Sostituzione ovariectomia e 17β-estradiolo in ratti e topi: A dimostrazione visiva

L'obiettivo generale di questa procedura è ottenere un controllo rigoroso sulle concentrazioni sieriche di estrogeni, normalmente fluttuanti, nei ratti e nei topi femmina. Questo risultato si ottiene innanzitutto rimuovendo le ovaie mediante l'approccio dorsale. Successivamente vengono preparate capsule elastiche di cel e una miscela di Nutella.

Infine, una capsula viene inserita per via sottocutanea oppure la miscela di Nutella viene somministrata per via orale. In definitiva, i risultati possono essere ottenuti mediante radioimmunodosaggio, che mostra concentrazioni sieriche stabili o fluttuanti di 17 beta-estradiolo rispettivamente per il metodo della capsula e per quello della Nutella. Il vantaggio principale di queste tecniche rispetto ai metodi esistenti, come i pellet a rilascio lento, è che si è dimostrato che producono concentrazioni fisiologiche di estradiolo per periodi prolungati di tempo.

Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo degli estrogeni, come le differenze negli effetti tra somministrazione, vie e dosaggi. Dopo aver anestetizzato l'animale, posizionarlo in posizione prona su una piastra riscaldata collegata a un termometro rettale. Applicare IGEL e per il sollievo postoperatorio sulla faccia laterale del collo dell'animale per via sottocutanea.

Somministrare cinque milligrammi per chilogrammo di IL in soluzione salina in una zona anteriore rispetto alla cresta iliaca, di dimensioni quattro per quattro centimetri. Quindi disinfettare l'area con un antisettico prima di coprire l'animale con un telo chirurgico dotato di un'apertura di quattro per quattro centimetri. Eseguire un'incisione mediana lunga da due a tre centimetri ed effettuare una dissezione ottusa della cute dalla fascia sottostante, a un centimetro di distanza laterale rispetto alla linea mediana.

Eseguire un'altra incisione attraverso la fascia. Quindi, nella maniera più superficiale possibile, dissezionare in modo ottuso lateralmente sotto questa fascia fino a raggiungere la cavità addominale. Utilizzando pinzette, afferrare il tessuto adiposo che circonda l'ovaio nella cavità addominale ed estrarlo delicatamente.

Identificare l'ovaio e legare le corna uterine e i vasi. Da 0,5 a un centimetro prossimalmente rispetto a questa struttura. Asportare l'ovaio e il tessuto adiposo legato e riposizionare il tessuto rimanente nella cavità addominale.

Eseguire un'altra incisione nella fascia controlaterale ed asportare l'altro ovaio. Chiudere le ferite e, se non si somministra immediatamente 17 beta estradiolo, lasciare che l'animale si risvegli dall'anestesia.

Posizionare l'animale in una gabbia riscaldata per almeno due ore dopo l'intervento chirurgico. Alloggiare il ratto separatamente per i primi giorni dopo l'intervento. 24 ore dopo l'intervento, per via sottocutanea.

Iniettare negli animali altri cinque milligrammi per chilogrammo di IL per somministrare 17 beta-estradiolo mediante capsule di silastic. Mescolare accuratamente la quantità desiderata in olio di sesamo. Tagliare pezzi di tubo di silastic lunghi tre centimetri e pezzi di bastoncini di legno lunghi cinque millimetri per tappare utilizzando pinzette.

Inserire un tappo di legno nella capsula scolastica prima di iniettare la soluzione di 17 beta-estradiolo in olio di sesamo. Per riempire l'intera lunghezza, chiudere delicatamente l'estremità aperta della capsula scolastica con un altro tappo di legno. Incubare le capsule nella soluzione rimanente di 17 beta-estradiolo durante la notte prima dell'implantazione.

Dopo aver chiuso le incisioni dell'ectomia, rasare e disinfettare un'area quadrata di due per due centimetri sulla faccia dorsale del collo del ratto. Praticare un'incisione di un centimetro e allargare lateralmente in modo ottuso. Dissezionare una tasca sottocutanea creando uno spazio sufficiente per la capsula.

Pulire delicatamente la capsula scolastica ed inserirla con cautela attraverso l'incisione. Chiudere quindi l'incisione con un punto di sutura. Assicurarsi che la capsula solleciti il tessuto cutaneo il meno possibile, in particolare intorno alla ferita.

Per utilizzare la crema di noci Nutella come mezzo di somministrazione di estrogeni, sciogliere completamente l'17 beta-estradiolo nell'olio di sesamo, quindi mescolare l'olio di sesamo con la crema di noci. Preparare una crema di noci placebo senza l'17 beta-estradiolo cinque giorni prima dell'esperimento. Addestrare i ratti a mangiare la crema di noci priva di ormoni nei giorni dal primo al terzo.

Addestrare gli animali in gruppi nei giorni quattro e cinque. Nutrirli con la crema di noci in gabbie separate per tutta la durata degli esperimenti. Posizionare gli animali in gabbie separate quando vengono somministrati con crema di noci e siero fisiologico.

Le concentrazioni di estradiolo 17 beta, che i metodi attuali mirano a riprodurre, sono approssimativamente da cinque a 140 picogrammi per millilitro nei ratti e da cinque a 35 picogrammi per millilitro nei topi. Come mostrato qui. Quando somministrate a ratti femmina di 300 grammi della linea Sprague Dawley.

Le capsule elastiche sottocutanee producono concentrazioni sieriche di 17 beta-estradiolo in lenta diminuzione, da circa 40 picogrammi per millilitro al secondo giorno fino a 10 picogrammi per millilitro al giorno 35. Tuttavia, immediatamente dopo la somministrazione, si può osservare un picco di concentrazione sierica di circa 1000 picogrammi per millilitro, che rientra nel range fisiologico entro otto ore, quando le capsule vengono somministrate a topi femmine C57 Black Six del peso di 25 grammi.

La concentrazione sierica è diminuita lentamente da circa 90 picogrammi per millilitro al secondo giorno a 25 picogrammi per millilitro al giorno 35 quando somministrata tramite la crema di noci a 300 grammi. Spra di ratti. I livelli fisiologici di 17 beta estradiolo oscillavano giornalmente tra 10 e 70 picogrammi per millilitro nei topi.

I livelli di 17 beta estradiolo oscillavano tra 20 e 120 picogrammi per millilitro. Una volta acquisita, la tecnica di ectomia e impianto della capsula può essere eseguita in 10 minuti se effettuata correttamente. Durante il tentativo di questa procedura, è importante ricordare di aderire rigorosamente alle linee guida igieniche.