Diagnosticare la tubercolosi polmonare con la MTB / RIF test Xpert

L'obiettivo generale di questa procedura è rilevare simultaneamente entro due ore il micobatterio, la tubercolosi e la resistenza alla rifampicina nell'espettorato emesso o nei sedimenti di espettorato concentrati. Iniziare con un protocollo semplice ed altamente efficace di decontaminazione del campione. Successivamente, trasferire ciascun campione processato in un cartuccia monouso, M-T-B-R-I-F, contenente i reagenti per la PCR e che ospita il processo di PCR.

Caricare le cartucce su un sistema Gene Expert DX e avviare la PCR annidata ultra sensibile HEMI per la rilevazione simultanea di Mycobacterium tuberculosis e della resistenza alla rifampicina. Infine, leggere i risultati del test e segnalarli al medico. Il test Expert MTPR è destinato all'uso con campioni di pazienti per i quali sussiste sospetto clinico di tubercolosi polmonare e che soddisfano i criteri indicati nel testo aziendale.

Si noti che non deve essere utilizzato per il monitoraggio degli effetti della terapia farmacologica. Crystal. Un tecnico del mio laboratorio illustrerà ora il protocollo secondo lo standard due delle norme internazionali per l'assistenza alla tubercolosi. Raccogliere due campioni per esame batteriologico da ciascun paziente sospettato di avere la tubercolosi polmonare.

Assegnare un modulo del sistema Gene Expert DX per ogni campione da testare, etichettando ogni cartuccia con l'ID del campione. Per ogni saggio su campione, trasferire un millilitro di espettorato in un tubo conico da 15 millilitri con tappo a vite, utilizzando un'altra pipetta sterile. Aggiungere due millilitri del reagente campione M-T-B-R-I-F.

Sostituire il coperchio con decisione. Agitare il tubo da 10 a 20 volte. Successivamente, lasciare il tubo in posizione verticale per cinque minuti a temperatura ambiente dopo averlo agitato vigorosamente.

Di nuovo, equilibrare a temperatura ambiente per 10 minuti. Verificare che tutti i campioni siano ED senza grumi visibili di espettorato. Etichettare innanzitutto le cartucce con l'ID del campione per ciascun campione di sedimento di espettorato; per ogni campione di sedimento, aggiungere 1,5 millilitri di reagente campione M-T-B-R-I-F e trasferire 0,5 millilitri in un tubo conico da 15 millilitri con tappo a vite. Richiudere il tappo, vortexare per 30 secondi e posizionare il tubo in posizione verticale per cinque minuti dopo un secondo.

Mescolare con vortice, quindi lasciare il tubo in posizione verticale per 10 minuti. Esaminare i campioni liquefatti per verificare l'assenza di grumi di espettorato. Accoppiare l'etichetta sui tubi con le cartucce corrispondenti.

Non aprire la cartuccia finché non si è pronti per eseguire il test e utilizzare la cartuccia entro 30 minuti dall'apertura del coperchio. Utilizzando la pipetta sterile per il trasferimento, aspirare il campione liquefatto fino a quando il menisco si trova al di sopra del segno minimo. Caricare lentamente il campione nella cartuccia.

Chiudere il coperchio della cartuccia. Avviare il test entro 30 minuti dall'aggiunta del campione alla cartuccia. Accendere prima il computer e poi lo strumento sul desktop.

Fare doppio clic sull'icona Gene Expert DX. Accedere al software del sistema. Selezionare Crea test per aprire la finestra di dialogo per la scansione del codice a barre della cartuccia.

Quindi digitare l'ID del campione e scansionare il codice a barre sulla cartuccia. Quando appare la finestra di creazione del test, fare clic su "inizia test" e inserire la password nella finestra di dialogo. Aprire ora la porta del modulo dello strumento e caricare la cartuccia.

Chiudere la porta per avviare il test. Quando la luce verde si spegne, il test è completato. Una volta che il sistema sblocca la porta, aprire lo sportello del modulo ed estrarre la cartuccia.

Infine, smaltire le cartucce usate nei contenitori appropriati per i rifiuti. Ogni cartuccia di prova contiene reagenti per la QPCR del complesso di Mycobacterium tuberculosis e della resistenza alla rifampicina, nonché i controlli sperimentali appropriati. Il controllo del sonda verifica la riidratazione dei reagenti, il riempimento del tubo PCR, l'integrità della sonda nella cartuccia e la stabilità del colorante.

La curva di elaborazione del campione funge da controllo positivo per un'adeguata lavorazione dei batteri bersaglio e indica anche la presenza di eventuali inibitori della PCR. I primer sono progettati per differenziare tra la sequenza conservata di tipo selvaggio e le mutazioni nella regione centrale del gene RPOB associate alla resistenza alla RIF. I valori CT sono inversamente proporzionali alla concentrazione del template di M-T-B-D-N-A bersaglio nel campione in esame.

La finestra di dialogo del risultato del test conclude che il DNA bersaglio di MTB è stato rilevato e che la resistenza alla RIF non è stata rilevata in questo campione del paziente. Il DNA bersaglio di MTB è stato rilevato a bassi livelli con indicazione di resistenza alla rifampicina. Entrambi i controlli SPC e PCC soddisfano i criteri di accettazione assegnati.

Questo risultato del saggio è considerato non valido poiché il controllo SPC è negativo e non sono presenti prodotti di PCR. O il campione non è stato processato correttamente oppure la PCR è stata inibita. Ripetere il saggio.

Come hai visto nel video del test, è standardizzato e richiede solo una infrastruttura e una formazione di laboratorio moderate. Pertanto, ritengo che il test esperto M-T-B-R-F abbia il potenziale per portare un test diagnostico standardizzato, sensibile e altamente specifico per la tubercolosi e la resistenza alla rifampicina in contesti universali di assistenza primaria.