Murine superficiale Lymph Chirurgia Node

L'obiettivo generale di questa procedura è rimuovere chirurgicamente i linfonodi da un topo anestetizzato. Ciò si ottiene localizzando prima i linfonodi. I linfonodi vengono prelevati e quindi l'incisione viene chiusa.

Infine, è possibile ottenere una sospensione a singola cella per l'analisi sperimentale. In definitiva, le popolazioni di linfociti vitali possono essere valutate mediante citometria a flusso. La dimostrazione visiva di questa tecnica è fondamentale in quanto la localizzazione e la rimozione dei linfonodi devono essere visualizzate per essere padroneggiate.

Dopo aver anestetizzato il topo, applicare un unguento per gli occhi, iniettare buprenorfina e confermare la sedazione con un pizzico delle dita, quindi girare il topo su un lato. Per prima cosa, localizzare il linfonodo brachiale e poi radere la regione da sezionare. Dopo aver spazzolato via i peli sciolti, applicare un disinfettante sulla regione e poi praticare una piccola incisione di circa cinque millimetri sul retro dei quattro Legg.

Usa due paia di pinze per allungare l'incisione fino a quando non si vede il linfonodo brachiale, che può apparire grigiastro o più scuro del grasso circostante. Quindi pizzicare la fascia che copre il linfonodo con un paio di pinze. Posizionare il secondo paio di pinze il più possibile sotto il linfonodo e tirare leggermente la membrana senza rompere il tessuto circostante.

Quindi usa il primo paio di pinze per rompere la fascia e rimuovere il linfonodo. Se il linfonodo è stato raccolto con successo, apparirà una macchia di sangue nel punto in cui si trovava precedentemente il linfonodo. Metti il linfonodo asportato in una soluzione isotonica se affonda, questo confermerà che il tessuto raccolto è un linfonodo non grasso.

Successivamente, verifica che non ci siano peli nella ferita e chiudi l'incisione incollando insieme i due interni della pelle e pinzandoli con una o due clip, a seconda delle dimensioni dell'incisione. Ora localizzare un linfonodo inguinale e radere la regione da sezionare. Dopo aver spazzolato via i peli sciolti, applicare un disinfettante sulla regione e poi praticare una piccola incisione di circa cinque millimetri sopra la zampa posteriore vicino all'addome.

Dopo aver aperto l'incisione con due paia di pinze come appena mostrato per il linfonodo brachiale, identificare il linfonodo inguinale annidato all'interno del tessuto adiposo circostante. Quindi rimuovere il linfonodo con le due paia di pinze come appena dimostrato. Ancora una volta, confermare il successo della raccolta del linfonodo notando la macchia di sangue che appare dove si trovava precedentemente il linfonodo, quindi far cadere il linfonodo inguinale in un contenitore separato di soluzione isotonica.

Dopo che tutti i linfonodi sono stati raccolti, metti il topo in una gabbia e aggiungi cibo umido in modo che il topo possa nutrirsi facilmente. Dopo l'intervento chirurgico circa sei-otto ore dopo, controlla il mouse per assicurarti che non provi dolore. Osservare attentamente che la postura, l'interazione dell'andatura con la famiglia e l'aspetto del pelo siano simili a quelli di un normale topo sano.

Infine, dissociare il linfonodo premendolo contro i vetrini smerigliati in una capsula di Petri e poi trasferirlo in un tubo per ottenere una sospensione a singola cellula. Dopo aver colorato le cellule per gli antigeni di superficie cellulare di interesse, analizzare le cellule mediante citometria a flusso. Qui, campione in avanti e lateralmente, vengono mostrati grafici a dispersione per i linfonodi prelevati da animali anestetizzati o sacrificati.

I profili e le percentuali di cellule nelle porte dei linfociti vivi dei due grafici a dispersione sono gli stessi. Dimostrando che la chirurgia dei linfonodi è una tecnica appropriata per raccogliere le cellule Una volta padroneggiata, la chirurgia dei linfonodi può essere eseguita in 5-10 minuti per topo se viene eseguita correttamente.