Do-It-Yourself dispositivo per il recupero di campioni crioconservati cadere accidentalmente nelle cisterne criogeniche

L'obiettivo di questa procedura è quello di facilitare il recupero dei campioni in scatole criogeniche e fiale criogeniche da serbatoi doppi riempiti con azoto liquido utilizzando un dispositivo facile da costruire. Ciò si ottiene rimuovendo prima uno o due rack di congelamento dall'esecutore per lasciare spazio di manovra e inserendo il dispositivo verticalmente nell'esecutore. Il secondo passo consiste nel raschiare delicatamente la parte inferiore dell'esecutore con il dispositivo.

Quindi, tirare il dispositivo in posizione verticale lungo le pareti dell'esecutore Per estrarre la scatola del congelatore dal serbatoio, il passaggio finale consiste nell'afferrare la scatola recuperata dal fondo dell'esecutore e sostituire i rack del congelatore rimossi. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti come la decantazione, la barra piena di azoto liquido è che fornisce un'alternativa facile, sicura e rapida, che preserva l'integrità del campione e può essere eseguita da un solo operatore. Per iniziare l'assemblaggio del dispositivo criotollerante, utilizzare una pinza per raddrizzare un lato di una cravatta forte su tre lati per creare una cravatta forte LHA.

Come si vede qui, le dimensioni della cravatta forte possono essere selezionate in base al diametro del collo dell'agente. Due legami così forti dovrebbero essere realizzati per consentire al dispositivo di recuperare scatole criogeniche da cinque pollici e mezzo per cinque e mezzo. Fissali con una robusta cinghia TST utilizzando un bullone a corona, una rondella per dadi e una vite per formare la base della paletta criogenica.

Il dispositivo dovrebbe ora apparire come mostrato qui. Ora, utilizzando una piastra scanalata, allinea le fessure sulla robusta corda a T con le fessure su un'estremità della piastra scanalata. Quindi fissare i due insieme con dadi e bulloni Hillman.

Praticare dei fori per il fissaggio se la piastra scanalata e le fascette robuste non hanno fori preforati. Se lo si desidera, è possibile formare una maniglia piegando l'altra estremità della piastra scanalata e avvolgendola con schiuma. Per afferrare meglio il dispositivo, assicurarsi di rimuovere la schiuma prima dell'acqua cla.

Il dispositivo di recupero fai-da-te criotollerante può anche essere adattato per il recupero di fiale criogeniche. Ciò comporta la sostituzione della base piatta con un colino in acciaio inossidabile modificato per estrarre le fiale dal liquido. Per iniziare il montaggio, svitare prima i dadi e i bulloni a corona, fissando il robusto perno a T del pneumatico alla piastra scanalata.

Quindi, prima di fissare il colino in acciaio inossidabile alla piastra scanalata, piegare delicatamente il collo del colino con l'aiuto di una pinza per orientare la base ad angolo in modo da assomigliare a un mestolo. Se il colino utilizzato viene fornito con un labbro, utilizzare una pinza per piegare il labbro verso il basso. Ciò faciliterà le manovre con il dispositivo.

Allineare il foro sull'impugnatura del filtro insieme ai fori sulla piastra scanalata e fissare il filtro utilizzando dadi e bulloni Hillman. Praticare dei fori se il filtro non è dotato di fori preforati. Per iniziare a recuperare le scatole criogeniche da un esecutore, assicurati di indossare prima i guanti criogenici.

Quindi rimuovere uno o due rack del congelatore dall'esecutore per lasciare spazio di manovra con il dispositivo. Quindi, utilizzare il dispositivo di recupero fai-da-te criotollerante verticale dotato della robusta base del tie ttra per raschiare delicatamente lungo il fondo dell'esecutore e raccogliere la scatola, cadere sul fondo del serbatoio dell'esecutore. Quindi, tirare il dispositivo in posizione verticale lungo le pareti dell'esecutore per estrarre la scatola del congelatore dal serbatoio.

Si noti che il dispositivo deve essere tenuto verticalmente e tirato verso l'alto per evitare che la scatola scivoli di nuovo nell'esecutore. Per recuperare le fiale criogeniche, utilizzare la paletta criogenica dotata di un colino per raschiare delicatamente il fondo dell'esecutore in modo simile al recupero della scatola criogenica, tirare il dispositivo in posizione verticale e afferrare le fiale raccolte nel filtro. Una delle principali sfide negli studi sull'espressione genica è che la qualità dell'RNA dipende dalle condizioni di conservazione sia dei campioni di tessuto congelati che dell'RNA estratto.

Questa figura mostra l'effetto della manipolazione del campione sull'integrità dell'RNA totale L'RNA totale proveniente dalla stessa fonte di tessuto è stato sottoposto a una diversa manipolazione del campione prima dell'esperimento Totale intatto, il tasso di preparazione dell'RNA mostra chiare bande ribosomiali di 28 s e 18 s ribosomiali, con la banda dell'RNA ribosomiale di 28 s, circa due volte più intensa della banda dell'RNA ribosomiale di 18 s. Questa è un'indicazione che l'RNA è intatto. Le corsie tre e quattro raffigurano campioni con degradazione significativa a causa di ripetuti scongelamenti parziali mediante recuperi a breve termine dall'esecutore, modellando così la conservazione a lungo termine con travasi periodici dovuti alla necessità di recuperare le fiale cadute su scatole.

Tuttavia, i campioni conservati nel servizio di esecuzione utilizzando il dispositivo fai-da-te e quindi senza scongelamento parziale contengono RNA intatto nella corsia due. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come recuperare campioni dal dvar riempito di azoto liquido senza la necessità di decantarlo.