L'uso di cistometria in piccoli roditori: A Study of Chemosensation vescica

Lo scopo di questa procedura è determinare l'influenza dei composti chimici sulle funzioni di stoccaggio e svuotamento della vescica. Ciò si ottiene impiantando prima un catetere nella vescica. Dopo un breve periodo di recupero, una soluzione di controllo viene infusa attraverso il catetere per 30 minuti.

Poiché la pressione intravescicale e il volume svuotato vengono registrati per altri 30 minuti, l'animale viene infuso con un composto di interesse. In definitiva, i risultati possono mostrare come le sostanze chimiche irritanti anche il modello di svuotamento attraverso l'analisi della frequenza di svuotamento. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la registrazione della contrattilità della vescica isolata, è che la funzione di questo organo può essere studiata in condizioni più fisiologiche.

Ad esempio, le azioni regolatorie del sistema nervoso centrale sono preservate. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto le fasi chirurgiche sono difficili da imparare perché ci sono una serie di dettagli tecnici e manovre che dovrebbero essere osservate per garantire il successo dell'esperimento. Per preparare prima il tubo che si desidera impiantare nella vescica, tagliare un tubo in PE 50 alla lunghezza desiderata e mettere un piccolo pezzo bianco di catetere calibro 18 sopra il catetere principale.

Quindi creare un piccolo bracciale all'estremità fiammando un'estremità del tubo e sciacquarlo con soluzione salina per eliminare l'aria. Ora induci l'anestesia in un ratto femmina di 10-12 settimane con fluoro. Dopo aver indotto l'anestesia, impostare il livello di mantenimento del fluoro.

Posizionare l'animale sulla schiena e posizionare una piccola maschera per anestesia ricavata da una siringa da 10 cc. Dopo la rasatura dell'addome e la disinfezione del derma, procedere con l'intervento. Il seguente intervento chirurgico viene eseguito sia sui ratti che sui topi allo stesso modo.

Inizia eseguendo una laparotomia della linea mediana inferiore per esporre la vescica. Successivamente inizia la parte più critica dell'intervento chirurgico. Sotto un microscopio operatorio, posizionare una sutura a cordino nella cupola della vescica utilizzando una sutura monofilamento a sei zero non assorbibile.

Successivamente, utilizzando un ago, eseguire una piccola cistostomia all'interno del cordone della borsa. Inserire il catetere cuffiato in PE 50 attraverso questo foro. I tubi per cateteri più sottili come il PE 10 possono avere una resistenza più elevata e più variabile, quindi non sono raccomandati.

Fissare il cordino della borsa attorno al tubo usando un nodo da chirurgo. Quindi tirare delicatamente il catetere verso l'esterno fino a quando la punta cuffiata non si trova direttamente sotto la sutura. Il pezzo di catetere calibro 18 viene spinto verso la sutura per evitare perdite.

Verificare la presenza di perdite tra il catetere e la vescica. Con una delicata infusione di soluzione salina. Stringere eventuali perdite con punti di sutura aggiuntivi.

A questo punto, chiudere i muscoli addominali utilizzando suture monofilamento, lasciando un passaggio per il catetere nella parte superiore dell'incisione. Scavare il catetere nella regione interscapolare utilizzando un'asta metallica cava, impedendo così agli animali di mordere il tubo. Dopo l'intervento chirurgico, l'asta di metallo deve essere posizionata sotto la pelle e sopra i muscoli addominali e dorsali.

Spingere l'asta attraverso l'animale per via sottocutanea fino alla regione interscapolare. Completare l'intervento chiudendo i muscoli addominali e la pelle con suture monofilamento non assorbibili. Ora è molto importante verificare la permeabilità e la stabilità del catetere impiantato lavandolo con soluzione fisiologica.

La soluzione per infusione dovrebbe uscire dalla vescica, accendere l'uretra. Dopo aver somministrato l'analgesico per via sottocutanea, chiudere l'estremità esterna del catetere con una pellicola di plastica e ancorare il catetere alla pelle della parte bassa della schiena del ratto. Infine, lascia che l'animale si riprenda per 30 minuti.

Prima di iniziare la citometria, assicurarsi che gli strumenti siano stati calibrati correttamente. Metti il ratto in una gabbia metabolica sopra un recipiente contenente olio che poggia su una bilancia digitale. Il passaggio successivo consiste nel collegare il catetere impiantato a un rubinetto a tre vie tramite un tronchetto di esca.

Il rubinetto deve essere collegato al trasduttore di pressione e a una pompa di infusione. Il trasduttore di pressione è ulteriormente collegato tramite un amplificatore al sistema di acquisizione dati e un computer che utilizza un software disponibile al pubblico inizia le misurazioni di controllo avviando la pompa di infusione per instillare soluzione salina nella vescica. Per un periodo di 30 minuti, la gabbia metabolica viene sospesa su una bilancia digitale, che viene utilizzata per stimare il volume svuotato del ratto.

La pressione intravescicolare viene registrata mentre la vescica si riempie e si svuota. Nella fase successiva, i farmaci possono essere somministrati per via sistemica o intravescicale nell'arco di altri 30 minuti di raccolta dati. Quando l'esperimento è completo, l'animale dovrebbe essere sacrificato.

Una tipica traccia di pressione di un ratto mostra che durante l'infusione di fluido, c'è un lento accumulo di pressione nella vescica fino al raggiungimento di una certa soglia. Quindi la vescica si contrarrà e lo sfintere urinario si aprirà permettendo il passaggio della soluzione instillata attraverso l'uretra. In questo modo, la vescica viene svuotata.

La contrazione si fermerà e la pressione scenderà di nuovo al livello basale. I dati raccolti da un mouse hanno tutte le stesse caratteristiche. La citometria è stata utilizzata per identificare i bersagli molecolari dell'olio di senape o mo MO è un composto altamente reattivo che è stato a lungo utilizzato in modelli sperimentali di infiammazione e iperalgesia di organi viscerali come la vescica urinaria.

Come previsto, un'infusione intravescicale di 10 millimolari di MO ha indotto una forte diminuzione dell'intervallo contrattile nei topi wild type. Curiosamente, i topi carenti del recettore MO T RPA A hanno avuto un risultato simile ai tipi selvatici nelle stesse condizioni. Al contrario, MO ha indotto un cambiamento molto più debole nei parametri sistematici in un topo TRP V one knockout rispetto al topo wild type.

I dati suggeriscono che TRP V one può svolgere un ruolo chiave nell'irritazione viscerale indotta da mo. La frequenza media di svuotamento istantaneo prima e durante l'infusione intravescicale di MO supporta questi dati. La frequenza media è relativa a un'infusione salina.

Durante il tentativo di questa procedura, è importante assicurarsi che il catetere rimanga saldamente attaccato alla vescica in modo che non vi siano perdite della soluzione di infusione nell'addome. Dopo aver visto questo video, dovrebbe avere una buona comprensione di come misurare la pressione intravescicale, che comporta l'impianto di catetere nella vescica e il posizionamento di animali svegli o anestetizzati in una fase di citometria a profusione vescicale controllata.