Name: Lalcool polivinilico Sponge impianto modello (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-04-18T13:00:00.000+00:00
Duration: 6 min 23 s
Description: Impara a utilizzare spugne di alcol polivinilico per modellare la guarigione delle ferite nei topi. Questo metodo consente di analizzare trattamenti e processi biologici in vivo con saggi quantitativi e istologici.

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Il finanziamento fornito dal National Institutes of Health (NIH) per R01-HL088424; Veterans merito affari premio a PPY.

1. Sponge Preparazione <ol><li> Spugne idrato di agitazione per una notte a 0,9% (w / v) soluzione acquosa di cloruro di sodio. </li><li> Sterilizzare in autoclave spugne idratati loro. Per 75 mL, autoclave per 25 minuti a 121 ° C. </li></ol> Nota: spugne caricamento con un trattamento come descritto di seguito è opzionale. <ol start="3"><li> In una cappa sterile con strumenti sterili, prendere una spugna dalla soluzione utilizzando una pinzetta. Comprimere la spugna con le pinzette e usare una punta vuoto per rimuovere la soluzione più possibile dalla spugna. Posizionare la spugna ben strizzato in un piatto di coltura tissutale, facendo attenzione a lasciare uno spazio tra le spugne. Più pozzetti può essere utilizzato per separare diversi trattamenti. </li><li> Pipettare la soluzione di trattamento direttamente sul centro di una spugna. Premere delicatamente la spugna con la punta della pipetta dopo la soluzione è stata posta sulla spugna, questo aiuta la spugna assorbire la soluzione. Nota: Il 6 millimetridiametro da 2,75 mm di spessore spugne che impieghiamo in grado di contenere un massimo di 25 pl. </li><li> Una volta che tutte le spugne sono stati caricati, la piastra sono in possono essere conservati in ghiaccio fino a che vengono impiantati nel topo. </li></ol> 2. Procedura chirurgica <ol><li> Opportunamente anestetizzare animali e amministrare pre-emptive analgesico. L&#39;intera procedura durerà circa 20 minuti per ogni animale. Per un mouse 30 g di 1,5 litri al minuto di ossigeno con il 1,5% isoflurano viene usato per indurre e mantenere l&#39;anestesia. Quando animale non è più sensibile alla prova reflex pinch, posto in cono in posizione supina. Utilizzare un rasoio elettrico per radere uno da 1 pollice da 1 pollice area sul lato inferiore ventrale sotto la gabbia toracica. Pulire taglio di capelli. </li><li> Sterilizzare l&#39;area rasata pulendo con Betadine seguita dal 70% di alcol. Ripetere questa betadine-alcol pulizia tre volte. </li><li> Tenendo la pelle ha insegnato, usare il bisturi per fare una incisione verticale 1,5-2 volte il diametrometro delle spugne da inserire, essendo attenzione a non tagliare attraverso la cavità del corpo. </li><li> Utilizzare una pinzetta per tenere il bordo della pelle e lentamente cominciato a separare la pelle dal muscolo su entrambi i lati dell&#39;incisione usando forbici Metzembaum. La tasca dovrebbe attraversare la larghezza del mouse e la gabbia toracica alle gambe posteriori. </li><li> Utilizzare una pinzetta per raccogliere la spugna primo essere messi in animali da pizzicandola dai lati. Trasferire la spugna ad una pinzetta rettilinei in modo che si svolge dalla parte superiore e inferiore. </li><li> Utilizzare pinzette per tenere il bordo della pelle e sollevare in modo che la spugna può essere inserito. Inserire lentamente la spugna cercando di evitare di toccare la pelle o sotto il muscolo, come la spugna sarà difficile muoversi una volta che ha toccato i tessuti. Ripetere l&#39;operazione per tutte le spugne. </li><li> Una volta che tutte le spugne sono state inserite, posto due o tre suture per chiudere l&#39;incisione. Utilizzare un paio di pinzette per tenere entrambi i lati della incisione insieme e infilare il Suturi attraverso entrambi gli strati di pelle. Stringere il primo tiro quel tanto che basta per chiudere i bordi cutanei. Termina il nodo quadrato con un altro tiro dalla direzione opposta, questa volta tirando il nodo stretto. Poi legare due nodi più quadrati per terminare la sutura (figura 2). Porre suture supplementari per chiudere l&#39;incisione intero. Altri metodi di incollaggio della ferita può essere utilizzato come dermabond, clip ferita, o graffette. </li><li> Rimuovere animale dal sistema per anestesia e controllare, mentre la coscienza è ripreso. Animal dovrebbe iniziare rapidamente deambulazione e tornare al pre-op mobilità. Assicurarsi che siano in grado di raggiungere sufficiente cibo e acqua. Alcuni alimenti inumidito può essere collocato sul fondo della gabbia contribuire al recupero. Continuare a monitorare giorno per animale segni di sofferenza o disagio, e controllare il sito di incisione per l&#39;infezione, infiammazione e deiscenza. Prendere misure adeguate se eventuali complicazioni al recupero si trovano. </li></ol> 3. Iniezione opzionale <p class = &quot;jove_content&quot;&gt; Nota: Una volta che le spugne sono stati impiantati nella animale possono essere iniettati con una soluzione di cellule, farmaci, fattori di crescita ecc Ciò consente di analisi degli effetti della sostanza iniettata durante i tempi di consegna diversi e amministrazione regimi. Se le iniezioni vengono effettuate un controllo deve essere sempre utilizzato. <ol><li> Per iniettare la spugna con una soluzione desiderata, prima di determinare la quantità di sostanza da somministrare il mouse. La sostanza deve essere concentrata in modo che il volume di iniezione è inferiore alla metà del volume totale della spugna può contenere. </li><li> Preparare una siringa per l&#39;iniezione (per i topi che usiamo un 28 ago G). </li><li> Posizionare l&#39;animale a ricevere le iniezioni in anestesia. </li><li> Quando l&#39;animale non risponde più alla prova pinch l&#39;iniezione può essere dato. </li><li> Per dare l&#39;iniezione spingere l&#39;ago con un angolo di 45 ° completa la cute al centro della spugna. Poi spingere l&#39;ago nella spugna solo andando a metà stradaattraverso il suo spessore. L&#39;obiettivo è quello di iniettare nel centro esatto della spugna. </li><li> Per verificare che l&#39;ago è in spugna, sollevare lentamente l&#39;ago verticalmente. Se l&#39;ago è in spugna, la spugna deve spostarsi con l&#39;ago. </li><li> Iniettare lentamente nella spugna e rimuovere l&#39;ago. Se ci sono spugne multiple che richiedono iniezioni è possibile che parte del fluido iniettato fuoriuscirà dei precedenti siti di iniezione. </li></ol> 4. Sponge rimozione Nota: Durante la rimozione spugna, gestire la spugna con estrema cautela. Evitare di penetrare la spugna con gli strumenti chirurgici e prevenire il sanguinamento eccessivo nella spugna evitando le arterie più importanti di tutto il tessuto circostante. <ol><li> Dopo che l&#39;animale è eutanasia, rimuovere la spugna tenendo la pelle con una pinzetta e fare un&#39;incisione chiudere la spugna. </li><li> Separare con attenzione le spugne dalla capsula che circonda un<html> nd evitare la raccolta tessuto aggiuntivo che circonda la spugna. Per i saggi, quali la somministrazione di farmaci o di morfometria, meno precisione è necessaria per escissione. </li></ol> 5. Risultati rappresentativi Spugne rimossi possono essere immagazzinati in condizioni diverse a seconda del tipo di analisi che verrà effettuata. Per sezionamento, le spugne recuperati possono essere incorporati in un mezzo per congelamento come temperatura di taglio ottimale (OCT) composto o collocato in formalina al 10% per l&#39;incorporamento e sezionamento in blocchi di paraffina (Figura 3A e B). I migliori risultati si ottengono quando il sezionamento la spugna viene tagliato a metà lungo il diametro e incorporato tagliare superficie basso (Figura 4A e B). Sezioni della spugna deve essere presa in modo che intera larghezza della spugna è presente. Figura 3A mostra due spugne, la spugna sinistra è stato incorporato / sezionato in modo errato e la spugna destra è stato elaborato correttamente. ent &quot;&gt; Per l&#39;analisi, spugne può essere collocato in un tubo Eppendorf e conservati a -20 ° C fino al momento per l&#39;elaborazione Per RNA e quantitativa in tempo reale spugne analisi PCR deve essere collocato in un tubo Eppendorf, istantaneamente congelati e conservati a. - 80 ° C. Inoltre, un conservante RNA, come RNAlater da QIAGEN, può essere usato per stabilizzare l&#39;RNA per uno stoccaggio sicuro alle alte temperature. fluido della ferita può essere raccolti premendo le spugne su un tubo, e mettendo in comune il fluido dal spugne multiplo per ottenere un campione rappresentativo. cellule vive, quali fibroblasti, macrofagi e linfociti, possono anche essere estratto dalle spugne. Dopo la rimozione dall&#39;animale, spugne può essere posto in un mezzo appropriate per il tipo desiderato di cellule. spugne possono essere trattati per liberare le cellule fisiche (cioè camminando) o enzimatica (ad esempio collagenasi) metodi. <img alt="Figura 1." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig1.jpg" /> Figura 1. DisidratazioneTed PVA dischi di pan di Spagna in tre diverse dimensioni. <img alt="Figura 2." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig2.jpg" /> Figura 2. Immagine del mouse guarigione delle ferite modello che mostra la posizione della ferita laterale e quattro spugne PVA. <img alt="Figura 3." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig3.jpg" /> Figura 3. (A) H &amp; E colorazione a 4x e (B) colorazione tricromica a 10x di spugne paraffina sezionati embedded. <img alt="Figura 4." src="/files/ftp_upload/3885/3885fig4.jpg" /> Figura 4. (A) Immagine di taglio spugna a metà lungo il diametro. (B) PVA mezzo spugna, incorporato la parte tagliata verso il basso in ottobre

<ol><li>Efron, D. T., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Subcutaneous+sponge+models%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Med%22%5BJournal%5D)">Subcutaneous sponge models.</a> Methods Mol. Med. 78, 83-93 (2003).</li>
<li>Gottrup, F., Agren, M. S., Karlsmark, T. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Models+for+use+in+wound+healing+research%3A+a+survey+focusing+on+in+vitro+and+in+vivo+adult+soft+tissue%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Models for use in wound healing research: a survey focusing on in vitro and in vivo adult soft tissue.</a> Wound Repair. 8, 83-96 (2000).</li>
<li>Sprugel, K. H., McPherson, J. M., Clowes, A. W., Ross, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effects+of+growth+factors+in+vivo.+I.+Cell+ingrowth+into+porous+subcutaneous+chambers%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Pathol%22%5BJournal%5D)">Effects of growth factors in vivo. I. Cell ingrowth into porous subcutaneous chambers.</a> Am. J. Pathol. 129, 601-613 (1987).</li>
<li>Alaish, S. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Comparison+of+the+polyvinyl+alcohol+sponge+and+expanded+polytetrafluoroethylene+subcutaneous+implants+as+models+to+evaluate+wound+healing+potential+in+human+beings%5BTitle%5D)+AND+%22Wound+Repair%22%5BJournal%5D)">Comparison of the polyvinyl alcohol sponge and expanded polytetrafluoroethylene subcutaneous implants as models to evaluate wound healing potential in human beings.</a> Wound Repair. 3, 292-298 (1995).</li>
<li>Davidson, J. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Animal+models+for+wound+repair%5BTitle%5D)+AND+%22Arch.+Dermatol.+Res%22%5BJournal%5D)">Animal models for wound repair.</a> Arch. Dermatol. Res. 290, 1-11 (1998).</li>
<li>Alfaro, M. P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((sFRP2+suppression+of+bone+morphogenic+protein+%28BMP%29+and+Wnt+signaling+mediates+mesenchymal+stem+cell+%28MSC%29+self-renewal+promoting+engraftment+and+myocardial+repair%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">sFRP2 suppression of bone morphogenic protein (BMP) and Wnt signaling mediates mesenchymal stem cell (MSC) self-renewal promoting engraftment and myocardial repair.</a> J. Biol. Chem. 285, 35645-35653 (2010).</li>
<li>Andrade, S. P., Ferreira, M. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+sponge+implant+model+of+angiogenesis%5BTitle%5D)+AND+%22Methods+Mol.+Biol%22%5BJournal%5D)">The sponge implant model of angiogenesis.</a> Methods Mol. Biol. 467, 295-304 (2009).</li>
<li>Diegelmann, R. F., Lindblad, W. J., Cohen, I. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+subcutaneous+implant+for+wound+healing+studies+in+humans%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A subcutaneous implant for wound healing studies in humans.</a> J. Surg. Res. 40, 229-237 (1986).</li>
<li>Efron, D. T., Most, D., Shi, H. P., Tantry, U. S., Barbul, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+novel+method+of+studying+wound+healing%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Surg.+Res%22%5BJournal%5D)">A novel method of studying wound healing.</a> J. Surg. Res. 98, 16-20 (2001).</li>
<li>Lindblad, W. J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Considerations+for+selecting+the+correct+animal+model+for+dermal+wound-healing+studies%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biomater.+Sci.+Polym.+Ed%22%5BJournal%5D)">Considerations for selecting the correct animal model for dermal wound-healing studies.</a> J. Biomater. Sci. Polym. Ed. 19, 1087-1096 (2008).</li>
</ol>

Non abbiamo nulla da rivelare.

<p class="jove_content"&gt; Il modello spugna di guarigione delle ferite ha molteplici varianti, che può essere eseguita in molte specie diverse compresi gli esseri umani e le spugne possono anche essere impiantati dorsalmente<sup&gt; 1,2,8</sup&gt;. Per studi su esseri umani e alcune altre specie, spugne può essere necessario essere collocati in un tubo di silicone porosa per impedire la spugna venga incapsulato e per consentire facilità di rimozione<sup&gt; 4,8</sup&gt;. La posizione della spugna impianto può essere modificata in base ai risultati desiderati e l&#39;abilità del tecnico. L&#39;impianto dorsale può permettere le spugne di muoversi sotto la pelle, mentre gli impianti ventrali sono più difficili a causa della probabilità di tagliare fino alla cavità addominale. Le spugne può essere impostato con un catetere in modo che la somministrazione di farmaci è costante e controllata, eliminando la necessità di iniezioni multiple<sup&gt; 9</sup&gt;. Più piccole, spugne tubolari possono anche essere iniettato attraverso un ago<sup&gt; 8</sup&gt;. Spugne composizione non è limitata a solo alcool polivinilico. Essi possono essere preparati da materiali diversi esclusivamente o in combinazione<sup&gt; 7</sup&gt;.</p&gt;<p class="jove_content"&gt; E &#39;fondamentale per la preparazione e la collocazione in spugna l&#39;animale ad essere coerenti e ben compreso. Se spugne sono ricavati da fogli devono essere di peso simile per la comparabilità. Se la spugna deve essere caricato con cellule o un trattamento, la quantità collocato in ogni spugna deve essere esatto. Il processo di guarigione può variare in base alla posizione del posizionamento della spugna nell&#39;animale e guarigione diminuisce all&#39;aumentare della distanza dal all&#39;aumentare testa<sup&gt; 1,10</sup&gt;.</p

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Comments </td></tr><tr><td> PVA Sponge </td><td> Medtronic </td><td> CF120 </td><td> Le dimensioni e porosità della spugna dipende dell&#39;esperimento </td></tr><tr><td> Dimensioni lama Scalpel 15 </td><td> Mediale BD </td><td> 371115 </td><td></td></tr><tr><td> Metzembaum forbici </td><td> Thermo Scientific </td><td> 79-211 </td><td></td></tr><tr><td> Pinza emostatica </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> 13004-14 </td><td></td></tr><tr><td> Porta aghi </td><td> Strumenti di Scienze Belle </td><td> 12004-16 </td><td></td></tr><tr><td> 5-0 nylon sutura </td><td> Ethilon </td><td> 698 </td><td></td></tr><tr><td> Ottobre compound </td><td> Tissue-Tek </td><td> 4583 </td><td></td></tr></tbody></table>

l&#39;alcool polivinilico sponge impianto modello

The Polyvinyl Alcohol Sponge Model Implantation

La guarigione delle ferite è un complicato processo multistep che coinvolge molti tipi di cellule, fattori di crescita e composti 1-3. A causa di questa complessità, studi di guarigione delle ferite è più completa se effettuata nel vivo. Ci sono molti modelli in vivo disponibile a studiare la guarigione delle ferite acute, tra cui incisionale, escissionale, spazio morto e ustioni. Modelli di spazio morto sono artificiali, impianti porosi che vengono utilizzati per studiare la formazione del tessuto e gli effetti delle sostanze sulla ferita. Alcuni dei modelli comunemente usati spazio morto includono alcool polivinilico (PVA) spugne, cilindri di acciaio rete metallica, politetrafluoroetilene espanso (ePTFE) materiali, e il 1,2 Cellstick. Ogni modello spazio morto ha i suoi limiti basate sulla composizione materiale e il suo impianto metodi. Il filo di acciaio modello maglia cilindro ha una fase di latenza di infiltrazione dopo l&#39;impianto e richiede una quantità di tempo prima della formazione di tessuto di granulazione Begins 1. Le fasi successive di guarigione delle ferite è meglio analizzati utilizzando i 1,4 ePTFE modello. Il Cellstick è una spugna di cellulosa in un modello tubo in silicone che è tipicamente usata per studiare ferite chirurgia umana e avvolto fluido 2. La spugna PVA è limitata a studi acuti, perché inizia con il tempo per provocare una risposta da corpo estraneo che provoca una reazione a cellule giganti nell&#39;animale 5. A differenza di altri materiali, spugne PVA sono facili da inserire e rimuovere, realizzate con materiali inerti e non biodegradabili, eppure sono morbidi abbastanza per essere sezionato per l&#39;analisi istologica 2,5. Nella guarigione della ferita la spugna PVA è molto utile per analizzare la formazione di tessuto di granulazione, deposizione di collagene, la composizione fluida della ferita, e gli effetti delle sostanze sul processo di guarigione 1,2,5. Oltre al suo impiego in studio di una vasta gamma di attributi di guarigione delle ferite, la spugna PVA è stato utilizzato anche in molti altri tipi di studi. Si hcome state utilizzate per indagare l&#39;angiogenesi tumorale, la consegna della droga e la sopravvivenza delle cellule staminali e attecchimento 1,2,6,7. Con la sua alterabilità grande, una precedente utilizzazione estensiva, e risultati riproducibili, la spugna PVA è un modello ideale per molti studi 1,2. Qui, verrà descritto l&#39;, impianto preparazione e il recupero di PVA dischi spugna (Figura 1) in un modello murino di guarigione delle ferite.

Uno strumento utile per analizzare gli effetti di farmaci, fattori di crescita, e / o cellule manipolate in un modello animale di riparazione della ferita viene descritta. Questa tecnica utilizza le proprietà di un alcool polivinilico (PVA) spugna per fornire e contenere il trattamento desiderato e forniscono anche una piattaforma da asportare e analizzati.

L&#39;alcool polivinilico Sponge impianto modello

La guarigione delle ferite è un processo complicato e multistadio che coinvolge molti tipi cellulari, fattori di crescita e composti1-3. A causa di questa complessità, la guarigione delle ferite ...

L'obiettivo generale di questa procedura è utilizzare una spugna di alcol polivinilico per modellare la guarigione delle ferite nei topi. Questo viene ottenuto innanzitutto idratando e caricando la spugna per l'innesto. Successivamente, la spugna viene inserita in una tasca tra il muscolo addominale e la pelle del topo.Dopo l'impianto, ogni spugna può essere iniettata con un trattamento. L'ultimo passaggio consiste nel rimuovere le spugne dal topo. Infine, possono essere eseguite analisi istologiche, colorazioni e saggi quantitativi per osservare modifiche e variazioni nel processo di guarigione della ferita.Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul processo di guarigione delle ferite, può essere applicato anche ad altre aree di studio, come l'angiogenesi tumorale, il rilascio di farmaci e la sopravvivenza delle cellule impiantate. Per iniziare l'innesto, idratare le spugne mediante agitazione notturna in una soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9%. Quindi sottoporre a sterilizzazione in autoclave 75 millilitri della sospensione di spugna idratata per 25 minuti a 121 gradi Celsius.Per sterilizzare le spugne, posizionare la soluzione per spugne in autoclave in una cappa sterile; quindi utilizzare pinze sterili per prendere una spugna, comprimere la spugna con le pinze ed usare una punta da vuoto per rimuovere dalla spugna la maggior quantità possibile di soluzione. A questo punto, posizionare la spugna ben strizzata in una piastra per colture cellulari, avendo cura di lasciare spazio tra le spugne, e pipettare direttamente al centro di ogni spugna la soluzione da applicare. Quindi premere delicatamente sulla spugna con la punta della pipetta per favorire l'assorbimento della soluzione da parte della spugna.Una volta caricati tutti i dischetti, conservare la piastra in ghiaccio fino al momento dell'impianto nei topi. Dopo aver confermato la sedazione mediante il test del riflesso da pizzicotto, posizionare il topo in posizione supina all'interno di un cono nasale. Quindi, utilizzando un rasoio elettrico, rimuovere un'area di peli di dimensioni pari a un pollice quadrato sul lato ventrale inferiore del topo, al di sotto della gabbia toracica.Pulire la zona rimuovendo i capelli tagliati. Sterilizzare l'area rasata con Betadine, seguito da alcol al 70%. Successivamente, tenere la pelle in tensione.Utilizzare il bisturi per praticare un'incisione verticale, una volta e mezza a due volte il diametro delle spugne da inserire, facendo attenzione a non tagliare attraverso la cavità corporea. Utilizzare le pinzette per afferrare il bordo della pelle.Quindi utilizzare forbici di Metzenbaum per separare lentamente la pelle dal muscolo su entrambi i lati dell'incisione. Estendere la tasca lungo tutta la larghezza del topo e dalla gabbia toracica fino alle zampe posteriori. A questo punto, utilizzare la pinzetta per prendere la prima spugna da posizionare nell'animale, afferrandola lateralmente.Quindi trasferire la spugna su una coppia di pinzette dritte in modo che venga tenuta dall'alto e dal basso. Successivamente, afferrare e sollevare il bordo della pelle con un'altra coppia di pinzette ed inserire lentamente la spugna, evitando di toccare la pelle o il muscolo sottostante. Dopo aver inserito tutte le spugne, utilizzare un paio di pinzette per tenere insieme entrambi i lati dell'incisione, quindi far passare il filo di sutura attraverso entrambi gli strati della pelle.Stringere il primo nodo appena sufficiente per chiudere i margini della pelle e completare il nodo quadrato con un altro nodo dalla direzione opposta, questa volta tirando bene il nodo. Quindi annodare altri due nodi quadrati per completare la sutura.Posizionare punti di sutura aggiuntivi per chiudere completamente l'incisione. Infine, rimuovere l'animale dal sistema di anestesia e monitorarlo fino al ripristino della coscienza. Il topo dovrebbe iniziare rapidamente a muoversi e tornare alla mobilità preoperatoria.Cominciare riempiendo una siringa con la soluzione desiderata e attaccare un ago da 28 gauge alla siringa. Dopo aver confermato la sedazione mediante pizzicotto al dito del piede, inserire l'ago nell'animale con un angolo di 45 gradi attraverso la cute al centro delle spugne per assicurarsi che l'ago sia all'interno della spugna. Sollevare lentamente l'ago in posizione verticale.Se l'ago è nella spugna, la spugna si solleverà insieme all'ago. Iniettare quindi lentamente la sostanza nella spugna ed estrarre l'ago. Dopo che l'animale è stato sacrificato, afferrare la pelle con un paio di pinzette ed effettuare un'incisione vicino alla spugna desiderata.Infine, separare con cura le spugne dalla capsula circostante, evitando di prelevare tessuto aggiuntivo intorno alla spugna rimossa. Le spugne possono essere conservate in diverse condizioni a seconda del tipo di analisi che verrà effettuata. Per la sezionatura, le spugne recuperate possono essere incluse in un mezzo di congelamento, come il composto per temperatura di taglio ottimale, oppure collocate in formalina al 10% per l'inclusione e la sezionatura in blocchetti di paraffina, come è stato fatto per queste spugne colorate con ematossilina e eosina.In queste sezioni di spugne trireme colorate, i migliori risultati per il taglio si ottengono quando la spugna viene divisa a metà lungo il diametro, come mostrato qui, e poi inclusa con la superficie tagliata rivolta verso il basso. Come illustrato qui, le sezioni della spugna devono essere effettuate in modo che l'intera larghezza della spugna sia presente in questa figura. La spugna a sinistra è stata inclusa o sezionata in modo errato, come dimostrato dal bordo del tessuto alterato lungo il lato destro della sezione, mentre la spugna integra a destra è stata processata correttamente.Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare, impiantare, iniettare e rimuovere spugne di alcool polivinilico per lo studio della guarigione delle ferite nei topi.

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Il protocollo descrive un nuovo modello murino in vivo di infezione da impianto spinale in cui un impianto k-wire in acciaio inossidabile è infettato da Staphylococcus aureus Xen36 bioluminescente. La carica batterica viene monitorata longitudinalmente con imaging bioluminescente e confermata con la conta delle unità formanti colonie dopo l'eutanasia.

Modello murino in vivo di infezione da impianto spinale

Qui vengono descritti due modelli di guarigione delle ferite murine, uno progettato per valutare le risposte di guarigione della ferita cellulare e citochina e l'altro per quantificare il tasso di chiusura della ferita. Questi metodi possono essere utilizzati con modelli di malattia complessi come il diabete per determinare i meccanismi di vari aspetti della scarsa guarigione delle ferite.

Valutazione della guarigione acuta delle ferite utilizzando l'impianto di spugna alcolica sottocutaneo dorsale e modelli di ferite cutanee della coda excisionali.

I tessuti cardiaci tridimensionali bioingegnerizzati utilizzando cardiomiociti derivati da cellule staminali sono emersi come modelli promettenti per lo studio in vitro del miocardio umano sano e malato, ricapitolando gli aspetti chiave della nicchia cardiaca nativa. Questo manoscritto descrive un protocollo per la fabbricazione e l'analisi di tessuti cardiaci ingegnerizzati ad alto contenuto generati da cardiomiociti derivati da cellule staminali pluripotenti indotte umane.

Progettazione di un bioreattore per migliorare l'acquisizione dei dati e modellare la produttività dei tessuti cardiaci ingegnerizzati

Impara a utilizzare spugne di alcol polivinilico per modellare la guarigione delle ferite nei topi. Questo metodo consente di analizzare trattamenti e processi biologici in vivo con saggi quantitativi e istologici.

L'alcool polivinilico Sponge impianto modello

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