Parasite indotta geneticamente Driven Autoimmune Disease Cuore Chagas nel modello di pollo

La malattia di Cha è la condizione clinica che insorge in seguito a infezioni croniche da parte di ate prot e tno mausi. La malattia colpisce il cuore di persone cronologicamente infette diverse decadi dopo l'acquisizione delle infezioni. Un modello sistemico transregno mostra che le uova di gallina sono permissive alle infezioni da Taz macro cruise.

Nella prima settimana di sviluppo dell'embrione, gli esperimenti mostrano che i polli privi di infezione che mantengono il parassita KA nei loro genomi muoiono di malattia cardiaca di Chagas; un'ottima sistemazione e un'adeguata fornitura di cibo e acqua garantiscono il benessere animale. La massa tripla da crociera e le buone forme nuotatrici si ottengono dalla coltura tessutale. Trasilluminare per tio e uova per mostrare il loro controllo delle bolle.

Le uova non ricevono inoculazione para. Le uova di controllo fittizie vengono inoculate con 10 microlitri di mezzo di coltura. Il foro viene sigillato con nastro adesivo essivo 100 FL di mania virale.

I brasiliani sono maestri professionali. Le capre vengono inoculate nella camera d'aria dell'uovo di pollo fecondato con 100 unità virali e trappole macro triple di capre maestre in 10 microlitri di mezzo al calcio, inoculando la camera d'aria o l'uovo di pollo virtualizzato. Le uova vengono incubate a 37 °C e al 65% di umidità per uno a uno giorni, con una rotazione delicata ogni 30 minuti; le provette schiudono uniformemente da uova inoculate con macro renoso e da controlli marcati.

Le guance si sviluppano fino all'età adulta. I campioni di sangue vengono prelevati dalle vene alari. Il sangue viene trasferito in provette coniche da 15 ml.

Le cellule mononucleate vengono separate mediante centrifugazione su gradiente di FICO, rimuovendo il buffy coat dei globuli bianchi e scartando la separazione. Il DNA genomico medio viene estratto dalle cellule mononucleate del sangue. Impostare provette coniche da 1,5 ml nel tampone in base al disegno della PCR. La PCR viene eseguita per amplificare la sequenza nucleare chroy G-N-A-N-G-N-A e pls GNA kg NA. Utilizzando specifici set di primer, impostare le provette della reazione nel termociclatore dopo l'esecuzione.

Riprendere le provette dal termociclatore. Analizzare i prodotti della PCR. I prodotti della PCR vengono separati mediante elettroforesi in gel di agarosio.

Le bande di GNA nel gel vengono trasferite su una membrana di nylon carica positivamente. L'ibridazione viene effettuata con sonde radioattive specifiche per distinguere i ruoli svolti indipendentemente dalla persistenza del parassita e dall'immunità. Nella patogenesi della malattia di Chagas, utilizziamo un modello di pollo refrattario all'infezione da TNO cruise, eccetto durante la fase iniziale dello sviluppo embrionale, prima della maturazione del sistema immunitario; i pulcini derivanti da uova inoculate con TNO cruise sono privi di infezione, ma il mitocondrio del parassita A KG A viene mantenuto nell'organismo.

Solo i pulcini schiusi da uova inoculate con tzo macro mostrano bande di kg in cui qualsiasi DNA non è presente nel genoma del pollo. I pulcini schiusi da uova inoculate con capre pro master di Leia brasiliane non conservano le sequenze circolari mitocondriali nei loro genomi. Corsia uno: vuota; corsia due: controllo GNA; corsie tre e quattro: controllo GS; corsie da cinque a quattordici: GS da schiusa ceca di uova infette brasiliane.

Lane 15 mostra il frammento amplificato del Brasile di 750 paia di basi ottenuto con i primer specifici per il kDNA LB tre e LB cinque. L'analisi PCR a scacchiera mostra i primer di Gallus guns utilizzati dopo tre cicli di amplificazione con aumento progressivo della temperatura (walking nest). La PCR è stata eseguita con diversi set di primer per il kDNA.

Il ciclo di stringenza di Louis crea siti per l'innesco e l'allineamento in condizioni di alta stringenza. Aumenta la specificità dei prodotti di amplificazione. I prodotti PCR derivanti da amplificazioni con minor numero di cicli, ibridizzati con la sonda KA, sono stati clonati e sequenziati commercialmente.

La sequenza mostra il kg NA nel cerchio blu con ricombinazione intermedia per omologia di microsequenze a livello del giunzione gialla e il gallo ga GNA verde. Il mappaggio del kg NA nell'integrazione nel genoma del pollo viene effettuato mediante una tecnica PCR con primer target di tipo AED e PCR per terapia RTP. I polli adulti mutati Cajun hanno sviluppato la malattia cardiaca di Chagas.

Più i controlli crescono verso una vita sana. I polli con mutazione KDNA mostrano un ingrandimento del contorno cardiaco nei film radiografici. La necroscopia mostra che i polli di controllo hanno un cuore di dimensioni ridotte.

Il Cajun, un pollo mutato, presenta idropericardio, idro tossico e un cuore di grandi dimensioni. La cardiomegalia è simile a quella della malattia cardiaca di Chagas. Il cuore di pollo controllato da Moog mostra un'istologia normale.

Un kg di un pollo mutato mostra un tunnel creato nel miocardio dai linfociti citotossici che distruggono le fibre cardiache. Le sequenze di cerchi aviari che si integrano in regioni codificanti su diversi cromosomi vengono rivelate mediante una PCR di tipo annidata modificata che combina primer kg NA con set di primer specifici per il DNA dell'ospite decenni. I polli con DNA mutato muoiono per insufficienza cardiaca e presentano cardiomegalia.

La patologia istologica mostra una miocardite simile alla miocardite di Chagas, che interessa il cuore. In polli con mutazione nel gene NA, si tratta di una malattia geneticamente determinata. Questa è la prima volta che le manifestazioni cliniche e patologiche della malattia di Chagas vengono riprodotte in un modello sperimentale chiaro e interspecifico.

Grazie.