Endocardite modello sperimentale di meticillino resistente Staphylococcus aureus (MRSA) in Rat

L'obiettivo generale di questa procedura è stabilire un modello sperimentale di endocardite infettiva nei ratti. Ciò si ottiene coltivando prima l'aureo e preparando i cateteri chirurgici per l'infezione. Successivamente, viene preparata l'area chirurgica e l'animale viene anestetizzato.

Una volta che l'animale è anestetizzato, un catetere viene inserito attraverso l'arteria carotide destra verso il cuore. Il passaggio finale consiste nell'infettare gli animali con l'aureo mediante iniezione della vena caudale. Infine, i tessuti bersaglio vengono sezionati e preparati per la coltura quantitativa.

Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come un modello di endocardite rapida, è che il modello di endocardite rossa può essere utilizzato con il sistema di imaging in vivo. Ivus. Questo metodo può aiutare a rispondere a domande chiave nel campo della patogenesi orale in fasi, come la virulenza e l'efficacia dell'agente antimicrobico. In generale, le persone che non conoscono questa tecnica avranno difficoltà perché la procedura chirurgica è impegnativa.

Per prima cosa inoculare un anello pieno di coltura M SSA da un ceppo congelato a un caso di trip di sangue di pecora. La coclea di soia, incubare la coltura durante la notte a 37 gradi Celsius dopo essersi assicurati che non vi siano contaminazioni. Prendi una colonia dal piatto e usala per inoculare cinque millilitri di brodo di soia in un tubo da 15 millilitri con tappo a scatto.

Incubare l'inoculo a 37 gradi Celsius per una notte in un'incubatrice vibrante. Impostato a 200 giri/min per preparare prima i cateteri. Tagliare i tubi in polietilene a lunghezze di 10 centimetri e sterilizzare i cateteri in soluzione disinfettante cex per 30 minuti.

Successivamente, fondere un'estremità di un tubo sterilizzato premendo la punta con una pinza sterile riscaldata per creare un catetere che passerà dall'arteria carotide destra al ventricolo sinistro e causerà danni all'endocardio quando il cuore batte. Quindi anestetizzare il ratto mettendolo in una camera contenente una miscela di fluoro e ossigeno fino a quando l'anestetico non fa effetto. Confermare l'anestesia controllando se i muscoli sono rilassati e i riflessi del pedale sono assenti.

E mantenere uno stato anestetizzato durante l'intervento chirurgico utilizzando un cono nasale collegato alla miscela di gas. Pulire l'area chirurgica con betadina ed etanolo al 70% utilizzando una tecnica sterile durante l'intervento. Posizionare il ratto in posizione dorsale e praticare un'incisione verticalmente attraverso lo strato cutaneo del collo sopra lo sterno utilizzando la dissezione smussata.

Separare la fascia per esporre l'arteria carotide destra. L'arteria carotide destra si trova appena a destra della linea mediana sopra le clavicole. Estrarre con cautela l'arteria dalla cavità del collo e posizionare due punti di sutura di seta di 10 centimetri sotto l'arteria per legarla all'estremità cefalica esposta.

Quindi posizionare una clip sull'arteria per evitare il sanguinamento. Fai un piccolo foro nella parte superiore dell'arteria usando un introduttore di catetere usando una pinza. Inserire l'estremità non sigillata del catetere attraverso il foro nell'arteria.

Rimuovere la clip e spingere il catetere verso il basso verso il cuore. Fino a quando non si incontra la resistenza inserita correttamente, il catetere dovrebbe estendersi da quattro a cinque centimetri nell'arteria e dovrebbe pulsare con il battito cardiaco del ratto. Una volta posizionato il catetere, legare la sutura allentata attorno all'estremità dell'arteria e fissare il catetere in posizione.

Con la sutura di seta, tagliare la sutura in eccesso e le estremità del catetere, quindi infilare le estremità sotto la pelle del collo. Chiudere la pelle con le clip cutanee. Metti il ratto in una gabbia pulita e tienilo in un luogo caldo fino a quando non si riprenderà dall'anestesia.

Fornire cibo e acqua e controllare frequentemente il ratto, sia durante che dopo il recupero. L'infezione può essere eseguita tra uno e sette giorni dopo l'intervento, ma il tempo dovrebbe rimanere costante all'interno degli esperimenti. Pulire la coda del ratto con etanolo al 70% e iniettare 0,5 millilitri di coltura di MRSA nella cellula desiderata.

Conta nella vena della coda. Utilizzando un ago da mezzo pollice calibro 27, applicare pressione sul sito di iniezione fino a quando l'emorragia non si è fermata prima di riportare il ratto nella sua gabbia. Dopo aver sacrificato il topo, pulisci il torace con etanolo al 70% e poi fai un'incisione a forma di V nel torace sotto lo sterno.

Taglia la cartilagine delle costole su ciascun lato dello sterno. Per esporre il cuore, tirare delicatamente il cuore verso l'alto e tagliare il tessuto vicino all'aorta e sezionarlo verso l'alto per liberare il cuore. Posiziona il cuore su una capsula di Petri sterile foderata con una garza da quattro pollici per quattro, quindi fai un taglio attraverso la parete interna del ventricolo sinistro e apri la camera sul lato sinistro.

Verificare il corretto posizionamento del catetere, quindi rimuoverlo. Esaminare e rimuovere le vegetazioni dalla valvola con forbici e pinze. Rimuovere anche i reni e la milza e, dopo aver pesato e omogeneizzato i tessuti e le vegetazioni, effettuare diluizioni seriali in PBS per la coltura quantitativa.

Qui è mostrato un catetere posizionato correttamente, come indicato dalla freccia più a sinistra. Si estende attraverso la valvola aortica e nel lato sinistro della camera cardiaca, e numerose vegetazioni sono visibili intorno alle valvole aortiche, come indicato dalle frecce centrale e destra. Questa tabella fornisce un esempio della virulenza di un ceppo di ssus nel modello di endocardite di ratto.

Tutti gli animali sono stati sfidati con inoculare di 10 al quinto e 10 al sesto. CFU ha sviluppato endocardite con alta densità di ssus nelle vegetazioni cardiache, così come nei reni e nella milza. Questa procedura chirurgica può essere eseguita entro 10 minuti se viene eseguita correttamente.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di mantenere l'animale in uno stato valutato durante l'intervento chirurgico successivo a questa procedura. Non metodi come l'ivus possono essere eseguiti per rispondere a domande aggiuntive come il monitoraggio in tempo reale dell'efficacia degli agenti antimicrobici e l'espressione genica in vivo dopo il suo sviluppo. Questa tecnica è il modo per i ricercatori nel campo dello step orus e della narrativa di esplorare il suo fattore di virulenza patogena nell'infezione endovascolare.

Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come stabilire un modello sperimentale di endocardite nei ratti. Non dimenticare che lavorare con l'MRA può essere estremamente pericoloso e che durante l'esecuzione di questa procedura è necessario prendere precauzioni come indossare camice e guanto.