Name: Trapianto di cellule staminali in un In vitro Simulato ischemia / riperfusione Modello (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-11-05T14:00:00.000+00:00
Duration: 9 min 15 s
Description: Impara a valutare gli effetti della terapia con cellule staminali su cellule cardiache postischemiche utilizzando un modello in vitro di ischemia/riperfusione. Questo metodo permette di analizzare le interazioni cellulari e i meccanismi di recupero.

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Questo lavoro è stato sostenuto da OTKA (Fondo di ricerca scientifica ungherese) D45933, T049621, TET (ungherese Fondazione Scienza e Tecnica) A4/04, Arg-17/2006 e SIN, Bolyai, borse di studio e Öveges TÁMOP 4.2.2-08 / 1 / KMR-2008-0004 e 4.2.1 / B 09/1/KMR-2010-0001. OTKA 83803. Vorremmo ringraziare Gesztes William per la fornitura del voice-over.

1. Preparazione H9c2 cellule cardiomyoblast H9c2 cardiomyoblasts ratto sono stati ottenuti da ATCC (Wesel, Germania) e ampliato nel glucosio (4,5 g / L) DMEM contenente 10% di siero fetale bovino, 4 mM L-glutammina, 100 U / ml di penicillina e 100 mg / ml di streptomicina. La linea cellulare H9c2 mioblasti è derivato da cuore di ratto embrionale, è usato come un modello in vitro sia per muscolo scheletrico e cardiaco 8,9. Preparare 12 pozzetti di H9c2 celle: <ol><li> Togliere terreno di coltura da piastra di Petri di H9c2 cellule. </li><li> Lavare le cellule due volte con 5 ml di PBS e digerire con 2-3 ml 0,05% tripsina / EDTA. </li><li> Mettere le capsule di Petri per 5 minuti nel 37 ° C incubatore. </li><li> Inibire la tripsina con 10 ml di mezzo di coltura DMEM. </li><li> Spin down delle celle a 1200 rpm per 8 minuti. </li><li> Dopo aver rimosso il surnatante, risospendere le cellule in 1 ml di mezzo di coltura DMEM e contare le cellule con emocitometro utilizzando tripan colorazione blu.</li><li> Semi di 30.000 H9c2 cellule in 2 ml di DMEM per bene in un piatto ben 12. </li><li> Collocare la piastra nel 37 ° C CO 2 incubatore per 24 ore. </li></ol> 2. Ischemia simulata / riperfusione Ischemia / riperfusione è stato simulato in vitro effettuando glucosio privazione di ossigeno (OGD) H9c2 su colture cellulari. Questa procedura è stata eseguita sul palco del microscopio confocale Zeiss con il sistema di incubazione delle cellule Pecon (Erbach, Germania) che consente l&#39;osservazione delle cellule durante OGD. <ol><li> Rimuovere medio di aspirazione da 12 pozzetti di H9c2 cellule. </li><li> Lavare le cellule due volte con PBS. </li><li> Aggiungi 3 medio glucosio libero ml per pozzetto. </li><li> Posizionare la piastra nel sistema di incubazione delle cellule. </li><li> Avvio di gas azoto per eliminare l&#39;ossigeno dal sistema di incubazione. </li><li> Attendere che il livello di ossigeno raggiunge il 0,5% poi avviare il timer. 0,5% di ossigeno significa circa 3 mmHg tensione parziale. Cellule soggette a 150 minuti di ischemia simulata. </li><li> Alla fine di ischemia simulata, rimuovere il supporto di glucosio libero dalle cellule. </li><li> Pipettare 2 ml di terreno di coltura normale ai pozzetti. </li><li> Posizionare i 12 pozzetti per 30 minuti nel 37 ° C CO 2 incubatore, questo è il &quot;periodo di riperfusione&quot;. </li></ol> 3. Preparazione salvataggio cellule staminali mesenchimali Midollo osseo di origine umana è stata presa in T75 palloni e diluito con Media Dulbecco Modified Eagle (DMEM) terreno di coltura contenente il 10% di siero fetale bovino (FCS), 100 U / ml di penicillina e 100 mg / ml di streptomicina, 4 mM L-glutamina e 1 g / l di glucosio. I palloni sono state incubate a 37 ° C in un ambiente completamente umidificata al 5% di CO 2 per 3 giorni. Dopo il periodo di incubazione della BMSCs aderito alla superficie dei palloni e gli altri componenti del midollo osseo sono stati eliminati mediante lavaggio con PBS. Il BMSCs utilizzati sono stati tra 1 e 5 passaggi negli esperimenti. Identitità di cellule è stata confermata dalla presenza di marcatori cellulari lineage-specifica superficie con citometria a flusso. Ematopoietiche linage specifici marcatori di superficie (CD34, CD45) e marcatori di superficie mesenchimali (CD73, CD90, CD105 e CD166) sono stati studiati. Durante l&#39;ischemia simulata, preparare salvataggio cellule staminali mesenchimali per il trapianto. <ol><li> Diluire il colorante fluorescente Vybrant DiD in rapporto 1:200 nel terreno di coltura DMEM. </li><li> Aspirare il terreno dalle cellule di soccorso e aggiungere 300 ml con DMEM Vybrant DiD. </li><li> Mettere le capsule di Petri per 30 minuti nel 37 ° C CO 2 incubatore. </li><li> Togliere terreno di coltura da piastra di Petri di cellule staminali mesenchimali. </li><li> Lavare le cellule due volte con 5 ml di PBS e digerire con 2-3 ml 0,05% tripsina / EDTA. </li><li> Mettere le capsule di Petri per 5 minuti nel 37 ° C incubatore. </li><li> Inibire la tripsina con 10 ml di mezzo di coltura DMEM. </li><li> Spin down delle celle a 1200 rpm per 8 minuti. </li><li> Dopo aver rimosso il Supernatant, risospendere le cellule in 1 ml di mezzo di coltura DMEM e contare le cellule con emocitometro utilizzando tripan colorazione blu. </li><li> Dopo 30 minuti alla fine della riperfusione aggiungere 20.000 cellule staminali mesenchimali per bene al postischemica H9c2 mioblasti cardiaci. </li><li> Luogo di co-coltura di cellule in 37 ° C CO 2 incubatore per 24 ore. </li></ol> 4. Analisi con microscopia confocale Dopo la simulazione di ischemia / riperfusione, le cellule vengono incubate in terreno di coltura normale per 24 ore. <ol><li> Dopo 24 ore lavare le cellule due volte con PBS. </li><li> Macchiare le cellule in 500 microlitri dal vivo / morto soluzione colorante per 30 minuti (5 calceina nM e 400 nM di etidio-omodimero-2 in PBS) (5x10 4 cellule / ml). </li></ol> La valutazione delle immagini confocale per le cellule vive e morte selezionati dalla morfologia e dalla fluorescenza può essere effettuata con il software ImageJ (National Institutes of Health, USA). In caso di co-culture, MSC può essere distinto dal H9c2 cellule a causa della loro etichettatura delle cellule Vybrant DiD. Il rapporto tra le cellule morte possono essere valutati in 4 campi indipendenti di vista (obiettivo 10x) per ogni cultura in maniera cieca 10. H9c2 cardiomyoblasts coltivati ​​su coprioggetto mm 42 di vetro possono anche essere studiate con microscopia video di lasso di tempo durante e dopo ischemia / riperfusione mediante il sistema di incubazione delle cellule del microscopio confocale. Cellula-cellula interazioni, come la fusione cellulare e la formazione di nanotubi intercellulare possono essere studiati nel corso del tempo. 5. Analisi con citometria a flusso Dopo la simulazione di ischemia / riperfusione, le cellule vengono incubate in terreno di coltura normale per 24 ore. <ol><li> Dopo 24 ore, raccogliere i terreni di coltura. E &#39;molto importante raccogliere il terreno di coltura anche perché alcune cellule morte potrebbe essere staccato dalla superficie del piatto cultura durante l&#39;incubazione 24 orezione. </li><li> Lavare le cellule due volte con PBS e digerire con il 0,05% tripsina-EDTA. </li><li> Inibire la tripsina con terreno di coltura DMEM. </li><li> Spin basso le celle e il terreno di coltura raccolto a 1200 giri (circa 150-200g) per 8 minuti. </li><li> Scartare il surnatante. </li><li> Sospendere le cellule in 500 microlitri dal vivo / morto soluzione colorante per 30 minuti (5 calceina nM e 400 nM di etidio-omodimero-2 in PBS) (5x10 4 cellule / ml). </li><li> Trasferimento alle cellule di tubi di citometria a flusso. </li><li> Avviare il software Pro CellQuest. </li><li> Per impostare il citometro a flusso per la misura, preparare del campioni di cellule vive e morte. <ol class="lalpha"><li> Piastra H9c2 cellule ad una densità di 3x10 4 in 12-pozzetti, come descritto al punto 1. </li><li> Preparare vivere controlli cella con trypsinisation singolo come descritto al punto 1. </li><li> Preparare i controlli cellule morte da un trattamento con 10 mM H 2 O 2 per 1 ora. </li><li> Dopo trypsinisation, resuspend vivere e controlli cellule morte in 500 microlitri dal vivo / morto soluzione colorante (5 nM calceina-AM e 400 Nm di etidio-omodimero-2 in PBS). </li></ol></li><li> Le impostazioni dello strumento dovrebbe essere regolata in modo le cellule viventi sono calceina positive e etidio omodimero negativo, mentre le cellule morte sono calceina negativi e positivi omodimero etidio. </li><li> La percentuale di queste popolazioni può essere espresso come barre su un grafico e analisi statistiche possono essere eseguite su questi valori. </li><li> Misurare i diversi gruppi sperimentali. </li></ol> 6. Rappresentante dei risultati: I nostri risultati hanno dimostrato che le cellule staminali mesenchimali aggiunto potrebbe migliorare la sopravvivenza di postischemica cellule cardiache. Immagini di microscopia confocale hanno rivelato diretto cellula-cellula interazioni, come la connessione a membrana parziale o nanotubi intercellulare, che probabilmente giocano un ruolo importante nella protezione osservati 10. I nanotubi arco su distanze di cellule diverse diameters, e il loro diametro era tra i 200 ei 500 nm (frecce bianche). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Formazione di nanotubi tra le cellule. Nanotubi di formazione (freccia bianca) è stata osservata tra Vybrant cardiomyoblasts DIO etichettati e Vybrant DiD cellule staminali mesenchimali etichettati. Analisi di citometria a flusso ha mostrato le popolazioni di sopravvivere e cardiomyoblasts necrotiche e cellule staminali mesenchimali. È interessante notare che abbiamo anche osservato un terzo, &#39;ferito&#39; cardiomyoblast popolazione cellulare che conteneva calceina ma conteneva anche l&#39;indicatore delle cellule morte, etidio omodimero (Figura 2). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Rappresentante dot-plot della diverse popolazioni cellulari dopo l&#39;ischemia simulata. La valutazione di diversi esperimenti shomer che l&#39;aggiunta di cellule staminali mesenchimali per postischemica cardiomyoblast H9c2 aumentato in modo significativo la percentuale di cellule viventi rispetto ai mioblasti cardiaci colta da sola dopo ischemia (Figura 3). <img src="/files/ftp_upload/3575/3575fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. . Effetto del trattamento con cellule staminali su cardiomyoblasts postischemica Percentuale di cellule viventi era significativamente ridotta dopo ischemia simulata rispetto al controllo (controllo rispetto al modello IR: 90,36 ± 2,60 vs 10,52 ± 0,48, *** p&gt; 0,001), che è aumentato dopo l&#39;aggiunta di cellule staminali mesenchimali (IR modello vs IR + BMSC: 10,52 ± 0,48 vs 25,21 ± 2,13, *** p&gt; 0,001). I dati rappresentano media ± SEM. L&#39;analisi statistica dei dati è stata effettuata utilizzando una analisi della varianza con il post di comparazione multipla di Tukey hoc test.

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<li>Lim, Y. J., Zheng, S., Zuo, Z. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Morphine+Preconditions+Purkinje+Cells+against+Cell+Death+under+In+Vitro+Simulated+Ischemia%2FReperfusion+Conditions%5BTitle%5D)+AND+%22Anesthesiology%22%5BJournal%5D)">Morphine Preconditions Purkinje Cells against Cell Death under In Vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Conditions.</a> Anesthesiology. 100, 562-562 (2004).</li>
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Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il protocollo è dimostrato un approccio in vitro alla questione molto più complessa di terapia con cellule staminali in infarto miocardico, con tutti i vantaggi e gli svantaggi di un tale modello. Ovviamente non può riflettere il complesso (ad esempio, immunologici) eventi che si svolgeranno durante e dopo l&#39;infarto del miocardio, ma può concentrarsi sugli effetti diretti delle cellule aggiunto sulle cellule postischemica. Gli effetti di ischemia simulata su H9c2 cardiomyoblasts molto dipende dal tempo di OGD, sul n...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> calceina-AM </td><td> Molecular Probes </td><td> L3224, C3099 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> etidio omodimero-2 </td><td> Molecular Probes </td><td> L3224, E3599 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr><tr><td> Vybrant DiD </td><td> Molecular Probes </td><td> V22887 </td><td> <a href="http://www.invitrogen.com">http://www.invitrogen.com</a> </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Reagenti. <table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Commenti (opzionale) </td></tr><tr><td> Pecon sistema a celle di incubazione per microscopi Zeiss </td><td> Pecon GmbH </td><td> <a href="http://www.pecon.biz/">www.pecon.biz/</a> </td></tr></tbody></table> Tabella 2. Apparecchiature.

trapianto di cellule staminali in un in vitro simulato ischemia / riperfusione modello

Stem Cell Transplantation in an in vitro Simulated Ischemia/Reperfusion Model

Protocolli di trapianto di cellule staminali stanno trovando la loro strada nella pratica clinica 1,2,3. Ottenere risultati migliori, rendendo i protocolli più robusto, e di trovare nuove fonti di cellule impiantabili sono al centro di recenti ricerche 4,5. Indagare l&#39;efficacia delle terapie cellulari non è un compito facile e nuovi strumenti sono necessari per indagare i meccanismi coinvolti nel processo di trattamento 6. Abbiamo progettato un protocollo sperimentale di ischemia / riperfusione in modo da consentire l&#39;osservazione di connessioni cellulari e dei meccanismi subcellulari anche durante l&#39;ischemia / riperfusione e dopo il trapianto di cellule staminali e per valutare l&#39;efficacia della terapia cellulare. H9c2 cellule cardiomyoblast sono stati collocati su piastre di coltura cellulare 7,8. Ischemia è stato simulato con 150 minuti in media glucosio libero con il livello di ossigeno inferiore allo 0,5%. Poi, i media normale e livelli di ossigeno sono state reintrodotte per simulare riperfusione. Dopo la deprivazione di ossigeno glucosio,le cellule danneggiate sono state trattate con il trapianto di midollo osseo umano etichettato cellule staminali mesenchimali aggiungendoli alla cultura. Cellule staminali mesenchimali sono preferiti negli studi clinici, perché sono facilmente accessibili con chirurgia mini-invasiva, facilmente espandibile e autologhe. Dopo 24 ore di co-coltura, le cellule sono state colorate con calceina e etidio-omodimero di distinguere tra cellule vive e morte. Questa configurazione ci ha permesso di indagare le connessioni intercellulari utilizzando la microscopia confocale a fluorescenza e di quantificare il tasso di sopravvivenza delle cellule postischemica mediante citometria di flusso. Microscopia confocale hanno mostrato le interazioni delle due popolazioni cellulari, come la fusione cellulare e la formazione di nanotubi intercellulari. Analisi di citometria a flusso ha rivelato 3 gruppi di cellule danneggiate, che può essere tracciata su un grafico e analizzati statisticamente. Queste popolazioni possono essere indagati separatamente e si possono trarre conclusioni su questi dati sull&#39;efficacia del simulatoapproccio terapeutico.

Dimostriamo come impostare uno<em&gt; In vitro</em&gt; Ischemia / riperfusione modello e come valutare l&#39;effetto della terapia con cellule staminali su postischemica cellule cardiache.

Trapianto di cellule staminali in un In vitro Simulato ischemia / riperfusione Modello

I protocolli di trapianto di cellule staminali stanno entrando nella pratica clinica1,2,3. Per ottenere risultati migliori, rendere i protocolli più robusti e...

Le cellule cardiache derivate vengono posizionate su piastre per colture cellulari per simulare l'ischemia. Il modello di ischemia con riperfusione viene ottenuto mantenendo le cellule per 150 minuti in un mezzo privo di glucosio, con livelli di ossigeno inferiori allo 0,5%. Questo periodo ischemico provoca il raggrinzimento e il blebbing della maggior parte delle cellule. Successivamente, vengono reintrodotti il mezzo normale e livelli normali di ossigeno per simulare la riperfusione.Le cellule staminali mesenchimali vengono aggiunte e coltivate insieme alle cellule danneggiate. Dopo 24 ore di cocoltura, le cellule vengono colorate con calcio e etidio bromuro omidimero per differenziare tra cellule vive e morte. Mediante microscopio confocale, si osserva chiaramente la presenza di due popolazioni cellulari e le loro interazioni. L'analisi mediante citometria a flusso rivela tre cluster di cellule danneggiate, che possono essere rappresentati su un grafico e analizzati statisticamente. Il trapianto di cellule staminali è oggetto di studi recenti volti a introdurre i protocolli nella pratica clinica, a migliorare i risultati ottenuti, a rendere i protocolli più robusti e a individuare nuove fonti di cellule impiantabili.Studiare l'efficacia delle terapie cellulari non è un compito semplice e sono necessari nuovi strumenti per indagare i meccanismi coinvolti nel processo terapeutico. Abbiamo progettato un protocollo sperimentale che permette l'osservazione delle connessioni cellulari e persino dei meccanismi subcellulari durante l'ischemia, il danno da perfusione e dopo il trapianto di cellule staminali. I nostri criteri di progettazione prevedono un sistema completamente in vitro, in cui sono presenti soltanto le cellule dell'ospite e quelle del donatore.Pertanto, viene isolata dal tessuto circostante. Misurazione continua della vitalità cellulare prima, durante e dopo la lesione per un periodo fino a 24 ore. E chiara identificazione di entrambe le popolazioni cellulari in modo che il destino delle cellule trapiantate possa essere tracciato.Per raggiungere questo obiettivo, abbiamo impostato un protocollo di deprivazione di ossigeno e glucosio, comunemente abbreviato come OGD, seguito da un periodo di reossigenazione. La nostra scelta delle cellule ospiti è ricaduta su cellule C2C12, una nota linea cellulare di mioblasti cardiache di ratto. Dopo l'OGD, le cellule danneggiate sono state sostenute mediante il trapianto di cellule staminali mesenchimali derivate dal midollo osseo, aggiungendole alla coltura.Questa configurazione ci ha permesso di studiare le connessioni intercellulari mediante microscopia confocale e di quantificare il tasso di sopravvivenza delle cellule danneggiate mediante citometria a flusso. Cominciamo e vediamo come procedere. Rimuovere il mezzo di coltura dalle cellule H nine C two.Lavare le cellule due volte con PBS e digerire con tripsina EDTA 0,05% in piatti di Petri per cinque minuti. In un incubatore a 37 gradi, inibire la tripsina con mezzo di coltura DMEM. Centrifugare le cellule a 1200 giri/min per otto minuti.Dopo aver rimosso il soprannatante, risospendere le cellule in un millimetro di mezzo di coltura DMEM, quindi contare le cellule con l’emocitometro utilizzando la colorazione con blu di tripano: 30.000 cellule H9C2 per pozzetto. In una piastra a 12 pozzetti, posizionare la piastra nell’incubatore con anidride carbonica a 37 gradi per 24 ore. Rimuovere il mezzo mediante aspirazione e lavare le cellule due volte con PBS.Aggiungere tre millimetri di mezzo privo di glucosio. Posizionare la piastra nel sistema di incubazione cellulare. Avviare il flusso di gas azoto per rimuovere l'ossigeno dal sistema di incubazione.Attendere fino a quando il livello di ossigeno raggiunge lo 0,5%. Quindi avviare il cronometro: un'ossigeno dello 0,5% corrisponde a una pressione parziale di circa tre millimetri di mercurio. Sottoporre le cellule a 150 minuti di ischemia simulata. Durante l'ischemia, le cellule si staccano dalla superficie e la loro membrana inizia a presentare vescicolazioni. Abbiamo riscontrato che ogni popolazione richiede tempi leggermente diversi per raggiungere un'immagine cellulare del 60-80%.Per questo motivo suggeriamo di iniziare con l'incubazione a due R. E se non fosse sufficiente, aumentare il tempo di OGD. Nel nostro caso, le cellule age nine C due necessitano tipicamente da 150 a 70 minuti di OGD al termine dell'ischemia simulata.Rimuovere il mezzo privo di glucosio dalle cellule e aggiungere con pipetta il mezzo di coltura normale nei pozzetti. Collocare una piastra a 12 pozzetti per 30 minuti nell'incubatore con anidride carbonica a 37 gradi. Questo è il periodo di riperfusione.Durante l'ischemia simulata, preparare le cellule di riserva per il trapianto. Diluire la dieta fluorescente, il DID vibrant, in un rapporto da uno a 200 nel mezzo di coltura DMEM. Aspirare il mezzo dalle cellule di riserva e aggiungere 300 microlitri di DMEM dai piatti di Petri vibrant Brent Place per 30 minuti nell'incubatore con anidride carbonica a 37 gradi.Dopo 30 minuti al termine della riperfusione, aggiungere mille cellule staminali mesenchimali per pozzetto ai mioblasti cardiaci H nine C two post-ischemici. I passaggi iniziali sono gli stessi della semina di H nine C two: lavaggio due volte con PBS, tripsinizzazione e conteggio. Posizionare la coltura co-coltivata delle cellule nell'incubatore a 37 gradi centigradi con anidride carbonica per 24 ore.Dopo 24 ore, raccogliere il mezzo di coltura e le cellule aderenti dai pozzetti con ization. È molto importante raccogliere anche il mezzo di coltura, poiché alcune cellule morte potrebbero essersi staccate dalla superficie della piastra durante l'incubazione di 24 ore.Sospendere le cellule in 500 microlitri di soluzione live, dead, die, 5 NMO di calcio e 400 NMO di omologo di etere in PBS a una concentrazione di cinque volte 10 alla potenza di quattro cellule per millilitro. In caso di colture co, le cellule staminali mesenchimali sono distinte dalle cellule H nine C due grazie all'etichettatura fluorescente specifica per ciascun tipo cellulare. In questo modo è possibile rilevare la fusione cellulare e i siti di contatto tra cellula e cellula.Il rapporto tra cellule morte può essere valutato in quattro campi visivi indipendenti, utilizzando un obiettivo da 10 volte per ogni coltura in modo cieco, il che fornisce un risultato riproducibile del conteggio cellulare. Trasferire le cellule in provette per citometria a flusso. Avviare il software Cell Quest Pro per configurare il citometro a flusso per la misurazione.Preparare campioni di controllo di cellule vive e morte. Le cellule vive vengono coltivate alla stessa densità in condizioni normali e colorate con calcio. Le cellule morte vengono preparate mediante trattamento per un'ora con 10 micromoli di perossido di idrogeno, colorate con etidio, omodimero, e raccolte nello stesso modo; le impostazioni dello strumento devono essere regolate in modo che le cellule vive risultino positive al calcio e negative all'etidio omodimero.Mentre le cellule morte sono negative per il calcio e positive per l'omodimero di etere, la percentuale di queste popolazioni può essere espressa mediante barre su un grafico e su questi valori può essere effettuata un'analisi statistica. Abbiamo scoperto che l'aggiunta di cellule staminali sane aumenta il rapporto tra cellule sopravvissute nella popolazione. In modo interessante, abbiamo inoltre osservato che le cellule salvate dopo il danno possono essere selezionate non solo rispetto a quelle morte, ma anche rispetto a quelle rimaste vive.Riteniamo che questa popolazione richieda ulteriori indagini. Dopo aver visto questo video, dovreste avere una buona comprensione di come condurre esperimenti di ischemia simulata con trapianto di cellule staminali in vitro in modo standardizzato. Questo è tutto.Grazie per aver guardato e buona fortuna con i vostri esperimenti. Se avete domande tecniche, non esitate a contattarci. Saremo a disposizione per assistervi.

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