Name: Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-03-03T14:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 1 s
Description: Scopri come costruire filtri di lana di vetro economici per concentrare patogeni idrici come virus, batteri e protozoi. Questo metodo semplice e riproducibile consente l'analisi di grandi volumi d'acqua.

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Ringraziamo William T. Eckert per raccontare il video. Sviluppo del protocollo di lana di vetro faceva parte del Water Wisconsin e Trial Salute per rischi enterica (WAHTER Study), finanziato dalla US EPA STAR di Grant R831630. Alaska campioni sono stati raccolti da A. Reeves, A. Ramey, e B. Meixell con il sostegno finanziario USGS. Qualsiasi uso di nomi commerciali, prodotto o azienda è per scopi descrittivi soltanto e non implica riconoscimento alcuno da parte del governo degli Stati Uniti.

1. Preparare la lana di vetro <ol><li> Prima e dopo aver fatto ogni partita di filtri, sterilizzare l&#39;area di lavoro con una soluzione di candeggina al 10%. </li><li> Indossare guanti e camice. Sterilizzare un secchio in autoclave a 121 ° C e 15 psi per almeno 20 minuti. Posizionare la lana di vetro nel secchio sterile. </li><li> Saturare la lana di vetro con acqua ad osmosi inversa e lasciare macerare per 15 minuti. </li><li> Scolare l&#39;acqua ad osmosi inversa dal secchio. </li><li> Saturare la lana di vetro con 1 M HCl e lasciate macerare per 15 minuti. </li><li> Scolare la M 1 HCl dal secchio. </li><li> Lavare la lana di vetro con acqua ad osmosi inversa. </li><li> Mescolare accuratamente. </li><li> Controllare il pH utilizzando carta pH e ripetere l&#39;acqua osmosi inversa risciacquo fino a pH neutro si ottiene. </li><li> Versare l&#39;acqua di risciacquo. </li><li> Saturare la lana di vetro con 1 M NaOH e si lascia macerare per 15 minuti. </li><li> Scolare la M 1 NaOH dal secchio. </li><li> Ripetere l&#39;osmosi inversa risciacquo fino a pH neutro si ottiene. </li><li> Versare l&#39;acqua di risciacquo. </li><li> Invece di un secchio, una rondella lana di vetro può essere costruito, che è simile nel disegno ad una rondella pipetta di vetro (Figura 1). </li><li> Coprire la lana di vetro completamente con fosfato sterile Buffered Saline (PBS) a pH 6,8. </li><li> Utilizzare la lana di vetro preparata immediatamente o conservare a 4 ° C. Può essere conservato per un massimo di due settimane. Prima dell&#39;uso, assicurarsi che il pH è neutro in quanto aumenterà nel tempo. Se il pH non è neutro, ri-sciacquare con fosfato sterile salina tamponata (pH 6,8). </li></ol> 2. Il montaggio del filtro in lana di vetro <ol><li> Praticare un foro 11/16 di pollice nei tappi in PVC e fili di rubinetto in modo che i maschi raccordi in nylon adattatori possono essere avvitati i tappi. Questo passaggio è necessario solo per la prima assemblea. Successivamente, i tappi possono essere usati per anni. Applicare Teflonnastro per i fili di nylon e raccordi a vite per i tappi. </li><li> Riporre il tubo in PVC con piccoli pezzi di lana di vetro. Utilizzare uno stantuffo metallico, come una valvola motore di un&#39;auto, per il confezionamento stretto. Imballaggio non richiede grande forza. Confezione abbastanza stretto in modo che la lana di vetro rimane al suo posto e canali non si formano. Tuttavia, non viene imballato in modo così stretto acqua non può passare attraverso il filtro. Quando imballato opportunamente, una portata di 4 a 5 litri al minuto deve essere raggiungibile quando il filtro è fissato a rubinetti con pressioni comprese tra 40-60 psi. Per le dimensioni di tubo in PVC di cui al presente protocollo, circa 85 grammi lavato e lana di vetro imballato è usato per pipe. Tare il tubo vuoto PVC su un top-loading equilibrio e pacco con lana di vetro lavata fino a quando la massa del tubo aumenta 85 grammi. </li><li> Inserire la rete in polipropilene nei tappi in PVC con raccordi maschio in nylon adattatore collegato. </li><li> Applicare il nastro di teflon alle parti filettate del tubo in PVC. </li><li> Avvitare tappi in PVC alla p PVCipe e etichetta un&#39;estremità filtro l&#39;afflusso e l&#39;altra estremità del deflusso. Questo è importante per la successiva fase di eluizione. Che fine viene etichettato afflusso non importa. </li><li> Spingere 60 mL di soluzione salina tamponata con fosfato sterile (pH = 6.8) nel filtro utilizzando un catetere punta siringa. Eccesso uscirà all&#39;estremità opposta. </li><li> Wrap termina strettamente con Parafilm per evitare perdite. I filtri possono essere memorizzati fino a 30 giorni a 4 ° C. </li></ol> 3. Campionamento <ol><li> Sterilizzare tubi utilizzati per il campionamento da parte di ricircolo o immergendo gli elementi per 30 minuti in NaClO 0,525% (cioè, una soluzione al 10% di candeggina standard). Segui questa drenando la soluzione di ipoclorito e neutralizzare con tiosolfato di sodio 0,05%, ottenuto aggiungendo 25 mL di una soluzione al 2% di sodio tiosolfato anidro stock di un litro d&#39;acqua ad osmosi inversa. </li><li> Per esempio l&#39;acqua con un pH maggiore di 7,5, regolare il pH a tra 6,5 ​​e 7,0 con HCl. HCl concentrazione può variare da 0,25M a 1 M. quattro litri 0,5 M HCl è generalmente sufficiente per due campioni di 800 litri, a seconda del pH ambientale dell&#39;acqua e la capacità di buffering. Iniettare HCl durante il campionamento utilizzando una pompa peristaltica o Venturi (Figura 2). Regolare la velocità della pompa o l&#39;apertura Venturi per raggiungere l&#39;obiettivo di pH. Misurare il pH all&#39;uscita linea del campione usando un pH-metro campo. </li><li> Utilizzare un prefiltro se gli zoccoli in lana di vetro filtro da acqua con elevata torbidità. (Specifiche per il prefiltro e la sua sede sono in linea nell&#39;elenco Materiali.) Poiché patogeni può essere collegato a particelle intrappolate dal prefiltro deve essere eluito con il filtro di lana di vetro (vedi sotto). </li><li> Regolare il flusso tra 2 e 4 litri al minuto. Volumi di campione tipici sono tra 200 e 1.500 litri. </li><li> Scollegare il filtro di lana di vetro e riporlo in un sacchetto di plastica sterile a 4 ° C per un massimo di 48 ore. </li></ol> 4. Eluizione <ol><li> Applicare il filtro di lana di vetro ad un anellostand con l&#39;estremità rivolta verso il basso afflusso di campione in una bottiglia di polipropilene. Eluire opposta alla direzione del flusso del campione. </li><li> Premere 80 ml di estratto di carne sterile 3% in 0,05 M glicina con un pH di 9,5 nel filtro. </li><li> Attendere 15 minuti. </li><li> Premere un&#39;altra 80 mL di sterile estratto di carne 3% in 0,05 M glicina con un pH di 9,5 nel filtro. </li><li> Spingere il filtro d&#39;aria che fino a schiuma fuoriesce dal filtro in ingresso. </li><li> Regolare il pH dell&#39;eluato a tra 7,0 e 7,5 con 1 M HCl. </li><li> Eluato Conservare a 4 ° C per un massimo di 24 ore oa -20 ° C per lunghi periodi di tempo. </li><li> Eluire il prefiltro se viene utilizzato. Svitare la parte superiore della cartuccia fuori sede e versare tutta l&#39;acqua residua all&#39;interno del corpo mentre si tiene il prefiltro in posizione con le mani protette da guanti sterili. </li><li> Togliere il prefiltro dalla cartuccia dell&#39;alloggiamento e farla scorrere in un 15 &quot;x 6&quot; zip-lock bag. </li><li> Versare 200 ml di estratto di carne sterile 3% in M ​​0,05 glycine con un pH di 9,5 nel sacco e sigillare saldamente con la zip-lock. </li><li> Invertire il prefiltro insaccato diverse volte per garantire l&#39;intera superficie viene a contatto con l&#39;estratto di carne. </li><li> Attendere 15 minuti, a volte invertendo e massaggiando il prefiltro insaccato. </li><li> Aprire lo zip-lock. Afferrare il sacchetto attorno al prefiltro strettamente a spremere come estratto di carne il più possibile e tirare la prefiltro con guanti sterili,. </li><li> Versare l&#39;eluato estratto di carne in una bottiglia di polipropilene. </li><li> Regolare il pH dell&#39;eluato a tra 7,0 e 7,5 con HCl 1M. </li><li> Eluato Conservare a 4 ° C per un massimo di 24 ore oa -20 ° C per lunghi periodi di tempo. L&#39;eluato prefiltro può essere analizzato separatamente per i patogeni o in combinazione con l&#39;eluato filtro lana di vetro. </li></ol> 5. Risultati rappresentativi <table border="1"><tbody><tr><td> Patogeni </td><td> Water Level torbidità (NTU) a </td><td> Importo Seeded / L b, c, d </td><td> Recupero% ± 1 SD </td><td> Trials Numero indipendenti </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 0,5 </td><td> 500 </td><td> 81% ± 11 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 0,5 </td><td> 5000 </td><td> 67 ± 12% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 500 </td><td> 59% ± 32 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 215 </td><td> 5000 </td><td> 38% ± 22 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 56 ± 18% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Enterovirus-Poliovirus Sabin III </td><td> 447 </td><td> 5000 </td><td> 63% ± 37 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0,5 </td><td> 5 </td><td> 38 ± 14% </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 0,5 </td><td> 50 </td><td> 53 ± 19% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Piangereptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 40 ± 16% </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 215 </td><td> 50 </td><td> 30% ± 6 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 33 ± 13% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Cryptosporidium parvum </td><td> 447 </td><td> 50 </td><td> 28% ± 11 </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0,5 </td><td> 5 </td><td> 29% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 0,5 </td><td> 500 </td><td> 56 ± 16% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 215 </td><td> 5 </td><td> 32% ± 24 </td><td> 7 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td&gt; <td> 215 </td><td> 500 </td><td> 34% ± 11 </td><td> 6 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 5 </td><td> 34 ± 18% </td><td> 8 </td></tr><tr><td> Salmonella enterica </td><td> 447 </td><td> 500 </td><td> 31% ± 24 </td><td> 8 </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Unità di torbidità nefelometrico </li><li> Enterovirus enumerate da qPCR come copie genomiche / L </li><li> C. parvum enumerati mediante immunofluorescenza di oocisti </li><li> S. enterica enumerati dalla cultura come formanti colonie-unità </li></ol> Tabella 1. Concentrazione di lana di vetro con la torbidità dell&#39;acqua e densità diversi agenti patogeni. <table border="1"><tbody><tr><td> Patogeni </td><td> Campione d&#39;acqua Location </td><td> Importo Seeded / L a </td><td> Reco%<html> molto </td></tr><tr><td> Influenza aviaria H5N2 </td><td> Sundi Lake, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 42,9% </td></tr><tr><td> Influenza aviaria H5N2 </td><td> Minto Flats, Fairbanks North Star Borough </td><td> 2500 </td><td> 36,7% </td></tr><tr><td> Influenza aviaria H5N2 </td><td> Portage Valley, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 7,8% </td></tr><tr><td> Influenza aviaria H5N2 </td><td> Potter Marsh, Anchorage Borough </td><td> 2500 </td><td> 41,5% </td></tr><tr><td> Influenza aviaria H5N2 </td><td> Willow Lake, Yukon-Koyukuk Borough </td><td> 2500 </td><td> 15,5% </td></tr></tbody></table><ol class="lalpha"><li> Misurato da qPCR come copie genomiche / L </li></ol> Tabella 2. Concentrazione in lana di vetro del virus dell&#39;influenza aviaria utilizzando l&#39;acqua da cinque siti in Alaska. les/ftp_upload/3930/3930fig1.jpg &quot;alt =&quot; Figura 1 &quot;/&gt; Figura 1. Schema di rosetta lana di vetro. Questo può essere usato al posto di un secchio, risparmiando tempo di risciacquo. Il concetto è simile ad una rondella pipetta di vetro. <img src="/files/ftp_upload/3930/3930fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Lana di vetro di filtrazione con iniezione di acido da pompa peristaltica. Nota: il connettore &quot;T&quot;, dove il tubo della pompa acida introduce nella linea di campione tra il rubinetto dell&#39;acqua e la lana di vetro filtro. regolazione del pH è necessaria solo se l&#39;acqua ha un pH campionata&gt; 7,5. I filtri di lana di vetro sono efficaci agenti patogeni in concentrazione da acqua con una vasta gamma di livelli di torbidità e densità patogeni (Tabella 1). Per verificare ciò, 20 litri di acqua di rubinetto senza cloro è stato mescolato con il terreno limo argilla secca (0, 1,27 o 2,75 g / L) per raggiungere il livello desiderato di torbidità e poi seminati con agenti patogeni a varie densità. L&#39;acquaè stato passato attraverso un filtro lana di vetro, i patogeni concentrati nell&#39;eluato erano enumerate, e questo valore era il numeratore nel calcolo percentuale di recupero. La quantità di agenti patogeni seminati in acqua, che è, il denominatore del calcolo recupero percentuale, è stato determinato prima semina dei patogeni in un eluato negativo di elencare i patogeni. L&#39;eluato negativo è stato preparato facendo passare una seminata campione di 20 litro attraverso un filtro e eluendo. Quantificare gli agenti patogeni seminate in un eluato negativo evita differenze di enumerazione degli agenti patogeni che potrebbero derivare da differenze matrice creata dal filtro di lana di vetro. L&#39;importanza di questo passo, nel quantificare i patogeni di qPCR è discusso in Lambertini et al. 3. Un campione di 20 litro controllo negativo è stata concentrata mediante filtrazione in lana di vetro per determinare non ci fossero native presenti agenti patogeni che potrebbero confondere il calcolo percentuale di recupero. A 10 um dimensione nominale dei pori prefiltro wcome quando il livello torbidità era ≥ 215 NTU. Poliovirus è stato quantificato in tempo reale utilizzando la concentrazione qPCR secondario e procedure di estrazione di acidi nucleici e inneschi e le sonde descritte in Lambertini et al. 3. Cryptosporidium parvum è stato quantificato nel volume finale del campione concentrato (FCSV) creato dalla concentrazione procedura secondaria di poliovirus . Oocisti sono state visualizzate mediante immunofluorescenza (MeriFluor Cryptosporidium e Giardia Detection Kit, Meridian Life Science, Inc., Cincinnati, OH). Salmonella enterica è stato quantificato in FCSV da piastrato su agar XLD (Remel, Lenexa, KS) e conteggio delle colonie di formazione- unità. I filtri di lana di vetro sono efficaci a concentrare virus dell&#39;influenza aviaria (Tabella 2). Virus a bassa patogenicità dell&#39;influenza aviaria (H5N2) è stato seminato in acqua da diverse località in Alaska e la percentuale di recupero calcolato come descritto Above. Concentrazione secondario e procedure di acidi nucleici sono stati eseguiti come per poliovirus, il virus è stato quantificato qPCR utilizzando i primer e sonde descritte in Spackman et al 4.

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</ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati da vari gruppi di ricerca a concentrarsi 3,5,6 virus enterici umani da una varietà di fonti d&#39;acqua, come acqua potabile finito 7, 8,9 acque sotterranee, acque di superficie 10, 11 di acqua di mare, acque reflue 12, e scarichi agricoli 13. Qui riportiamo i filtri sono efficaci anche a concentrare il virus dell&#39;influenza aviaria così come i patogeni batterici e protozoi Salmonella enterica (sierotipo Ty...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente o prodotto </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> Acido cloridrico </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> A144-500 </td></tr><tr><td height="24"> Idrossido di sodio </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> BP359-212 </td></tr><tr><td> Soluzione tampone fosfato Cloruro di sodio Potassio fosfato bibasico Potassio fosfato monobasico- </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td><html> BP358-212 BP363-500 BP362-500 </td></tr><tr><td> Ipoclorito di sodio per esempio, candeggina </td><td> <a href="http://www.clorox.com" target="_blank">Il Clorox Co.</a> </td><td></td></tr><tr><td> Tiosolfato di sodio, anidro </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> S 475-212 </td></tr><tr><td> Estratto di carne, essiccata </td><td> <a href="http://www.bd.com" target="_blank">Becton, Dickinson and Company</a> </td><td> 211520 </td></tr><tr><td> Glycine </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> G46-500 </td></tr><tr><td> Oliato lana di vetro sodocalcic O R-11 isolante in fibra di vetro a vista </td><td> <a href="http://www.isover.com" target="_blank">Isover</a> <html> ref = target &quot;http://www.jm.com&quot; = &quot;_blank&quot;&gt; Johns Manville </td><td> Bourre 725 QN </td></tr><tr><td> Mesh in polipropilene </td><td> <a href="http://www.industrialnetting.com" target="_blank">Industrial Netting</a> </td><td> xN4510 </td></tr><tr><td> 2 &quot;x4&quot; Sch 80 PVC raccordo tubo filettato </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 6MW35 </td></tr><tr><td> 2 &quot;Sch 40 PVC cap </td><td> <a href="http://www.grainger.com" target="_blank">Grainger</a> </td><td> 5WDW3 </td></tr><tr><td> Maschio nylon Raccordo adattatore (1/2 &quot;x1 / 2&quot;) </td><td> <a href="http://www.usplastic.com" target="_blank">US Plastic Corp.</a> </td><td> 62178 </td></tr><tr><td> Bottiglie di esempio per eluato-1 litro </td><td> <a href="http://www.fishersci.com" target="_blank">Fisher Scientific</a> </td><td> 03-313-4F </td></tr><tr><td> 60 mL siringa </td><td>Target &quot;http://www.fishersci.com&quot; = &quot;_blank&quot;&gt; Fisher Scientific </td><td> NC9661991 </td></tr><tr><td> pH strisce </td><td> <a href="http://www.whatman.com" target="_blank">Whatman</a> </td><td> 2614 991 </td></tr><tr><td> Prefiltro, polipropilene, cartuccia da 10 pollici, 10 pm </td><td> McMaster-Carr </td><td> 4411K75 </td></tr><tr><td> Prefiltro custodia </td><td> Cole-Parmer </td><td> S-29.820-10 </td></tr></tbody></table>

filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici

Glass Wool Filters for Concentrating Waterborne Viruses and Agricultural Zoonotic Pathogens

Il primo passo fondamentale per la valutazione dei livelli di agenti patogeni in sospetto di acqua contaminata è la concentrazione. Metodi di concentrazione tendono a essere specifica per un gruppo particolare agente patogeno, per esempio gli Stati Uniti Metodo Environmental Protection Agency 1623 per Giardia e Cryptosporidium 1, il che significa che più metodi sono necessari se il programma di campionamento di mira più di un gruppo patogeno. Un altro svantaggio dei metodi attuali è l&#39;apparecchiatura può essere complicato e costoso, per esempio il metodo VIRADEL con cartuccia filtrante per concentrare il virus 1MDS 2. In questo articolo abbiamo descritto come creare filtri in lana di vetro per concentrare gli agenti patogeni a base acquosa. Dopo eluizione filtro, il concentrato è suscettibile ad una fase di seconda concentrazione, come centrifugazione, seguita da patogeno rilevamento e conteggio con metodi culturali o molecolari. I filtri sono diversi vantaggi. La costruzione è semplice ed i filtri possono essere costruiti ad unadimensioni ny per soddisfare le esigenze specifiche di campionamento. Le parti del filtro sono poco costosi, che permettono di raccogliere un gran numero di campioni senza incidere negativamente un bilancio del progetto. Grandi volumi di campione (100s a 1.000 s L) può essere concentrata a seconda del tasso di intasamento di torbidità. I filtri sono facilmente trasportabili e con attrezzatura minima, come una pompa e misuratore di portata, possono essere attuate in campo per il campionamento dell&#39;acqua finito di bere, acque superficiali, sotterranee e scarichi agricoli. Infine, filtrazione lana di vetro è efficace per concentrare una varietà di tipi di patogeni così solo metodo è necessario. Qui riportiamo l&#39;efficacia del filtro di concentrazione acquosa enterovirus umani, S almonella enterica, Cryptosporidium parvum, e il virus dell&#39;influenza aviaria.

I filtri di lana di vetro sono stati utilizzati per concentrare i virus acquosa da un certo numero di gruppi di ricerca in tutto il mondo. Qui mostriamo un metodo semplice per la costruzione di filtri di lana di vetro e di dimostrare i filtri sono anche efficaci in concentrazione acquosa virali e patogeni batterici e protozoi.

Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici

Il primo passaggio fondamentale per la valutazione dei livelli di agenti patogeni in acque sospette di contaminazione è la concentrazione. I metodi di concentrazione tendono a essere specifici per un...

L'obiettivo generale di questa procedura è creare un filtro economico ed efficace per la concentrazione di una vasta gamma di patogeni acquatici da grandi volumi di acqua. La costruzione del filtro avviene innanzitutto risciacquando la lana di vetro, lavandola con un acido e una base, e risciacquando nuovamente la lana fino a raggiungere un pH neutro. Successivamente, la lana di vetro viene risciacquata in soluzione salina tamponata al fosfato.Nel passaggio successivo, la lana di vetro viene compattata all'interno di un tubo in PVC per formare il filtro in lana di vetro. Dopo aver utilizzato il filtro per il campionamento dell'acqua, si esegue un passaggio di eluizione. Il campione può quindi essere conservato, ulteriormente concentrato o sottoposto ad analisi per la ricerca di agenti patogeni mediante metodi colturali o molecolari.Le malattie idrotrasmesse rappresentano una minaccia significativa per la salute pubblica. La trasmissione di malattie a livello globale può avvenire attraverso l'acqua potabile e le attività ricreative in ambiente acquatico. Un approccio per valutare la qualità igienico-sanitaria dell'acqua consiste nel sottoporla direttamente a test per la ricerca di a

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JoVE Journal

Immunology and Infection

Immunologia e Infezioni

Il tasso di turnover dei virus in sistemi marini e d'acqua dolce può essere stimato da una riduzione e tecnica ripetersi. I dati permettono ai ricercatori di dedurre i tassi di virus-mediata mortalità microbica nei sistemi acquatici.

Stimare i tassi di produzione del virus nei sistemi acquatici

Questo protocollo descrive l'uso di un flusso tangenziale a fibre cave sistema di concentrazione del campione di ultrafiltrazione ed una dissociazione calore come procedura alternativa per la rilevazione di...

Un metodo modificato EPA 1623 che utilizza flusso tangenziale a fibre cave di ultrafiltrazione e di calore passi dissociazione per rilevare Waterborne<em&gt; Cryptosporidium</em&gt; E<em&gt; Giardia spp.</em

È stato sviluppato un approccio per identificare le condizioni ottimali di concentrazione virale per campioni d'acqua di piccolo volume utilizzando punte di adenovirus umano. Le tecniche qui descritte sono utilizzate per identificare i parametri di concentrazione per altri bersagli virali e applicate alla sperimentazione della concentrazione virale su larga scala.

A Procedura piccolo volume per concentrazione virale da Water

EPA Il metodo 1615 utilizza un filtro elettropositivo per concentrare enterovirus e norovirus nelle acque ambientali e potabili. Questo manoscritto descrive la procedura per la raccolta dei campioni per le analisi del Metodo 1615.

Metodo EPA 1615. Misura di Enterovirus e Norovirus Evento in acqua per la cultura e RT-qPCR. I. Raccolta di campioni di virus

Un anione cambio metodo a base di resine, adattato a liquido basato su urto bioaerosol campionamento dei virus è dimostrato. Quando accoppiato con rilevazione molecolare a valle, il metodo consente facile e sensibile di rilevazione di virus da bioaerosols.

Rilevamento di virus da Bioaerosols utilizzando resina a scambio anionico

I batteri secernono vescicole extracellulari (EV) di dimensioni nanometriche che trasportano molecole biologiche bioattive. La ricerca EV si concentra sulla comprensione della loro biogenesi, del ruolo nelle interazioni e malattie microbo-microbo e ospite-microbo, nonché sulle loro potenziali applicazioni terapeutiche. Viene presentato un flusso di lavoro per l'isolamento scalabile dei veicoli elettrici da vari batteri per facilitare la standardizzazione della ricerca sui veicoli elettrici.

Isolamento scalabile e purificazione di vescicole extracellulari da Escherichia coli e altri batteri

Numerose nuove sequenze simili a virus sono state trovate nelle zanzare a causa dell'ampio uso di tecnologie di sequenziamento. Forniamo una procedura efficace per isolare e amplificare i virus utilizzando linee cellulari di vertebrati e zanzare, che potrebbero servire come base per studi futuri sui virus associati alle zanzare, compresi i virus trasmessi dalle zanzare e specifici per le zanzare.

Isolamento del virus associato alle zanzare dalle zanzare raccolte sul campo

La concentrazione di virus da campioni di acqua ambientale e acque reflue è un compito impegnativo, svolto principalmente per l'identificazione e la quantificazione dei virus. Mentre diversi metodi di concentrazione del virus sono stati sviluppati e testati, dimostriamo qui l'efficacia dell'ultrafiltrazione e della flocculazione del latte scremato per i virus a RNA con diversi tipi di campioni.

Concentrazione di particelle virali da campioni di acqua ambientale e acque reflue mediante flocculazione e ultrafiltrazione del latte scremato

Qui, descriviamo i metodi di campionamento dalle zone eufotiche degli ecosistemi marini e d'acqua dolce per isolare i cianofagi (e i loro ospiti) e i processi post-campionamento che arricchiscono i singoli genotipi e caratterizzano le dinamiche di interazione virus-ospite.

Campionamento ambientale di microbi fotosintetici e dei loro virus: dal campo al laboratorio

Qui presentiamo uno studio per valutare l'efficacia antivirale di rivestimenti superficiali a base di rame e argento sui filtri dell'aria. Utilizzando una camera di bioaerosol e il batteriofago Phi6, questo metodo quantifica l'efficienza dell'inattivazione virale e della filtrazione meccanica per tecnologie di aria interna auto-sanificanti.

Valutazione dell'effetto dei filtri e dei pre-filtri rivestiti sull'infettività e la concentrazione del virus Phi6 aerosolizzato

Scopri come costruire filtri di lana di vetro economici per concentrare patogeni idrici come virus, batteri e protozoi. Questo metodo semplice e riproducibile consente l'analisi di grandi volumi d'acqua.

Filtri di lana di vetro per la raccolta virus a base acquosa e agricole agenti patogeni zoonotici

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