Name: Il Ex vivo Preparazione isolato microvasi scheletrico per le Indagini di reattività vascolare (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-28T14:00:00.000+00:00
Duration: 7 min
Description: Impara a isolare e cannulare arteriole di resistenza ex vivo per studiare la reattività vascolare. Questo metodo permette di valutare le risposte a stimoli farmacologici e le proprietà strutturali dei vasi.

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Questo lavoro è stato sostenuto dalla American Heart Association (EIA 0740129N) e NIH T32 HL90610.

<ol><li>Goodwill, A. G., Frisbee, S. J., Stapleton, P. A., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Impact+of+Chronic+Anticholesterol+Therapy+on+Development+of+Microvascular+Rarefaction+in+the+Metabolic+Syndrome%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Impact of Chronic Anticholesterol Therapy on Development of Microvascular Rarefaction in the Metabolic Syndrome.</a> Microcirculation. , 1-18 (2009).</li>
<li>Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+vascular+thromboxane+generation+impairs+dilation+of+skeletal+muscle+arterioles+of+obese+Zucker+rats+with+reduced+oxygen+tension%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased vascular thromboxane generation impairs dilation of skeletal muscle arterioles of obese Zucker rats with reduced oxygen tension.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 295, H1522-H1528 (2008).</li>
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<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hydrogen+peroxide+emerges+as+a+regulator+of+tone+in+skeletal+muscle+arterioles+during+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Hydrogen peroxide emerges as a regulator of tone in skeletal muscle arterioles during juvenile growth.</a> Microcirculation. 15, 151-161 (2008).</li>
<li>Samora, J. B., Frisbee, J. C., Boegehold, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+myogenic+responsiveness+of+skeletal+muscle+arterioles+with+juvenile+growth%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Increased myogenic responsiveness of skeletal muscle arterioles with juvenile growth.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, 2344-2351 (2008).</li>
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<li>Fredricks, K. T., Liu, Y., Lombard, J. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Response+of+extraparenchymal+resistance+arteries+of+rat+skeletal+muscle+to+reduce+PO2%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Response of extraparenchymal resistance arteries of rat skeletal muscle to reduce PO2.</a> Am. J. Physiol. 267, H706-H715 (1994).</li>
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<li>LeBlanc, A. J., Cumpston, J. L., Chen, B. T., Frazer, D., Castranova, V., Nurkiewicz, T. R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nanoparticle+inhalation+impairs+endothelium-dependent+vasodilation+in+subepicardial+arterioles%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Toxicol.+Environ.+Health+A%22%5BJournal%5D)">Nanoparticle inhalation impairs endothelium-dependent vasodilation in subepicardial arterioles.</a> J. Toxicol. Environ. Health A. 72, 1576-1584 (2009).</li>
<li>Jernigan, N. L., LaMarca, B., Speed, J., Galmiche, L., Granger, J. P., Drummond, H. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dietary+salt+enhances+benzamil-sensitive+component+of+myogenic+constriction+in+mesenteric+arteries%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Heart+Circ.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Dietary salt enhances benzamil-sensitive component of myogenic constriction in mesenteric arteries.</a> Am. J. Physiol. Heart Circ. Physiol. 294, H409-H420 (2008).</li>
<li>Stapleton, P. A., Goodwill, A. G., James, M. E., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Altered+mechanisms+of+endothelium-dependent+dilation+in+skeletal+muscle+arterioles+with+genetic+hypercholesterolemia%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Physiol.+Regul.+Integr.+Comp.+Physiol%22%5BJournal%5D)">Altered mechanisms of endothelium-dependent dilation in skeletal muscle arterioles with genetic hypercholesterolemia.</a> Am. J. Physiol. Regul. Integr. Comp. Physiol. 293, R1110-R1119 (2007).</li>
<li>Goodwill, A. G., Stapleton, P. A., James, M. E., d'Audiffret, A. C., Frisbee, J. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Increased+arachidonic+acid-induced+thromboxane+generation+impairs+skeletal+muscle+arteriolar+dilation+with+genetic+dyslipidemia%5BTitle%5D)+AND+%22Microcirculation%22%5BJournal%5D)">Increased arachidonic acid-induced thromboxane generation impairs skeletal muscle arteriolar dilation with genetic dyslipidemia.</a> Microcirculation. 15, 621-631 (2008).</li>
<li>Baumbach, G. L., Hadju, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mechanics+and+composition+of+cerebral+arterioles+in+renal+and+spontaneously+hypertensive+rats%5BTitle%5D)+AND+%22Hypertension%22%5BJournal%5D)">Mechanics and composition of cerebral arterioles in renal and spontaneously hypertensive rats.</a> Hypertension. 21, 816-826 (1993).</li>
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<li>Davis, M. J., Kuo, L., Chilian, W. M., Muller, J. M. I. solated Chapter 23. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aDavis%2C+MJ+%22Isolated%2C+perfused+microvessels.+In%3A+Clinically+Applied+Microcirculation+Research%22">Isolated, perfused microvessels. In: Clinically Applied Microcirculation Research</a>. Barker, J. H., Anderson, G. L., Menger, M. D. 32, CRC Press, Inc. 435-456 (1995).</li>
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</ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Il protocollo presentato descrive la cannulazione isolamento, rimozione e di un doppio microvasi muscolo scheletrico, sebbene questa tecnica generale può essere facilmente applicato alla maggior parte dei tessuti. Per il manoscritto attuale, il termine &quot;arteriole&quot; è stato utilizzato dagli autori per descrivere una nave resistenza compresa tra 70-120 micron di diametro a riposo sotto tono attivo, che è anche un importante contributo alla regolazione della resistenza perfusione ad un organo o tessuto. <p cla...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagenti e materiale </td><td> Azienda </td><td> Commenti / Catalogo # </td></tr><tr><td> Vessel Camera </td><td> Costume </td><td> Dave Eick (MCW) </td></tr><tr><td> Riscaldato bagno di acqua circolante </td><td> PolyScience e Haake </td><td> Haake DC 10 </td></tr><tr><td> Pipette </td><td> Frederick Haer &amp; Co. </td><td> Tubo capillare 2,0 millimetri OD x 1.0 mm ID (27-33-1) </td></tr><tr><td> Pressure Monitor </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td></td></tr><tr><td> Water Reservoir camicia </td><td> Costume </td><td></td></tr><tr><td> Sorgente di luce esterna </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> Novaflex </td></tr><tr><td> Pipettare Puller </td><td> Microdata Instruments </td><td> PMP102 Micropipette Puller </td></tr><tr><td> Comple completozione di strumenti chirurgici </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> Dumont </td></tr><tr><td> Ultra Pinze Belle </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> Inox # 5 </td></tr><tr><td> Silk sutura Discussione </td><td> Ethilon </td><td> # 10-0 o 9-0 </td></tr><tr><td> Microscopio Stereo </td><td> Olimpo </td><td> Olympus SZ-11 </td></tr><tr><td> Calibri video analogici </td><td> BOECKELER </td><td> Via Controller (Via-100) </td></tr><tr><td> Analogica ad alta risoluzione della fotocamera </td><td> Panasonic </td><td> GP-MF 602 </td></tr><tr><td> Serbatoio di ossigeno </td><td> Regionale </td><td> L&#39;equilibrio di azoto 21% e il 5% di CO 2 di azoto equilibrio </td></tr><tr><td> Tubi </td><td> Tygon </td><td></td></tr><tr><td> Pompa di scarico </td><td> Cole Parmer Instrument Co. </td><td></td></tr><tr><td> PSS Rat modificati </td><td> Vedi ricetta qui sotto </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Van Breemen del PSS rilassanti </td><td> Vedi ricetta qui sotto </td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 1. Un elenco delle principali componenti della configurazione isolata stazione di microvasi presentato nelle figure. <table border="1"><tbody><tr><td> Modificato Rat Ricetta PSS </td><td> Per fare due litri di PSS </td><td> 20X magazzino Salt (2L) </td><td> 20X scorta (2L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 278,0 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 14,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 11,5 g </td><td></td></tr><tr><td> CaCl 2-H 2 O </td><td></td><td> 9,4 g </td><td></td></tr><tr> &lt;td&gt; NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 80,8 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,4 g </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucosio </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salt magazzino </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x della scorta </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Acqua distillata </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 2. Ricetta per standard di soluzione salina fisiologica (PSS) utilizzato nei protocolli microvasali isolati. Commenti a Ricetta: Fai 2 L di Stock sale e 2 litri di scorta. Questi cuno in frigorifero quando non viene utilizzato, ma scuoterli bene e spesso prima di preparare PSS. Gli ingredienti aggiuntivi vengono aggiunti al momento della preparazione della PSS finali. <table border="1"><tbody><tr><td> Van Breemen del PSS rilassanti </td><td> Per fare 2 litri di PSS </td><td> 20X magazzino Salt (1L) </td><td> 20X scorta (1L) </td></tr><tr><td> NaCl </td><td></td><td> 107,4 g </td><td></td></tr><tr><td> KCl </td><td></td><td> 7,0 g </td><td></td></tr><tr><td> MgSO 4-7H 2 O </td><td></td><td> 5,76 g </td><td></td></tr><tr><td> MgCl 2-6H 2 O </td><td></td><td> 81,32 g </td><td></td></tr><tr><td> NaHCO 3 </td><td></td><td></td><td> 40,4 g </td></tr><tr><td> EDTA </td><td></td><td></td><td> 0,2 g </td></tr><tr><td> EGTA </td><td></td><td></td><td> 15,22 </td></tr><tr><td> NaH 2 PO 4 </td><td> 0,28 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Glucosio </td><td> 1,98 g </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x Salt magazzino </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> 20x della scorta </td><td> 100 mL </td><td></td><td></td></tr><tr><td> Acqua distillata </td><td> 1800 mL </td><td></td><td></td></tr></tbody></table> Tabella 3. Ricetta per una soluzione rilassante Van Breemen di sale fisiologica (PSS) utilizzato nei protocolli microvasali isolate in condizioni di tono attivo pari a zero. Commenti a Ricetta: Fai 1 litro di brodo sale alnd 1 L di scorta. Questi possono essere refrigerato quando non viene utilizzato, ma scuoterli bene e spesso prima di preparare PSS. Gli ingredienti aggiuntivi vengono aggiunti al momento della preparazione della finali PSS rilassanti.

il ex vivo preparazione isolato microvasi scheletrico per le indagini di reattività vascolare

The ex vivo Isolated Skeletal Microvessel Preparation for Investigation of Vascular Reactivity

La preparazione dei microvasi isolato è un preparato ex vivo che consente l&#39;esame dei contributi di diversi fattori che diametro natante di controllo, e quindi, la resistenza perfusione 1-5. Questa è una preparazione classica sperimentale che è stato, in larga misura, inizialmente descritto da Uchida et al 15. Diversi decenni fa. Questa descrizione iniziale fornito la base per le tecniche che è stato ampiamente modificato e ampliato, principalmente nel laboratorio del Dr. Brian Duling presso la University of Virginia 6-8, e presentiamo un approccio corrente nelle pagine seguenti. Questo preparato in modo specifico riferimento alla arteriola gracilis in un topo come microvasi di scelta, ma la preparazione di base può essere facilmente applicata alle navi isolati da quasi qualsiasi altro tessuto o organo tra le specie 9-13. Meccanica (cioè, dimensionale) cambiamenti nel isolato microvasi può essere facilmente valutatain risposta ad una vasta gamma di fisiologico (ad esempio, ipossia, pressione intravascolare, o taglio) o sfide farmacologici, e può fornire informazioni sul elementi meccanici comprendenti risposte integrati in uno intatto, sebbene ex vivo, tessuto. Il significato di questo metodo è che permette la manipolazione facile delle influenze sulla regolazione integrata del diametro microvasi, consentendo anche per il controllo di molti dei contributi provenienti da altre fonti, compresa la pressione intravascolare (miogenico), innervazione autonomica, emodinamica ( ad esempio, sforzo di taglio), stimoli endoteliali dipendenti o indipendenti, e le influenze ormonali, parenchimali, per fornire una lista parziale. Sotto opportune condizioni sperimentali e con obiettivi adeguati, questo può servire come un vantaggio rispetto in vivo o in situ di tessuti / organi preparati, che non consentono facilmente per il controllo di facile ampie variabili sistemiche. La maJor limitazione di questa preparazione è essenzialmente la conseguenza delle sue forze. Per definizione, il comportamento di questi vasi è stata studiata in condizioni in cui molti dei contributi più significativi alla regolamentazione della resistenza vascolare sono state rimosse, compresa neurale, umorale, metabolica, ecc Come tale, l&#39;investigatore è avvertiti di evitare un eccesso di interpretazione e estrapolazione dei dati raccolti utilizzando questa preparazione. L&#39;altro significativo di preoccupazione per questa preparazione è che può essere molto facile danneggiare componenti cellulari come il rivestimento endoteliale o al muscolo liscio vascolare, tale fonte variabile di errore può essere introdotto. Si raccomanda vivamente che il singolo ricercatore utilizzare misure appropriate per garantire la qualità della preparazione, sia durante la fase iniziale dell&#39;esperimento e periodicamente nel corso di un protocollo.

Un<em&gt; Ex vivo</emPreparazione&gt; è descritto per l&#39;isolamento delle arteriole muscolari più grandi di resistenza gracile per l&#39;interrogatorio di entrambe le risposte vascolari a stimoli vasoattivi e la valutazione delle proprietà strutturali di base attraverso la meccanica della parete passivi.

Il Ex vivo Preparazione isolato microvasi scheletrico per le Indagini di reattività vascolare

La preparazione di microvasi isolati è una preparazione ex vivo che consente l'esame dei diversi contributi dei fattori che controllano il vaso...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare chirurgicamente, rimuovere e cannuolare doppia­mente singoli arterioli di resistenza. Per lo studio in un contesto ex vivo, ciò viene ottenuto innanzitutto identificando e isolando chirurgicamente un microvaso in un animale anestetizzato. Dopo il trasferimento del microvaso in una camera per vasi, le estremità prossimale e distale del microvaso vengono entrambe cannuolate. Infine, i microvasi vengono esposti a sfide farmacologiche o fisiologiche e a interventi sperimentali per valutare i meccanismi alla base della funzione o disfunzione intrinseci al vaso stesso. In definitiva, i risultati mostrano i modelli e i meccanismi coinvolti nella reattività vascolare in un contesto isolato, mediante stimoli e interventi opportunamente mirati. Generalmente, le persone alle prime esperienze con questo metodo incontrano difficoltà, poiché questa preparazione richiede non solo un'elevata abilità chirurgica da eseguire al microscopio, ma anche pazienza e un controllo fine della motricità necessari per effettuare una doppia cannullazione di microvasi isolati con un diametro spesso molto inferiore a cento micron.Questa operazione deve essere eseguita con il minimo assoluto di trauma al vaso, altrimenti l'intera procedura si tradurrà soltanto in un vaso inerte che dimostra la procedura sarà Joshua Butcher, uno studente laureato del mio laboratorio prima di eseguire microvasi isolati. Preparazione. Iniziare piegando le micropipette di vetro precedentemente preparate in una configurazione adeguata riscaldandole su una fiamma di butano. Successivamente, utilizzare pinzette fini per rompere le punte fino a raggiungere un diametro appropriato.Posizionare due micropipette in opposizione nei supporti delle micropipette per la camera dei vasi microscopici, orientandole in modo che le punte si trovino nello stesso piano verticale e orizzontale all'interno della camera del vaso. Successivamente, preparare una soluzione salina fisiologica (PSS) e verificare che il pH sia impostato ai livelli appropriati per le specifiche condizioni sperimentali. Utilizzando un emo, un citometro o un micrometro per microscopio, calibrare i calibri video digitali che verranno utilizzati per misurare il diametro del vaso.Utilizzare un filo di sutura oftalmica da otto zero o più sottile per preparare dei singoli anelli a punta da utilizzare per fissare i microvasi alle pipette. Conservare gli anelli in una capsula di Petri su una piccola striscia di nastro adesivo avvolta attorno a un vetrino il giorno dell'esperimento. Accendere i gas di equilibrazione nella camera per vasi e nei serbatoi di PERFUSE eight e SUSE eight.Riempire tutti i serbatoi, i tubi e le camere con la soluzione PSS. Se necessario, utilizzare una siringa per spingere delicatamente la PSS attraverso tutta la pipetta, assicurandosi che non sia ostruita e che sia completamente piena. Mantenere la pressione in ingresso entro limiti ragionevoli per evitare di danneggiare i trasduttori di pressione.Dopo aver anestetizzato l'animale ed esposto i microvasi, rimuovere i microvasi utilizzando pinzette fini per afferrare il lato esterno e tagliando lungo la lunghezza del vaso. Prestare la massima attenzione a non strattonare o tirare il vaso. Successivamente, posizionare il vaso nel bagno d'acqua riempito e, utilizzando un paio di pinzette fini e una modesta velocità di perfusione, tenere ciascun lato della parete luminale del vaso prossimale e cannuccare l'estremità prossimale sulla pipetta di ingresso.Quindi infilare il vaso sulle estremità della cannula e far avanzare il vaso fino al punto in cui i T loop possono fissarlo. Posizionare il T loop all'estremità distale del vaso e cannullarlo sulla pipetta di efflusso, fissandolo con i T loop. Regolare la cannula in modo che vi sia una deformazione minima del vaso e in modo che la lunghezza del vaso si avvicini a quella in vivo.Posizionare una piccola pietra per bollicine che fornisce la miscela gassosa appropriata nel bagno e posizionarla. Coprire la camera con pellicola di plastica o un coperchio di vetro per evitare che il microscopio si bagni. Periodicamente chiudere con una molletta il tubo di effluente per verificare se il vaso sta assumendo una colorazione rugginosa.Verificare la presenza di perdite nei vasi aumentando la pressione all'interno del vaso e chiudendo con una pinza prima la linea di efflusso e poi quella di afflusso. Se la pressione intraluminale è stabile, non sono presenti perdite evidenti. Se il vaso presenta un piccolo ramo laterale che perde, legarlo con un singolo laccio di sutura oftalmica 10 o dopo la cannuolatura dei microvasi, l'equilibrazione e la validazione, iniziare l'esperimento per determinare le risposte iniziali di controllo.Ad esempio, per uno stimolo fisiologico come l'attivazione miogenica o la costrizione indotta dalla pressione, modificare casualmente la pressione intraluminale entro un intervallo desiderato e consentire al vaso il tempo necessario per rispondere alla sfida con fenilefrina, somministrata a concentrazioni variabili in ordine casuale. Dopo un tempo di intervento appropriato, avviare un secondo ciclo di raccolta dati effettuando ulteriori interventi oppure lavando via la soluzione iniziale o rimuovendo la sfida fisiologica e verificando che il vaso sia tornato all'equilibrio. Una volta che il vaso ha perso il tono attivo, terminare l'esperimento oppure, se desiderato, raccogliere dati sulla meccanica della parete vascolare.Al termine dell'esperimento, sciacquare tutti i tubi e le camere con PSS ed abbondante acqua distillata o deionizzata, quindi lasciarli asciugare completamente. Qui viene mostrato un micro vaso cannullato con pipette di ingresso e di uscita, nonché anelli in alta ingrandimento. Il diametro interno di cento 12 micron, determinato mediante calibro digitale, è chiaramente visibile in questo caso.Un microvaso cannullato è mostrato al termine dell'equilibrazione. Ecco lo stesso vaso dopo la dilatazione in risposta alla stimolazione con acetilcolina. Infine, questo è il vaso costritto dopo la stimolazione con fenilefrina.Questi grafici riassumono le risposte di un microvaso isolato a condizioni di ipossia, concentrazioni crescenti di acetilcolina o variazioni della pressione intravascolare in condizioni di controllo, e successivamente in presenza di PSS senza calcio. Una volta acquisita, questa tecnica può essere eseguita in circa un'ora se effettuata correttamente, e il vaso può facilmente rimanere vitale per molte ore nella camera mantenendo condizioni appropriate di temperatura, gas e SUSE eight o perfusione eight.

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Un nuovo metodo versatile per l'osservazione del microcircolo è presentato. E 'considerato adatto per osservazione a lungo termine, e per la combinazione con interventi biologici pharmacophysiological o molecolare.

In vivo micro-circolazione di misura nel muscolo scheletrico da Intra-vitale Microscopia

Vi presentiamo una preparazione per la visualizzazione e la manipolazione di segnalazione del calcio in nativo, intatto microvascolari. Tubi endoteliali appena isolate da arterie di resistenza topo che forniscono muscolo scheletrico mantenere in vivo la morfologia e la segnalazione dinamica all'interno e tra le cellule vicine. Tubi endoteliali possono essere preparati da microvasi di altri tessuti e organi.

Isolamento di microvascolare endoteliale tubi da arterie di resistenza mouse

L'intestino tenue è spesso esposto alle tossine che possono influenzare il flusso di sangue e di influenzare negativamente l'assorbimento dei nutrienti. Utilizzando un multimyograph e mesenterica arteria e vena isolati, composti o tossine di interesse possono essere sottoposti a screening per vasoactivity.

Isolare e utilizzo Sezioni di mesenterica bovina arteria e vena come un saggio biologico per verificare Vasoactivity nel piccolo intestino

Vi presentiamo un protocollo per studiare le interazioni umane endoteliali-periciti in mouse utilizzando una variazione del saggio spina angiogenesi gel matrice.

Studio in vivo di Human Interaction endoteliale-pericyte Utilizzando la matrice di gel Plug Assay nel topo

Viene descritta una procedura per preparare preparazioni in faccia della arteria e dell'arto carotide del topo. Tali preparati, quando vengono colorati immunofluorescenti con anticorpi specifici, ci permettono di studiare la localizzazione delle proteine ​​e l'identificazione dei tipi di cellule nell'intera parete vascolare tramite la microscopia confocale.

En Face Preparazione delle navi sanguigne del mouse

Videomicroscopia sistemi sono utilizzati per esaminare le proprietà funzionali delle arteriole del tessuto adiposo isolato in risposta a stimoli fisiologici e farmacologici. Questa tecnica può essere utilizzata per esaminare microvascolari fenotipi in domini differenti del tessuto adiposo in esseri umani obesi.

Valutazione della funzione microvascolare di tessuto adiposo umano mediante videomicroscopia

Questo manoscritto descrive protocolli di video microscopia in vitro per valutare la funzione vascolare nelle arterie di resistenza cerebrale del ratto. Il manoscritto descrive anche tecniche per la valutazione di densità del microvessel con aspersione di lectine e tessuto fluorescente contrassegnato utilizzando flussometria del Laser Doppler.

Valutazione dei meccanismi di controllo vascolare utilizzando Video microscopia del arterie di resistenza isolata dei ratti

Questo manoscritto descrive un semplice protocollo per l'isolamento delle arteriole dalla retina del ratto che può essere utilizzato in studi myography elettrofisiologici, imaging e pressione del calcio.

Isolamento delle arteriole retiniche per studi di fisiologia delle cellule Ex Vivo

Qui, presentiamo un protocollo per l'immunofluorescenza colorazione per osservare direttamente le cellule endoteliali dell'aorta del topo. Questa tecnica è utile quando si studia il fenotipo cellulare e molecolare delle cellule endoteliali in diversi modelli di flusso e nello sviluppo dell'aterosclerosi.

Uso dell'immunofluorescenza en faccia per osservare direttamente le cellule endoteliali vascolari

L'obiettivo di questo protocollo è quello di isolare i microvasi da più regioni del sistema nervoso centrale dei vertebrati lissencefalici e gyrencephalic.

Isolamento affidabile dei micronavi del sistema nervoso centrale in cinque gruppi di vertebrati

La preparazione intensiva di "tubi" endoteliali cerebrali di topo intatti da arteriole parenchimali cerebrali è illustrata per lo studio della regolazione del flusso sanguigno cerebrale. Inoltre, dimostriamo i punti di forza sperimentali di questo modello di studio endoteliale per l'imaging a fluorescenza e la misurazione elettrofisiologica delle principali vie di segnalazione cellulare, compresi i cambiamenti nel potenziale intracellulare [Ca2+] e di membrana.

Isolamento e analisi funzionale dell'endotelio arteriolare del parenchima cerebrale del topo

Impara a isolare e cannulare arteriole di resistenza ex vivo per studiare la reattività vascolare. Questo metodo permette di valutare le risposte a stimoli farmacologici e le proprietà strutturali dei vasi.

Il Ex vivo Preparazione isolato microvasi scheletrico per le Indagini di reattività vascolare

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