L'alcool polivinilico Sponge impianto modello

L'obiettivo generale di questa procedura è utilizzare una spugna di alcol polivinilico per modellare la guarigione delle ferite nei topi. Questo viene realizzato innanzitutto idratando e caricando la spugna per l'innesto. Successivamente, la spugna viene inserita in una tasca tra il muscolo addominale e la pelle del topo.

Dopo l'innesto, ogni spugna può essere iniettata con un trattamento. L'ultimo passaggio consiste nel rimuovere le spugne dal topo. Infine, possono essere eseguite colorazioni istologiche, sezionamenti e saggi quantitativi per osservare modifiche e variazioni nel processo di guarigione della ferita.

Sebbene questo metodo possa fornire informazioni sul processo di guarigione delle ferite, può essere applicato anche ad altre aree di studio, come l'angiogenesi tumorale, il rilascio di farmaci e la sopravvivenza di cellule impiantate. Per iniziare il trapianto, idratare le spugne mediante agitazione notturna in una soluzione acquosa di cloruro di sodio allo 0,9%. Successivamente, sterilizzare in autoclave 75 millilitri della sospensione di spugne idratate per 25 minuti a 121 gradi Celsius.

Per sterilizzare le spugne, posizionare la soluzione per spugne per autoclave in una cappa sterile e quindi utilizzare pinzette sterili per prendere una spugna, comprimere la spugna con le pinzette ed usare una punta da vuoto per rimuovere dalla spugna la maggior quantità possibile di soluzione. A questo punto, posizionare la spugna sgocciolata in una piastra per colture cellulari, avendo cura di lasciare spazio tra le spugne, e pipettare direttamente al centro di una spugna la soluzione da trattamento. Quindi premere delicatamente sulla spugna con la punta della pipetta per favorire l'assorbimento della soluzione da parte della spugna.

Dopo aver caricato tutte le spugne, conservare la piastra sul ghiaccio fino al momento dell'impianto delle spugne nel topo. Dopo aver confermato la sedazione mediante il test del riflesso da pizzicamento, posizionare il topo in posizione supina all'interno di un cono nasale. Quindi, utilizzando un rasoio elettrico, rimuovere un'area di peli di un pollice per un pollice sul lato ventrale inferiore del topo, al di sotto della gabbia toracica.

Pulire l'area rimuovendo i peli tagliati. Sterilizzare l'area rasata con Betadine, seguito da alcol al 70%. Successivamente, tenere la pelle in tensione.

Usare il bisturi per praticare un'incisione verticale, una volta e mezza a due volte il diametro delle spugne da inserire, avendo cura di non tagliare attraverso la cavità corporea. Utilizzare le pinzette per afferrare il bordo della pelle.

Quindi utilizzare forbici Metzenbaum per separare lentamente la pelle dal muscolo su entrambi i lati dell'incisione. Estendere la tasca lungo tutta la larghezza del topo e dalla gabbia toracica fino alle zampe posteriori. Ora, utilizzare la pinzetta per prendere la prima spugna da posizionare nell'animale, afferrandola lateralmente.

Quindi trasferire la spugna su una pinzetta dritta in modo che venga tenuta dalla parte superiore e inferiore. Successivamente, afferrare e sollevare il bordo della pelle con un'altra pinzetta ed inserire lentamente la spugna, evitando di toccare la pelle o il muscolo sottostante. Una volta inserite tutte le spugne, utilizzare una pinzetta per tenere insieme entrambi i lati dell'incisione e quindi passare il filo di sutura attraverso entrambi gli strati della pelle.

Stringere il primo nodo appena sufficiente per chiudere i margini della cute e completare il nodo quadrato con un altro passaggio dal lato opposto, questa volta tirando bene il nodo. Quindi annodare altri due nodi quadrati per completare la sutura.

Posizionare punti di sutura aggiuntivi per chiudere completamente l'incisione. Infine, rimuovere l'animale dal sistema di anestesia e monitorarlo fino al ripristino della coscienza. Il topo dovrebbe iniziare rapidamente a muoversi e tornare alla mobilità preoperatoria.

Iniziare riempiendo una siringa con la soluzione desiderata e applicare un ago da 28 gauge alla siringa. Dopo aver confermato la sedazione mediante pizzicamento del dito del piede, inserire l'ago nell'animale con un angolo di 45 gradi attraverso la cute al centro delle spugne per assicurarsi che l'ago sia all'interno della spugna. Sollevare lentamente l'ago in posizione verticale.

Se l'ago è nella spugna, la spugna si solleverà insieme all'ago. Iniettare quindi lentamente la sostanza nella spugna ed estrarre l'ago. Dopo aver sacrificato l'animale, afferrare la pelle con un paio di pinzette ed effettuare un'incisione vicino alla spugna desiderata.

Infine, separare con attenzione le spugne dalla capsula circostante, evitando di raccogliere tessuto aggiuntivo intorno alla spugna rimossa. Le spugne possono essere conservate in diverse condizioni a seconda del tipo di analisi che verrà effettuata. Per la sezionatura, le spugne recuperate possono essere incluse in un mezzo congelante, come il composto ottimale per la temperatura di taglio, oppure collocate in formalina al 10% per l'inclusione e la sezionatura in blocchi di paraffina, come è stato fatto per queste spugne colorate con ematossilina ed eosina.

E in queste sezioni di spugne colorate di trireme, i migliori risultati per la sezionatura si ottengono quando la spugna viene tagliata a metà lungo il diametro, come mostrato qui, e poi inclusa con la superficie di taglio rivolta verso il basso. Come dimostrato qui, le sezioni della spugna devono essere effettuate in modo che l'intera larghezza della spugna sia presente in questa figura. La spugna a sinistra è stata inclusa o sezionata in modo errato, come dimostrato dal bordo del tessuto alterato lungo il lato destro della sezione, mentre la spugna integra a destra è stata processata correttamente.

Dopo aver visionato questo video, dovresti avere una buona comprensione di come preparare, impiantare, iniettare e rimuovere spugne di alcol polivinilico per studiare la guarigione delle ferite nei topi.