Name: Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-02-21T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 16 s
Description: Impara a raccogliere emolinfa, ghiandole salivari e saliva da zecche Ixodes scapularis in alimentazione attiva. Questo metodo consente di studiare patogeni trasmessi dalle zecche e le loro interazioni.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Gli autori desiderano ringraziare la Divisione di Vector-Borne Diseases Branch Animal Resources, in particolare Andrea Peterson, Lisa Massoudi, Verna O&#39;Brien e John Liddell per la loro cura e manutenzione dei topi e conigli. Vorremmo anche ringraziare Amy Ullmann, Theresa Russell, e Barbara J. Johnson per il loro contributo verso questo manoscritto. Infine, vorremmo riconoscere Alissa Eckert presso l&#39;Ufficio del Direttore Associato per la Comunicazione presso il CDC per la produzione di illustrazioni grafiche e Judy Lavelle per dirigere tutti gli aspetti legali connessi con le riprese di questo manoscritto.

1. Raccolta emolinfa per preparazione del vetrino (Movie 1) <ol><li> Delicatamente rimuovere attivamente zecche alimentazione da un animale e posto in 3% di perossido di idrogeno topico per 5 minuti e poi in etanolo 70% per 10 minuti per sterilizzare superficie. </li><li> Con una penna pap disegnare un cerchio su un vetrino da microscopio silano rivestito e mettere il segno di spunta all&#39;interno del cerchio penna pap. <ol><li> Silano vetrini rivestiti vengono utilizzati per la migliore aderenza del emolinfa al vetrino da microscopio. </li></ol></li><li> Mostra il segno di spunta sotto un microscopio da dissezione (1X obiettivo, oculare 10X, ingrandimento 3,5 x). </li><li> Premere delicatamente sul dorso della zecca con una pinzetta per le gambe splay della zecca e immobilizzare il segno di spunta. </li></ol> Nota: Quando immobilizzare il segno di spunta non premere troppo forte perché questo può disturbare la midgut o forare il segno di spunta e contaminare l&#39;emolinfa. <ol start="5"><li> Amputare la gamba della zecca o gambe °e giunto distale con una punta sottile bisturi monouso. Per determinare l&#39;infettività via emolinfa solo 1 gamba deve essere amputata. Per la raccolta di emolinfa su un vetrino da più segmenti possono essere amputata. </li></ol> Nota: Non tagliare la gamba troppo vicino al corpo, poiché ciò potrebbe causare la contaminazione del midgut emolinfa. <ol start="6"><li> Dopo la tappa o le gambe sono tagliate continuare ad applicare delicatamente pressione dorso della zecca per la emolinfa di secernere fuori le gambe sul vetrino. Muovete il segno di spunta intorno sulla diapositiva per diffondere la emolinfa. </li></ol> 2. La rimozione della ghiandola salivare (Film 2 &amp; 3) <ol><li> Spot più 25 piscine microlitri di tampone fosfato (PBS) su un vetrino da microscopio e mettere un segno di spunta in una delle piscine PBS. </li><li> Mostra il segno di spunta sotto un microscopio da dissezione (1X obiettivo, oculare 10X, ingrandimento 3,5 x). </li><li> Stabilizzare la zecca con pinza a punta sottiles tenendo la base capitulum (apparato boccale) o la parte posteriore della zecca. </li><li> Inserire le pinze belle punte nella parte posteriore della zecca e tagliare la zecca dorso per esporre gli organi. Se desiderato il midgut può essere rimosso in questo momento e trasferito a un pool di PBS fresco su un vetrino da microscopio o una provetta da microcentrifuga contenente PBS. </li><li> Trova la coppia di ghiandole salivari (grappoli) situati bilateralmente lungo le gambe della zecca. Se le ghiandole salivari non sono visibili tra le macerie spunta spostare la parte principale segno di spunta, contenente ancora le ghiandole salivari, a un pool fresco di PBS per ridurre la rottura e la perdita delle ghiandole salivari. </li></ol> Nota: precedenti in una alimentazione, le ghiandole salivari sono più difficili da individuare perché non sono come sviluppato rispetto a seguito in alimentazione. <ol start="6"><li> Rimuovere le ghiandole salivari della zecca con una pinza a punta fine e posto in una piscina fresca di PBS. </li><li> With bella mancia pinza trasferire le ghiandole salivari a un altro pulito piscina di 25 microlitri di PBS, ripetere questo passaggio di lavaggio 3-4 volte di più per eliminare eventuali microrganismi esterni e detriti tick. </li></ol> Nota: Lavare i grappoli delle ghiandole salivari delicatamente per ridurre la perdita e la rottura delle singole ghiandole salivari. <ol start="8"><li> Mettere le ghiandole in una piscina pulita di PBS in una diapositiva silano rivestito o in una provetta da microcentrifuga contenente PBS. </li></ol> 3. Saliva di raccolta (Movie 4) <ol><li> Rimuovere delicatamente le zecche femmine adulte dal coniglio o di un altro host utilizzando una pinza a punta fine poco prima di cadere completamente off ingorgati, i giorni circa 5-7 post-attacco. </li><li> Rispettare il segno di spunta quasi engorged su un&#39;estremità di un vetrino da microscopio con lo scotch. Il nastro deve essere posizionato a circa ¾ della salita dorso della zecca verso la testa, lasciando capitulum base della zecca (apparato boccale) esposta.</li><li> Quando il nastro incontra il bordo anteriore della superficie dorsale pipetta zecche 5 pl di soluzione di pilocarpina 5% (in metanolo). Lasciare che il nastro stoppino della pilocarpina sul dorso di zecca, senza che il pilocarpina a venire in contatto con capitulum base della zecca. </li><li> Montare un pezzo di non-tossico plastilina sul vetrino di circa un pollice dal boccale della zecca. </li><li> Utilizzando belle pinze punta rompere la punta di un tubo capillare tirato 28 al diametro desiderato. </li><li> Visualizza capitulum base della zecca sotto un microscopio da dissezione. </li><li> Inserire delicatamente ipostoma della zecca nel tubo capillare tirato permettendo ai palpi mascellari di risiedere al di fuori del tubo capillare. </li><li> Premere l&#39;estremità opposta del tubo capillare nel plastilina per tenere il tubo capillare in posizione. </li><li> Mettere il segno di spunta montato la salivazione all&#39;interno di una camera oscura con umidità elevata (ad esempio, una scatola con coperchio di polistirolo rivestiti con pap bagnato<html> asciugamani er). Inclinare il vetrino in modo i punti ipostoma al fondo del contenitore, permettendo la gravità per aiutare nella saliva raccolta. </li><li> Posizionare il recipiente a temperatura ambiente. </li><li> Monitorare attentamente le zecche acquolina in bocca per la prima ora, e raccogliere la saliva in quanto è generato da espellendo fuori dei tubi capillari con una lampadina pipetta Pasteur. Dopo la prima ora, controllare accumulo ogni ora per almeno 4 ore. Continua a raccogliere la saliva come viene generato. </li></ol> Nota: l&#39;acquisizione di saliva può essere fermata una volta abbastanza saliva viene raccolto per lo studio in corso di esecuzione. <ol start="12"><li> Se le zecche non sono la salivazione o se più saliva è necessario, salivazione può occasionalmente essere indotta tramite il tubo capillare per massaggiare il ipostoma. </li><li> Aggiungere 0,1 volumi di cocktail inibitore di proteasi per la saliva e conservare a -80 ° C fino a quando necessario. </li></ol> 4. Risultati rappresentativi e_content &quot;Movie&gt; 1 dimostra come tenere una ninfa parzialmente alimentato I. scapularis e amputare le gambe per raccogliere emolinfa su un vetrino da microscopio. Una volta che la gamba o gambe amputate un liquido chiaro viene secreto (figura 1A e 1B). Se il midgut si rompe la emolinfa appare torbido come è esce l&#39;arto (s) (figura 1C e 1D). L&#39;estrazione delle ghiandole salivari dopo la ninfa è stata l&#39;alimentazione per 48 o 72 ore è dimostrato nei film 2 e 3. Dopo il segno di spunta viene forato vi è generalmente un sacco di detriti (composto da trachea, Malpighi tubuli, sangue, tessuto connettivo, ecc), per prevenire la perdita o distruzione delle ghiandole salivari spostare il segno di spunta a un pool fresco di PBS. Le figure 2A e 2B mostrano dove si trovano le ghiandole salivari dopo che la ninfa è stato tagliato aperto e la figura 2C mostra rimosso cluster delle ghiandole salivari in una pozza di PBS. Saliva la raccolta istituito dalla I. femmine adulte scapularis i<html> s mostrato in film 4 e figura 3. Un segno di spunta la salivazione in un tubo capillare si osserva nel film 5. Questo metodo di raccolta saliva pilocarpina utilizzato per stimolare la salivazione e può produrre più di 20 pl di saliva per adulto tick femmina. <img alt="Figura 1." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig1.jpg" /> Figura 1. Strutture etichetta di una ninfa scapularis I.. Movie 1. Raccolta emolinfa Ixodes scapularis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie1.avi">Clicca qui per guardare film</a> . <img alt="Figura 2." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig2.jpg" /> Figura 2. Incontaminata (A &amp; B) e contaminati (C &amp; D) emolinfa che trasuda dalla gamba della ninfa. Movie 2. L&#39;estrazione della ghiandola salivare da una 48 ore Fed I. ninfa scapularis.pload/3894/3894movie2.avi &quot;&gt; Clicca qui per guardare film. Movie 3. L&#39;estrazione della ghiandola salivare di 72 ore da un nutrito I. ninfa scapularis. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie3.avi">Clicca qui per guardare film</a> . <img alt="Figura 3." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig3.jpg" /> Figura 3. Ixodes scapularis ninfa ghiandole salivari. (A &amp; B) Esempi di ghiandole salivari di una 72 ore alimentato ninfa, prima dell&#39;estrazione. (C) Rimosso cluster di ghiandola salivare. Saliva Movie 4. Di raccolta istituiti a da un adulto I. scapularis tick femminile. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie4.avi">Clicca qui per guardare film</a> . <img alt="Figura 4." src="/files/ftp_upload/3894/3894fig4.jpg" /> Figura 4. Prelievo della saliva da adulto I. scapularis t femminiliicks. (A e B) Spuntare montato su una slitta con ipostoma alla fine tirato del tubo capillare con l&#39;estremità unpulled del tubo capillare tenuto da plastilina. (C &amp; D) camera umidificata contenente la salivazione adulti I. scapularis zecche femminili. Movie 5. Scapularis zecche Ixodes femminile acquolina in bocca in un tubo capillare. <a href="https://www.jove.com/files/ftp_upload/3894/3894movie5.avi">Clicca qui per guardare film</a> .

<ol><li>Quach, K. A., Boctor, F. N., Elston, D. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((What%27s+eating+you%3F+Hyalomma+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Cutis%22%5BJournal%5D)">What's eating you? Hyalomma ticks.</a> Cutis. 87, 165-167 (2011).</li>
<li>Graham, J., Stockley, K., Goldman, R. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+illnesses%3A+a+CME+update%5BTitle%5D)+AND+%22Pediatr.+Emerg.+Care%22%5BJournal%5D)">Tick-borne illnesses: a CME update.</a> Pediatr. Emerg. Care. 27, 141-147 (2011).</li>
<li>Nuttall, P. A., Paesen, G. C., Lawrie, C. H., Wang, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Vector-host+interactions+in+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Mol.+Microbiol.+Biotechnol%22%5BJournal%5D)">Vector-host interactions in disease transmission.</a> J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2, 381-386 (2000).</li>
<li>Estrada-Pena, A., Jongejan, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Ticks+feeding+on+humans%3A+a+review+of+records+on+human-biting+Ixodoidea+with+special+reference+to+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Ticks feeding on humans: a review of records on human-biting Ixodoidea with special reference to pathogen transmission.</a> Exp. Appl. Acarol. 23, 685-715 (1999).</li>
<li>Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Pathogen-tick-host+interactions%3A+Borrelia+burgdorferi+and+TBE+virus%5BTitle%5D)+AND+%22Zentralbl+Bakteriol%22%5BJournal%5D)">Pathogen-tick-host interactions: Borrelia burgdorferi and TBE virus.</a> Zentralbl Bakteriol. 289, 492-505 (1999).</li>
<li>Jones, L. D., Hodgson, E., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+virus+transmission+by+tick+salivary+glands%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Virol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of virus transmission by tick salivary glands.</a> J. Gen. Virol. 70, 1895-1898 (1989).</li>
<li>Labuda, M., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-borne+viruses%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-borne viruses.</a> Parasitol. 129, 221-245 (2004).</li>
<li>Socolovschi, C., Mediannikov, O., Raoult, D., Parola, P. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Update+on+tick-borne+bacterial+diseases+in+Europe%5BTitle%5D)+AND+%22Parasite%22%5BJournal%5D)">Update on tick-borne bacterial diseases in Europe.</a> Parasite. 16, 259-273 (2009).</li>
<li>Zhang, L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+Interactions+that+Enable+Movement+of+the+Lyme+Disease+Agent+from+the+Tick+Gut+into+the+Hemolymph%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Pathog%22%5BJournal%5D)">Molecular Interactions that Enable Movement of the Lyme Disease Agent from the Tick Gut into the Hemolymph.</a> PLoS Pathog. 7, e1002079(2011).</li>
<li>Piesman, J., Schneider, B. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dynamic+changes+in+Lyme+disease+spirochetes+during+transmission+by+nymphal+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Dynamic changes in Lyme disease spirochetes during transmission by nymphal ticks.</a> Exp. Appl. Acarol. 28, 141-145 (2002).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+immunobiology%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick immunobiology.</a> Parasitol. , Suppl 129. S161-S176 (2004).</li>
<li>Machackova, M., Obornik, M., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+salivary+gland+extract+from+Ixodes+ricinus+ticks+on+the+proliferation+of+Borrelia+burgdorferi+sensu+stricto+in+vivo%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Effect of salivary gland extract from Ixodes ricinus ticks on the proliferation of Borrelia burgdorferi sensu stricto in vivo.</a> Folia Parasitol. 53, 153-158 (2006).</li>
<li>Nuttall, P. A., Labuda, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host+interactions%3A+saliva-activated+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host interactions: saliva-activated transmission.</a> Parasitol. 129, 177-189 (2004).</li>
<li>Anguita, J., Hedrick, M. N., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+of+Borrelia+burgdorferi+in+the+tick+and+the+mammalian+host%5BTitle%5D)+AND+%22FEMS+Microbiol.+Rev%22%5BJournal%5D)">Adaptation of Borrelia burgdorferi in the tick and the mammalian host.</a> FEMS Microbiol. Rev. 27, 493-504 (2003).</li>
<li>Hovius, J. W., van Dam, A. P., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick-host-pathogen+interactions+in+Lyme+borreliosis%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick-host-pathogen interactions in Lyme borreliosis.</a> Trends Parasitol. 23, 434-438 (2007).</li>
<li>Dunham-Ems, S. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Live+imaging+reveals+a+biphasic+mode+of+dissemination+of+Borrelia+burgdorferi+within+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Journal+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Live imaging reveals a biphasic mode of dissemination of Borrelia burgdorferi within ticks.</a> Journal Clin. Invest. 119, 3652-3665 (2009).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Mather, T. N., Piesman, J., Spielman, A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dissemination+and+salivary+delivery+of+Lyme+disease+spirochetes+in+vector+ticks+%28Acari%3A+Ixodidae%29%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Dissemination and salivary delivery of Lyme disease spirochetes in vector ticks (Acari: Ixodidae).</a> J. Med. Entomol. 24, 201-205 (1987).</li>
<li>Piesman, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transmission+of+Lyme+disease+spirochetes+%28Borrelia+burgdorferi%5BTitle%5D)+AND+%22Exp.+Appl.+Acarol%22%5BJournal%5D)">Transmission of Lyme disease spirochetes (Borrelia burgdorferi.</a> Exp. Appl. Acarol. 7, 71-80 (1989).</li>
<li>De Silva, A. M., Fikrig, E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+and+migration+of+Borrelia+burgdorferi+in+Ixodes+ticks+during+blood+feeding%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Growth and migration of Borrelia burgdorferi in Ixodes ticks during blood feeding.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 53, 397-404 (1995).</li>
<li>Horka, H., Cerna-Kyckova, K., Skallova, A., Kopecky, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+affects+both+proliferation+and+distribution+of+Borrelia+burgdorferi+spirochetes+in+mouse+organs+and+increases+transmission+of+spirochetes+to+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Med.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Tick saliva affects both proliferation and distribution of Borrelia burgdorferi spirochetes in mouse organs and increases transmission of spirochetes to ticks.</a> Int. J. Med. Microbiol. 299, 373-380 (2009).</li>
<li>Brossard, M., Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Immunology+of+interactions+between+ticks+and+hosts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Immunology of interactions between ticks and hosts.</a> Med. Vet. Entomol. 11, 270-276 (1997).</li>
<li>Wikel, S. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+modulation+of+host+immunity%3A+an+important+factor+in+pathogen+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Int.+J.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Tick modulation of host immunity: an important factor in pathogen transmission.</a> Int. J. Parasitol. 29 (99), 851-859 (1999).</li>
<li>Binnington, K. C., Kemp, D. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Role+of+tick+salivary+glands+in+feeding+and+disease+transmission%5BTitle%5D)+AND+%22Adv.+Parasitol%22%5BJournal%5D)">Role of tick salivary glands in feeding and disease transmission.</a> Adv. Parasitol. 18, 315-339 (1980).</li>
<li>Guo, X., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Inhibition+of+neutrophil+function+by+two+tick+salivary+proteins%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Inhibition of neutrophil function by two tick salivary proteins.</a> Infect. Immun. 77, 2320-2329 (2009).</li>
<li>Montgomery, R. R., Lusitani, D., De Boisfleury Chevance, A., Malawista, S. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Tick+saliva+reduces+adherence+and+area+of+human+neutrophils%5BTitle%5D)+AND+%22Infect.+Immun%22%5BJournal%5D)">Tick saliva reduces adherence and area of human neutrophils.</a> Infect. Immun. 72, 2989-2994 (2004).</li>
<li>Lima, C. M., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Differential+infectivity+of+the+Lyme+disease+spirochete+Borrelia+burgdorferi+derived+from+Ixodes+scapularis+salivary+glands+and+midgut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Differential infectivity of the Lyme disease spirochete Borrelia burgdorferi derived from Ixodes scapularis salivary glands and midgut.</a> J. Med. Entomol. 42, 506-510 (2005).</li>
<li>Severinova, J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Co-inoculation+of+Borrelia+afzelii+with+tick+salivary+gland+extract+influences+distribution+of+immunocompetent+cells+in+the+skin+and+lymph+nodes+of+mice%5BTitle%5D)+AND+%22Folia+Microbiol%22%5BJournal%5D)">Co-inoculation of Borrelia afzelii with tick salivary gland extract influences distribution of immunocompetent cells in the skin and lymph nodes of mice.</a> Folia Microbiol. 50, 457-463 (2005).</li>
<li>How to pull capillary tubes [Internet]. , benchflydotcom. Available from: 
 <a target="_blank" href="http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM">http://www.youtube.com/watch?v=2yKHvKCatmM</a> (2009).</li>
<li>Labuda, M., Jones, L. D., Williams, T., Nuttall, P. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Enhancement+of+tick-borne+encephalitis+virus+transmission+by+tick+salivary+gland+extracts%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Enhancement of tick-borne encephalitis virus transmission by tick salivary gland extracts.</a> Med. Vet. Entomol. 7, 193-196 (1993).</li>
<li>Kariu, T., Coleman, A. S., Anderson, J. F., Pal, U. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Methods+for+Rapid+Transfer+and+Localization+of+Lyme+Disease+Pathogens+Within+the+Tick+Gut%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Methods for Rapid Transfer and Localization of Lyme Disease Pathogens Within the Tick Gut.</a> J. Vis. Exp. (48), e2544(2011).</li>
<li>Edwards, K. T., Goddard, J., Varela-Stokes, A. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Examination+of+the+internal+morphology+of+the+Ixodid+tick+Amblyomma+maculatum+koch%2C+%28Acari%3AIxodidae%29%3B+a+%22How-to%22+pictorial+dissection+guide%5BTitle%5D)+AND+%22Midsouth+Entomologist%22%5BJournal%5D)">Examination of the internal morphology of the Ixodid tick Amblyomma maculatum koch, (Acari:Ixodidae); a "How-to" pictorial dissection guide.</a> Midsouth Entomologist. 2, 28-39 (2009).</li>
<li>Ledin, K. E., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Borreliacidal+activity+of+saliva+of+the+tick+Amblyomma+americanum%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Borreliacidal activity of saliva of the tick Amblyomma americanum.</a> Med. Vet. Entomol. 19, 90-95 (2005).</li>
<li>Ribeiro, J. M., Zeidner, N. S., Ledin, K., Dolan, M. C., Mather, T. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((How+much+pilocarpine+contaminates+pilocarpine-induced+tick+saliva%3F%5BTitle%5D)+AND+%22Med.+Vet.+Entomol%22%5BJournal%5D)">How much pilocarpine contaminates pilocarpine-induced tick saliva?</a> Med. Vet. Entomol. 18, 20-24 (2004).</li>
<li>Barker, R. W., Burris, E., Sauer, J. R., Hair, J. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Composition+of+tick+oral+secretions+obtained+by+three+different+collection+methods%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Med.+Entomol%22%5BJournal%5D)">Composition of tick oral secretions obtained by three different collection methods.</a> J. Med. Entomol. 10, 198-201 (1973).</li>
<li>Burgdorfer, W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hemolymph+test.+A+technique+for+detection+of+rickettsiae+in+ticks%5BTitle%5D)+AND+%22Am.+J.+Trop.+Med.+Hyg%22%5BJournal%5D)">Hemolymph test. A technique for detection of rickettsiae in ticks.</a> Am. J. Trop. Med. Hyg. 19, 1010-1014 (1970).</li>
</ol>

Non abbiamo nulla da rivelare.

La raccolta di emolinfa tick, ghiandole salivari, e la saliva è importante nello studio delle zecche trasmissione dei patogeni, la prevalenza, la diffusione, la proliferazione, e la persistenza sia il segno di spunta e l&#39;host 6,11-13,20,23,29. Ci sono diversi modi per sezionare un segno di spunta 30,31. Tuttavia, quando la raccolta delle ghiandole salivari è fondamentale per analizzare correttamente il segno di spunta in modo che le ghiandole salivari non sono rotti o persi nei resti della zecc...

<table border="1"><tbody><tr><td> Reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Il perossido di idrogeno </td><td> Pescatore </td><td> H312-500 </td></tr><tr><td> Etanolo </td><td> Acros </td><td> 61509-5000 </td></tr><tr><td> PBS </td><td> Boston Bioproducts </td><td> BM-2205 </td></tr><tr><td> Dumont fine pinza (3C) </td><td> Pescatore </td><td> NC9906085 </td></tr><tr><td> Silano vetrini da microscopio trattati </td><td> Bioworld </td><td> 42763007-1 </td></tr><tr><td> Pap penna </td><td> Bioworld </td><td> 21750008-1 </td></tr><tr><td> Super gelo più vetrini da microscopio </td><td> Pescatore </td><td> 12-550-18 </td></tr><tr><td> Pilocarpine </td><td> Sigma </td><td> P6503-5G </td></tr><tr><td> Cocktail di inibitori della proteasi </td><td> Sigma </td><td> P2714 </td></tr><tr><td> # 11 monouso bisturi </td><td> Piuma </td><td> 2975 # 11 </td></tr><tr><td> Modellare l&#39;argilla non tossico </td><td&gt; Fisher </td><td> S17307 </td></tr><tr><td> Tubi capillari </td><td> Chase scientifica Glass, inc </td><td> 40A502 </td></tr></tbody></table>

saliva, le ghiandole salivari, e collection emolinfa dalle zecche ixodes scapularis

Saliva, Salivary Gland, and Hemolymph Collection from Ixodes scapularis Ticks

Le zecche sono presenti in tutto il mondo e di affliggere gli esseri umani con molte malattie trasmesse da zecche. Le zecche sono vettori di agenti patogeni che causano la malattia di Lyme e zecche febbre ricorrente (Borrelia spp.), Febbre delle Montagne Rocciose (Rickettsia rickettsii), ehrlichiosi (Ehrlichia chaffeensis e E. equi), anaplasmosi (Anaplasma phagocytophilum), encefalite (tick- virus dell&#39;encefalite Borne), babesiosi (Babesia spp.), febbre tick Colorado (Coltivirus), e la tularemia (Francisella tularensis) 1-8. Per essere correttamente trasmessi nell&#39;ospite questi agenti infettivi differenziale regolare l&#39;espressione genica, interagiscono con le proteine ​​zecca, e migrano attraverso il segno di spunta 3,9-13. Ad esempio, l&#39;agente della malattia di Lyme, Borrelia burgdorferi, si adatta attraverso l&#39;espressione genica differenziale alle fasi festa e la carestia del ciclo di leucosi della zecca 14,15. Inoltre, come una zecca Ixodes consumafarina di sangue Borrelia replicarsi e migrare dal midgut nel hemocoel, dove si spostano per le ghiandole salivari e vengono trasmessi nell&#39;ospite con la saliva espulsi 9,16-19. Come un segno di spunta alimenta l&#39;host risponde in genere con una forte risposta immunitaria innata emostatico e 11,13,20-22. Nonostante queste risposte di accoglienza, I. scapularis può alimentare per diversi giorni, perché la saliva tick contiene proteine ​​che sono immunomodulatori, agenti litici, anticoagulanti e fibrinolysins per aiutare il segno di spunta di alimentazione 3,11,20,21,23. Le attività immunomodulanti possedute dal saliva tick o estratti di ghiandola salivare (SGE) facilitare la trasmissione, la proliferazione e la diffusione di numerose zecche patogeni 3,20,24-27. Per capire meglio come zecche agenti infettivi causare la malattia è indispensabile analizzare attivamente l&#39;alimentazione zecche e raccogliere la saliva tick. Questo protocollo video mostra tecniche di dissezione perla raccolta di emolinfa e la rimozione delle ghiandole salivari da attivamente alimentazione I. ninfe scapularis dopo 48 e 72 ore dopo il posizionamento del mouse. Dimostriamo anche il prelievo della saliva da una femmina adulta I. scapularis tick.

La raccolta di emolinfa zecca infetta, ghiandole salivari, e la saliva è importante studiare come zecche patogeni causare la malattia. In questo protocollo si dimostra come raccogliere emolinfa ghiandole salivari e di nutrirsi<em&gt; Ixodes scapularis</em&gt; Ninfe. Dimostriamo anche il prelievo della saliva da femmina<em&gt; I. scapularis</em&gt; Adulti.

Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis

Le zecche sono presenti in tutto il mondo e colpiscono l'essere umano con numerose malattie trasmesse da zecca. Le zecche sono vettori di agenti patogeni che causano la malattia di Lyme e altre patologie trasmesse da zecca...

L'obiettivo generale di questa procedura è raccogliere zampe, emo linfatico, ghiandole salivari e saliva da zecche di Ixodes scapularis in fase di alimentazione attiva. Questo viene ottenuto innanzitutto amputando la zampa della zecca all'articolazione distale per espellere l'emo linfatico. Successivamente, le ghiandole salivari vengono raccolte sezionando la zecca in soluzione salina tamponata al fosfato, localizzando le ghiandole salivari e trasferendole in un nuovo pool di PBS.La saliva viene raccolta applicando pilocarpina sul dorso della zecca, inserendo l'ome della zecca in un capillare contenente un liquido raccolto in pool e lasciando che la zecca salivi nel tubo. Alla fine, si possono ottenere risultati che mostrano i microorganismi presenti nell'emolinfa o nelle ghiandole salivari mediante immunofluorescenza o proteine. Interazioni proteiche con proteine salivari, tra gli altri risultati.Generalmente, le persone alle prime armi con il prelievo di emo linfa incontreranno difficoltà perché è complicato immobilizzare la zecca senza rompere l'intestino medio, il che porterebbe a contaminare l'emo linfa. Generalmente, si possono riscontrare difficoltà anche con il prelievo di

saliva-salivary-gland-hemolymph-collection-from-ixodes-scapularis

Research

Ricerca

JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

La malattia di Lyme è la più comunemente riportati vector-borne malattia in Nord America. L'agente eziologico, Borrelia burgdorferi è un batterio spirocheta trasmessa da zecche ixodid. Trasmissione e rilevamento di un'infezione in modelli animali è ottimizzata dall'utilizzo di alimentazione tick, che descriveremo qui.

Alimentazione di zecche su animali per trasmissione e Xenodiagnosis a Lyme Disease Research

La produzione di zecche allevate in laboratorio sano è essenziale per gli studi di biologia tick, tick e-patogeno interazioni. Qui mostriamo un semplice protocollo per l'alimentazione tick immaturo che è costo-efficace e meno stressante per i topi.

impennata<em&gt; Ixodes scapularis,</em&gt; Il Tick Black-legged: Alimentazione stadi immaturi sui topi

L'analisi di tick emolinfa rappresenta un'importante fonte di informazioni su come alcuni patogeni causano malattie e come le zecche rispondono immunologicamente a questa infezione. Il presente studio dimostra come inoculare propagule fungine e raccogliere emolinfa da Rhipicephalus MicroPlus femmine gonfio.

Rivelare la raccolta di hemolymph e l'inoculo di Metarhizium blastospores in Rhipicephalus MicroPlus zecche verso gli studi di patologia degli invertebrati

In questo studio, un sistema di alimentazione per le fasi ninfe e larval di zecca dura è stato sviluppato utilizzando una capsula attaccata al topo di laboratorio. La capsula di alimentazione è realizzata con materiali flessibili e rimane saldamente attaccata al mouse per almeno una settimana e consente un comodo monitoraggio dell'alimentazione delle zecche.

Un modello basato su capsule per l'infestazione di fasi di zecche dure immature su topi di laboratorio

Il presente protocollo descrive l'isolamento dei microRNA dalle ghiandole salivari delle zecche e dalle vescicole extracellulari purificate. Questa è una procedura universale che combina reagenti e forniture comunemente usati. Il metodo consente anche l'uso di un piccolo numero di zecche, con conseguente microRNA di qualità che possono essere facilmente sequenziati.

Isolamento di microRNA da colture di ghiandole salivari Tick Ex Vivo e vescicole extracellulari

Presentato qui è un metodo per alimentare le zecche in vitro tramite un sistema di membrana artificiale per consentire l'ingorgo parziale o totale di una varietà di fasi di vita delle zecche.

Alimentazione a membrana artificiale di zecche per Ixodes scapularis

Descriviamo un metodo per raccogliere in modo efficiente l'emolinfa quantificabile da piccoli artropodi per analisi successive.

Un metodo preciso e quantificabile per raccogliere emolinfa da piccoli artropodi

Questo articolo presenta la metodologia per esporre l'uomo alla larva di Ixodes scapularis per la ricerca clinica. La tecnica è relativamente semplice, tollerabile dai volontari della ricerca e può essere modificata in base alle esigenze sperimentali. Tale ricerca che coinvolge soggetti umani deve essere condotta secondo protocolli di studio clinico approvati dalle autorità regolatorie competenti.

Un modello per l'esposizione sperimentale dell'uomo alle zecche larvali di Ixodes scapularis

Qui, presentiamo un protocollo per raccogliere saliva, emolinfa, ghiandole salivari e intestino medio, dopo la dissezione di una zecca nutrita individualmente, per studiare la localizzazione tessuto-specifica dei patogeni trasmessi dalle zecche per migliorare la comprensione della competenza del vettore e delle interazioni patogeno-microbioma.

Estrazione di saliva, emolinfa, ghiandole salivari e intestino medio da singole zecche (Acari: Ixodidae)

Questo metodo delinea lo sviluppo di un sistema di alimentazione del sangue con zecche in vitro che incorpora una camera stampata in 3D e una membrana in silicone fabbricata in laboratorio. Il sistema consente l'alimentazione artificiale delle zecche, consentendo un facile campionamento in varie fasi di alimentazione e utilizzando bassi volumi di sangue, fornendo uno strumento prezioso per studiare le zecche ixodidi.

Sangue di zecca che si alimenta attraverso una membrana artificiale su una camera stampata in 3D nella ricerca sulle zecche Ixodid

Impara a raccogliere emolinfa, ghiandole salivari e saliva da zecche Ixodes scapularis in alimentazione attiva. Questo metodo consente di studiare patogeni trasmessi dalle zecche e le loro interazioni.

Saliva, le ghiandole salivari, e Collection emolinfa dalle zecche Ixodes scapularis

Esplora altri video