervento e 3D<em&gt; In vivo</em&gt; Immagini sono dimostrati.

Impianto intracranica con 3D successivi In Vivo Bioluminescent Imaging dei gliomi Murine

Il glioma 261 (GL261) di topo è riconosciuto come un sistema modello in vivo che riproduce molte delle caratteristiche del glioblastoma multiforme (GBM) umano. Il...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare un modello intracranico di gliomi che possa essere seguito quantitativamente nel tempo mediante imaging in vivo. Questo risultato si ottiene innanzitutto raccogliendo cellule di glioma luminescenti, coltivandole e preparando una sospensione cellulare contenente da uno a due volte 10 alla settima cellule per millilitro. Il secondo passaggio della procedura consiste nell'impianto stereotassico delle cellule raccolte nel lobo frontale destro del cervello del topo.Successivamente segue l'iniezione sottocutanea di Luciferina nell'animale e la generazione di una curva cinetica per l'espressione della Luciferina. Utilizzando il sistema di imaging in vivo IVUS spectrum, l'ultimo passaggio della procedura consiste nell'effettuare ripetute acquisizioni di immagini sugli animali e nel monitorare la crescita del tumore. In definitiva, è possibile ottenere risultati che mostrano la crescita delle cellule tumorali e la localizzazione tridimensionale del tumore attraverso un segnale bioluminescente rilevabile mediante il sistema di imaging in vivo IVUS spectrum.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la risonanza magnetica (MRI), è che l'imaging bioluminescente identifica esclusivamente cellule tumorali vitali e non richiede un tecnico specializzato in MRI. Inoltre, consente di esaminare contemporaneamente più animali in un periodo di tempo più breve. Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo della neuro-oncologia, ad esempio quale sia l'efficacia di nuove terapie per i tumori cerebrali.In vivo, sebbene questo metodo possa fornire informazioni sui tumori cerebrali, può essere applicato anche ad altri sistemi organici, come i tumori polmonari, prostatici ed epatici. Per prepararsi a questa procedura, caricare almeno tre microlitri di inocolo cellulare di glioma in una siringa da 10 microlitri, 50 millimetri, con ago beccuccio da 26 gauge.Assicurarsi che le cellule non siano raggruppate, altrimenti potrebbe essere necessario ricaricare la siringa. Il topo anestetizzato viene posizionato nel telaio stereotassico e la testa del topo viene fissata utilizzando la pinza per la bocca come mostrato in questa immagine. Inserire la siringa caricata nel microiniettore.Per iniziare la procedura chirurgica, effettuare un'incisione cutanea utilizzando una lama numero 15 e una pinza dentata. Praticare un'incisione lunga da 10 a 15 millimetri tra gli occhi dell'animale, procedendo verso le orecchie, esponendo il bgma. Assicurarsi di identificare correttamente il bgma per.È facile confonderla con l'area sinusale che si trova in posizione distale rispetto al bma. Utilizzando un ago da un pollice e mezzo del diametro di 16 gauge, praticare un foro nel cranio a 0,1 millimetri posteriormente alla sutura coronale e a 2,3 millimetri a destra della linea mediana, applicando una leggera pressione sull'ago mentre lo si ruota fino a perforare il cranio ed esporre il cervello; quindi spostare l'ago per l'iniezione mediante il microiniettore finché non tocca appena la superficie del cervello. Da questa posizione, avanzare l'ago a una profondità di tre millimetri.Mantenere l'ago in posizione per tre minuti. Successivamente, ritirare l'ago di 0,4 millimetri fino a una profondità totale di 2,6 millimetri al di sotto della superficie del cervello. Questo crea una piccola tasca in cui le cellule verranno infuse per garantire un posizionamento e una profondità corretti.È possibile acquisire immagini radiografiche delle profondità dell'ago utilizzando un braccio a C; infondere la sospensione cellulare per tre minuti utilizzando il microinfusore impostato su un volume di 2000 nanolitri con una velocità di infusione di 667 NANOLITERS al minuto. Al termine dell'infusione, mantenere l'ago in posizione per due minuti per prevenire perdite dal sito di infusione. Successivamente, ritirare lentamente l'ago completamente.Dopo aver rimosso l'ago, coprire il foro trapanato con cera d'osso utilizzando un dissecatore di Penfield. Infine, suturare l'incisione con un punto di sutura in Vicryl 4-0, assicurandosi che non rimangano ampie lacune nella cute. In vivo.L'imaging della bioluminescenza viene eseguito con il sistema di imaging IVIS Spectrum. Avviare il software Living Image e inizializzare il sistema di imaging IVIS Spectrum facendo clic sul pulsante di inizializzazione del sistema IVIS situato nell'angolo in basso a destra del pannello di controllo. Selezionare la modalità di imaging luminiscente nell'angolo in alto a sinistra del pannello di controllo per determinare il tempo ottimale per l'imaging della bioluminescenza.Dopo l'iniezione di Lucifer nell'animale, è necessario eseguire innanzitutto uno studio cinetico con l'animale sedato nella camera di imaging. Acquisire la prima immagine circa cinque minuti dopo l'iniezione di Lucifer per generare una curva cinetica dell'espressione di Luciferian. Creare una sequenza per acquisire immagini ogni tre minuti fino a un'ora.Fare clic sul pulsante di configurazione della sequenza nel pannello di controllo. Nel pannello di controllo, specificare le impostazioni per la prima immagine bioluminescente della sequenza, iniziando con l'apertura media e l'esposizione automatica.Per determinare l'esposizione ottimale, si consiglia di impostare il tempo. Selezionare il pulsante ritardo nell'editor di sequenza e specificare un tempo di ritardo di tre minuti tra ogni acquisizione. Fare clic su aggiungi: i parametri di acquisizione nell'editor di sequenza verranno quindi aggiunti alla tabella.Ripetere questo passaggio per ogni immagine della sequenza una volta stabilita la curva. Il tempo ottimale di acquisizione può essere determinato tracciando l'intensità del segnale in funzione del tempo per ottenere il segnale più intenso e accurato. Gli animali devono essere sottoposti a imaging nel momento del massimo conteggio di fotoni in vivo, che corrisponde a circa 25 minuti dopo l'iniezione di luciferina, come mostrato da questa curva.Per acquisire l'immagine di un animale sperimentale, utilizzare l'opzione automatica nella voce relativa al tempo di acquisizione. Questa opzione consente al software di determinare il bin e la durata ottimale per l'acquisizione dell'immagine. Salvare i file del programma e i commenti successivi alle immagini nella directory del computer dell'utente.Per iniziare l'acquisizione di immagini 3D, utilizzare la procedura guidata di imaging per selezionare la sonda reporter della lucciola. Nella finestra di delimitazione della bioluminescenza, selezionare Avanti e appariranno sullo schermo sei selezioni spettrali da acquisire; selezionare Acquisisci sequenza e le immagini verranno catturate utilizzando le impostazioni corrispondenti nella scheda topografia superficiale. Nella barra degli strumenti, mascherare la fotografia in modo da adattarla al contorno dell'animale.Per creare una mesh ricostruita della topografia superficiale dell'animale, passare alla scheda di ricostruzione 3D DLI sulla barra degli strumenti e selezionare le acquisizioni di immagine appropriate per la ricostruzione del segnale. Assicurarsi che muscolo sia indicato tra le proprietà del tessuto e firefly nello spettro della sorgente. Fare clic su ricostruisci nella scheda analisi e compariranno la ricostruzione 3D della superficie dell'animale e la corrispondente ricostruzione della sorgente del segnale.L'analisi dei dati può iniziare dopo che l'immagine è stata acquisita e salvata; accedere al file del programma cliccando sul pulsante Sfoglia e selezionando il file. Le informazioni sull'immagine sono disponibili nella sezione Visualizza informazioni immagine. Quantificare l'intensità del segnale selezionando il pulsante degli strumenti per la regione di interesse o ROI.Assicurarsi che l'immagine venga analizzata in modalità fotoni selezionando l'opzione photon. Nell'elenco a discesa situato nell'angolo in alto a sinistra del pannello di controllo dell'immagine, selezionare il pulsante ROI di misurazione dall'elenco a discesa di tipo e scegliere la forma ROI desiderata. Le opzioni disponibili sono cerchio, quadrato e/o griglia.Impostare la posizione della ROI trascinando la selezione della forma della ROI sulla regione contenente il segnale bioluminescente. Assicurarsi di coprire tutte le aree di intensità nell'immagine acquisita. Infine, fare clic sul pulsante misura per calcolare l'intensità del segnale della ROI.L'etichetta ROI viene visualizzata. L'intensità indica un impianto cellulare riuscito quando le cellule impiantate sono rilevabili mediante imaging di bioluminescenza nel giorno dell'intervento chirurgico, indipendentemente dal fatto che le cellule siano state trasfettate con il gene luc o luc2. Questo grafico mostra la crescita delle cellule tumorali GL261-luc in un topo albino C57BL/6; la bioluminescenza è stata misurata ogni tre giorni e riportata come conteggio fotonico in vivo in funzione dei giorni successivi all'innesto.Le fotografie mostrano la bioluminescenza in diversi momenti temporali. La colorazione indica la bioluminescenza, che è proporzionale al numero di cellule tumorali. Gli animali vengono soppressi al sopraggiungere di malattia o di condizioni di benessere compromesso.Sebbene non sia una parte standard di queste analisi, il cervello può essere dissezionato ed è possibile aggiungere Lucifer per via topica al fine di ottenere un'immagine ex vivo. Questa procedura deve essere eseguita immediatamente dopo l'eutanasia dell'animale poiché la reazione di bioluminescenza richiede ATP. Questo grafico confronta i conteggi di fotoni ottenuti da tumori derivati da cellule GL 2 6 1 lux rispetto a cellule GL 2 6 1 L due. I risultati, ottenuti in media da cinque animali, mostrano che il gene L due conferisce un livello maggiore di bioluminescenza.Questa figura successiva mostra diverse viste di una ricostruzione tridimensionale dell'impianto intracranico di cellule GL 2 6 1 L due, coregistrato con lo scheletro e il cervello del topo. È stata inoltre effettuata una comparazione cinetica tra iniezioni sottocutanee e intraperitoneali: tre minuti dopo l'iniezione di Lucifer, il topo è stato sedato ed è stata eseguita un'acquisizione d'immagine ogni tre minuti per un'ora e successivamente ogni sei minuti, al fine di generare una curva cinetica della bioluminescenza. Come mostrato qui, una somministrazione sottocutanea di Lucifer, indicata in rosso, è superiore a un'iniezione intraperitoneale, indicata in nero, e il momento ottimale per acquisire le immagini negli animali è di circa 25 minuti dopo l'iniezione di Lucifer.Una volta padroneggiata, la tecnica chirurgica può essere eseguita in un'ora se realizzata correttamente. Dopo questa procedura, altri metodi come la risonanza magnetica (MRI) o l'imaging fluorescente possono essere effettuati per rispondere a ulteriori domande. Ad esempio, se è presente edema attorno al tumore o quali altri cambiamenti molecolari o biochimici si stanno verificando all'interno e attorno al tumore.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come eseguire un'impianto intracranico e un'immagine in vivo tridimensionale di cellule di glioma murino.

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Luciferasi modificati xenotrapianti di tumori al cervello umano può essere stabilita intracranially in topi atimici, con successivo monitoraggio della crescita tumorale e la risposta alla terapia con l'imaging bioluminescenza. In combinazione con l'analisi di sopravvivenza, il monitoraggio bioluminescenza è uno strumento di ricerca indispensabile per test pre-clinici di terapie che sono considerati per il trattamento dei tumori cerebrali.

Stabilire intracranica xenotrapianti Brain Tumor Con successiva analisi della crescita tumorale e risposta alla terapia con Imaging bioluminescenza

L'imaging bioluminescenza di ipossia-inducibile fattore 1α attività è applicata a monitorare lo sviluppo del tumore ipossia cerebrale in un modello di cancro al seno del mouse metastasi al cervello.

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Stereotassica impianto intracranico e<em&gt; In vivo</em&gt; Imaging Bioluminescent di xenotrapianti di tumori in un sistema modello del mouse di Glioblastoma Multiforme

Fonte: Clark, A.J., et al. Imaging a bioluminescenza di un modello animale immunocompetente per il glioblastoma. J. Vis. Exp. (2016)Questo video mostra l'imaging a bioluminescenza per monitorare la progressione del glioblastoma in un modello murino immunocompetente, utilizzando cellule tumorali che esprimono luciferasi e luciferina per quantificare la crescita tumorale in modo non invasivo.

Imaging a bioluminescenza di un modello murino immunocompetente per il glioblastoma

Abbiamo stabilito un modello glioblastoma ortotopico corticale nei topi per intravital microscopia a due fotoni che ricapitola i vincoli biofisici normalmente in gioco durante la crescita del tumore. Una finestra di vetro cronica sostituzione del cranio sopra il tumore consente il seguito della progressione tumorale nel tempo mediante microscopia a due fotoni.

Un ortotopico Glioblastoma modello di mouse mantenimento di vincoli Cervello parenchimale fisiche e adatto per intravitale due fotoni Microscopia

GL261 le cellule di glioma forniscono un utile modello animale immunocompetente di glioblastoma. Gli obiettivi di questo protocollo sono dimostrare tecniche adeguate per il monitoraggio della crescita tumorale intracranica utilizzando l'imaging in bioluminescenza in vivo e verificare l'utilità delle cellule GL261 modificate con luciferasi per lo studio dell'immunologia tumorale e degli approcci immunoterapeutici per il trattamento del glioblastoma.

Bioluminescenza Imaging di un Modello immunocompetenti Animal Glioblastoma

Orthotopic iniezione intracranico delle cellule del tumore è stato utilizzato nella ricerca sul cancro per studiare la biologia del tumore di cervello, la progressione, evoluzione e risposta terapeutica. Qui presentiamo la tomografia molecolare fluorescenza degli xenotrapianti del tumore, che fornisce in tempo reale videomicroscopia imaging e quantificazione di un tumore di massa in modelli preclinici di glioblastoma.

Fluorescenza tomografia molecolare per l'Imaging In Vivo di Glioblastoma xenotrapianti

La microdissezione laser (LMD) è una tecnica sensibile e altamente riproducibile che può essere utilizzata per scoprire percorsi che mediano l'eterogeneità e l'invasione del glioma. Qui, descriviamo un protocollo ottimizzato per isolare le aree discrete dal tessuto glioma utilizzando LMD laser seguito da analisi trascrittomica.

Microdissezione di cattura laser delle sottoregioni del Glioma per la caratterizzazione spaziale e molecolare dell'eterogeneità intratutuale, dell'Oncoflusso e dell'invasione

Descriviamo il trapianto intraparenchimale di cellule progenitrici neurali umane trasdotte con un doppio vettore reporter che esprime la proteina fluorescente verde luciferasi (GFP) nel cervello del topo. Dopo il trapianto, il segnale della luciferasi viene ripetutamente misurato utilizzando bioluminescenza in vivo e cellule innestate che esprimono GFP identificate in sezioni cerebrali utilizzando la microscopia a fluorescenza.

Trapianto intracerebrale e monitoraggio della bioluminescenza in vivo delle cellule progenitrici neurali umane nel cervello del topo

Presentiamo un nuovo approccio per la microscopia a due fotoni della somministrazione tumorale di nanoparticelle di ossido di ferro marcate con fluorescenza al glioblastoma in un modello murino.

Microscopia intravitale a due fotoni del glioblastoma in un modello murino

L'obiettivo di questo protocollo è fornire ai ricercatori una tecnica altamente riproducibile per le impianti intracraniche.

Impianto intracranico stereotassico di linee cellulari xenoinnestate derivate dal paziente con glioblastoma nei topi

Scopri l'impianto intracranico di cellule GL261 in topi C57BL/6 per modellare i gliomi murini. Questo metodo combina imaging bioluminescente in vivo con ricostruzione 3D per tracciare quantitativamente la crescita tumorale nel tempo.

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