Name: Questa ottobre a JOVE (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-10-01T00:00:00.000+00:00
Duration: 4 min 50 s
Description: Esplora i nuovi avanzamenti in neuroscienza e biologia attraverso i protocolli sperimentali visualizzati di JoVE. Scopri metodologie innovative per migliorare la riproducibilità della ricerca scientifica.

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<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3110">Trasfettare e nucleofectare cellule staminali pluripotenti indotte umane</a></h2>
Papri Chatterjee, Yuri Cheung, Chee Liew UCR Stem Cell Center, Dipartimento di Biologia Cellulare e Neuroscienze, Università della California Riverside
Nonostante i recenti progressi nella modificazione genetica, la trasfezione di cellule staminali embrionali umane (HESC) rimane un processo capriccioso. Per quanto ne sappiamo, non sono stati riportati metodi sistematici ed efficienti per trasfettare le cellule staminali pluripotenti indotte umane (iPSC). Qui, descriviamo protocolli robusti per trasfettare e nucleotettare in modo efficiente le iPSC umane.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=2950">Diagnosi rapida assistita da microonde di malattie virali delle piante mediante microscopia elettronica a trasmissione</a></h2>
Bernd Zechmann1, 2, Gerhard Graggaber1, Günther Zellnig1 1Istituto di Scienze Vegetali, Università di Graz, 2Istituto per la Microscopia Elettronica e la Ricerca sulle Strutture Fini, Università di Tecnologia di Graz
Questo studio descrive un metodo che consente la diagnosi rapida e chiara delle malattie dei virus delle piante in circa mezza giornata utilizzando una combinazione di preparazione di campioni di piante assistita da microonde per la microscopia elettronica a trasmissione e metodi di colorazione negativa.
<h2><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3363">Seguendo il destino cellulare in E. coli dopo l'infezione da fago lambda</a></h2>
Lanying Zeng1, Ido Golding1, 2, 3 1Dipartimento di Fisica, Università dell'Illinois a Urbana-Champaign, 2Centro per la Fisica delle Cellule Viventi, Università dell'Illinois a Urbana-Champaign, 3Verna e Marrs McLean Dipartimento di Biochimica e Biologia Molecolare, Baylor College of Medicine
Questo articolo descrive la procedura per preparare una versione marcata in fluorescenza del batteriofago lambda, l'infezione dei batteri E. coli, seguendo l'esito dell'infezione al microscopio e l'analisi dei risultati dell'infezione.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3107">Strategie di trapianto di cellule staminali per il ripristino della disfunzione cognitiva causata dalla radioterapia cranica</a></h2>
Munjal M. Acharya*, Dante E. Roa*, Omar Bosch, Mary L. Lan*, Charles L. Limoli Department of Radiation Oncology, Università della California Irvine * Questi autori hanno contribuito in egual misura
I pazienti con tumore cerebrale vengono regolarmente sottoposti a radioterapia cranica e, sebbene benefico, questo trattamento spesso provoca una disfunzione cognitiva debilitante. Questo grave problema irrisolto non ha attualmente alcun ricorso clinico e ha guidato i nostri sforzi per ideare terapie basate su cellule staminali per il recupero dei decrementi cognitivi indotti dalle radiazioni.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3108">Quantificare i decrementi cognitivi causati dalla radioterapia cranica</a></h2>
Lori- Ann Christie, Munjal M. Acharya, Charles L. Limoli Dipartimento di Radioterapia Oncologica, Università della California Irvine 
Il deterioramento cognitivo derivante dalla gestione radioterapica dei tumori cerebrali rappresenta una condizione clinicamente intrattabile che influisce negativamente sulla qualità della vita. La capacità di valutare criticamente i potenziali interventi per migliorare i decrementi cognitivi indotti dalle radiazioni dipende in ultima analisi dalla capacità di intraprendere rigorose valutazioni quantitative della cognizione.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3238">Il protocollo del test di stress sociale di Treviri per indurre stress psicologico</a></h2>
Melissa A. Birkett Dipartimento di Psicologia, Università dell'Arizona settentrionale
Questo articolo descrive un protocollo per indurre stress psicologico nei partecipanti, che consente ai ricercatori di misurare le risposte psicologiche, fisiologiche e neuroendocrine allo stress all'interno di singoli partecipanti o tra gruppi.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=2967">Analisi orale del biofilm degli espansori palatali mediante ibridazione in situ a fluorescenza e microscopia a scansione laser confocale</a></h2>
Barbara Klug1, 2, Claudia Rodler1, Martin Koller3, Gernot Wimmer3, Harald H. Kessler2, Martin Grube4, Elisabeth Santigli1 1Dipartimento di Ortodonzia e Ortopedia Maxillo-Facciale, Università di Medicina di Graz, 2Istituto di Igiene, Microbiologia e Medicina Ambientale, Università di Medicina di Graz, 3Dipartimento di Protesi, Odontoiatria Restaurativa, Parodontologia e Implantologia, Università di Medicina di Graz, 4Istituto di Scienze Vegetali, Università Karl-Franzens di Graz
Presentiamo un protocollo per l'analisi strutturale e composizionale del biofilm orale naturale da apparecchi ortodontici con ibridazione in situ (FISH) e microscopia a scansione laser confocale (CLSM). I campioni di biofilm orale sono stati raccolti dagli espansori palatali, raschiando le scaglie di resina acrilica dalla loro superficie e inviandole per l'elaborazione molecolare.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=2615">Misurazione quantitativa dei flussi in situ utilizzando un apparato di velocimetria subacquea autonomo (SCUVA)</a></h2>
Kakani Katija1, Sean P. Colin2, 3, John H. Costello3, 4, John O. Dabiri5 1Fisica e ingegneria oceanica applicata, Woods Hole Oceanographic Institution, 2Scienze ambientali e biologia marina, Roger Williams University, 3Laboratorio di biologia marina, Whitman Center, 4Dipartimento di Biologia, Providence College, 5Dipartimenti di Aeronautica e Bioingegneria, California Institute of Technology
Questo protocollo fornisce istruzioni su come utilizzare un apparato di velocimetria subacquea autonomo (SCUVA), progettato per la quantificazione dei flussi generati da animali in situ. Inoltre, questo protocollo affronta le sfide poste dalle condizioni del campo e include il movimento dell'operatore, la previsione della posizione degli animali e l'orientamento di SCUVA.
<h2 class="jove_title"><a href="https://www.jove.com/details.php?id=3336">Imaging delle attività evocate dagli odori nel bulbo olfattivo del topo utilizzando segnali di riflettanza ottica e autofluorescenza</a></h2>
Romain Chery, Barbara L'Heureux, Mounir Bendahmane, Rémi Renaud, Claire Martin, Frédéric Pain, Hirac Gurden Laboratoire d'Imagerie et de Modélisation en Neurobiologie et Cancérologie, UMR8165 Université Paris Sud 11, Paris Diderot 7 – CNRS
Questo articolo presenta i protocolli di imaging dei segnali ottici intrinseci e dei segnali di autofluorescenza delle flavoproteine per mappare le attività evocate dagli odori sulla superficie del bulbo olfattivo nei topi.

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

questa ottobre a jove

October 2011: This Month in JoVE

Il numero di ottobre 2011 del Journal of Visualized Experiments (JoVE) presenta il primo sforzo della rivista per esplorare la fisica e l'ingegneria oceanografica. Gli investigatori del Woods Hole Oceanographic Institute dimostrano l'uso di un apparato di velocimetria subacquea autonomo, o SCUVA. I componenti principali di questo strumento includono una telecamera HD e un laser che, se allineati con una lente ottica, producono un foglio di luce verticale. Dopo l'allineamento e i test per una tenuta stagna, questi ricercatori cercano gli abitanti della colonna d'acqua per l'analisi. È necessaria una sperimentazione notturna, in modo che la luce naturale non interferisca con il foglio laser. SCUVA è specificamente progettato per catturare il movimento delle particelle nell'acqua, in modo che i campi di velocità - un campo vettoriale che descrive il movimento del fluido - possano essere determinati attorno a un organismo nel suo ambiente naturale.
In Medicina Clinica e Traslazionale, i ricercatori ortodontici dell'Università di Graz determinano la composizione dei biofilm orali - un aggregato di microrganismi aderenti alla superficie - che si formano sugli espansori palatali dei loro pazienti. Questi autori utilizzano l'ibridazione fluorescente in situ combinata con la microscopia confocale per rilevare batteri specifici all'interno del biofilm e visualizzarne la struttura tridimensionale.
JoVE visita anche Graz per l'immunologia e l'infezione, dove i ricercatori dell'Università di Graz e dell'istituto di tecnologia di Graz utilizzano la microscopia elettronica a trasmissione, o TEM, per analizzare i cambiamenti ultrastrutturali che avvengono nella foglia della pianta a seguito di un'infezione virale. Piccole sezioni di foglie vengono tagliate dalla pianta e sottoposte a una procedura di fissazione assistita da microonde, che riduce drasticamente il tempo di preparazione del campione per la TEM. Dopo l'inclusione e il sezionamento, i campioni vengono caricati nel microscopio elettronico e sottoposti a ripresa. Con l'aiuto di un software di analisi delle immagini, questi autori possono calcolare le dimensioni delle particelle virali e valutare i cambiamenti ultrastrutturali nella foglia della pianta, che è fondamentale per identificare il virus infettante.
In Neuroscienze, i ricercatori dell'Università della California, Irvine, presentano una serie di paradigmi comportamentali volti a misurare il grado di deterioramento cognitivo nei roditori trattati con radioterapia cranica. Questi autori dimostrano un nuovo compito di riconoscimento dei luoghi (per la memoria di riconoscimento spaziale), un compito di labirinto elevato plus (per la misurazione dell'ansia), un compito di condizionamento della paura (apprendimento e memoria) e il labirinto d'acqua di Morris (per l'apprendimento spaziale). I deficit cognitivi nei roditori assomigliano a quelli manifestati nei sopravvissuti ai tumori dopo la radioterapia cranica, e quindi la standardizzazione di tali paradigmi cognitivo-comportamentali è fondamentale per valutare la terapia. Una potenziale terapia è il trapianto di cellule staminali nell'ippocampo, che gli autori dimostrano in un video-articolo separato a ottobre.
Sul tema delle cellule staminali, i ricercatori dell'Università della California, Riverside, dimostrano metodi per la manipolazione genetica di cellule staminali pluripotenti indotte umane. Le cellule staminali pluoripotenti indotte, IPSC, possono essere derivate da cellule somatiche, come i fibroblasti che vedete qui, in seguito all'espressione forzata di alcuni fattori di trascrizione, che causano la trasformazione delle cellule in uno stato pluripotente. Questi autori mostrano come le iPSC possono essere coltivate in condizioni prive di alimentatore e forniscono suggerimenti utili per il sollevamento e la semina delle cellule a concentrazioni ottimali per la trasfezione e la nucleofeccitazione
Oltre a queste pubblicazioni in primo piano, JoVE presenta metodi per effettuare misurazioni fisiologiche in individui sotto stress psicosociale, tracciare la lisi batterica a seguito di infezioni da fagi, imaging nel bulbo olfattivo attraverso una finestra cranica e dozzine di altri video-articoli di metodi complessi.

Questa ottobre a JOVE

Il numero di ottobre 2011 del Journal of Visualized Experiments (JoVE) presenta il primo tentativo della rivista di esplorare la fisica e l'ingegneria oceanografica. I ricercatori del Woods Hole Oceanographic Institute dimostrano l'uso di un apparato di velocimetria subacquea autonomo, o SCUVA. I componenti principali di questo strumento includono una telecamera HD e un laser che, se allineati con una lente ottica, producono un foglio di luce verticale. Dopo l'allineamento e la verifica della tenuta stagna, i ricercatori ricercano gli abitanti della colonna d'acqua per l'analisi. È necessaria la sperimentazione notturna affinché la luce naturale non interferisca con il foglio laser. Lo SCUVA è progettato specificamente per catturare il movimento delle particelle nell'acqua, in modo che i campi di velocità — un campo vettoriale che descrive il movimento del fluido — possano essere determinati attorno a un organismo nel proprio ambiente naturale. In Medicina Clinica e Traslazionale, ricercatori ortodontici dell'Università di Graz determinano la composizione dei biofilm orali — un aggregato di microrganismi aderente alla superficie — che si formano sugli espansori palatali dei loro pazienti. Gli autori utilizzano l'ibridazione in situ fluorescente combinata con la microscopia confocale per rilevare batteri specifici all'interno del biofilm e per visualizzarne la struttura tridimensionale. JoVE visita Graz anche per Immunologia e Infezioni, dove i ricercatori dell'Università di Graz e dell'Istituto di Tecnologia di Graz utilizzano la microscopia elettronica a trasmissione, o TEM, per analizzare le alterazioni ultrastrutturali che avvengono nella foglia della pianta a seguito di un'infezione virale. Piccole sezioni di foglie vengono tagliate dalla pianta e sottoposte a una procedura di fissazione assistita da microonde, che riduce drasticamente i tempi di preparazione dei campioni per la TEM. Dopo l'inclusione e il sezionamento, i campioni vengono caricati nel microscopio elettronico e acquisiti come immagini. Grazie a un software di analisi delle immagini, gli autori possono calcolare le dimensioni delle particelle virali nonché valutare le alterazioni ultrastrutturali nella foglia della pianta, operazione fondamentale per identificare il virus infettante. In Neuroscienze, ricercatori dell'Università della California, Irvine, presentano una serie di paradigmi comportamentali volti a misurare il grado di compromissione cognitiva in roditori trattati con radioterapia cranica. Gli autori dimostrano un nuovo compito di riconoscimento del luogo (per la memoria di riconoscimento spaziale), un compito con labirinto a croce rialzato (per la misurazione dell'ansia), un compito di condizionamento alla paura (apprendimento e memoria) e il labirinto acquatico di Morris (per l'apprendimento spaziale). I deficit cognitivi nei roditori somigliano a quelli manifestati nei sopravvissuti al cancro a seguito di radioterapia cranica; pertanto, la standardizzazione di tali paradigmi comportamentali cognitivi è fondamentale per valutare la terapia. Una possibile terapia è il trapianto di cellule staminali nell'ippocampo, che gli autori dimostrano in un video-articolo separato di ottobre. Sul tema delle cellule staminali, i ricercatori dell'Università della California, Riverside, dimostrano metodi per la manipolazione genetica di cellule staminali pluripotenti indotte umane. Le cellule staminali pluripotenti indotte, iPSC, possono essere derivate da cellule somatiche, come i fibroblasti visibili qui, a seguito dell'espressione forzata di determinati fattori di trascrizione, che inducono la trasformazione delle cellule in uno stato pluripotente. Gli autori mostrano come le iPSC possano essere coltivate in condizioni prive di feeder e forniscono utili suggerimenti per il distacco e la semina delle cellule a concentrazioni ottimali per la trasfezione e la nucleofezione. Oltre a queste pubblicazioni in evidenza, JoVE presenta metodi per l'esecuzione di misurazioni fisiologiche in individui sottoposti a stress psicosociale, il monitoraggio della lisi batterica a seguito di infezioni da fagi, l'imaging del bulbo olfattivo tramite finestra cranica e decine di altri video-articoli su metodi complessi.

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