Name: Microdialisi di etanolo durante la determinazione operante auto-amministrazione ed etanolo etanolo mediante gascromatografia (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-09-05T13:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 11 s
Description: Impara la microdialisi cerebrale per monitorare l'etanolo durante l'auto-somministrazione operante nei ratti. Questa tecnica combina campionamento continuo con gascromatografia per analisi quantitativa in tempo reale.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

playerTrialDesktop

Questa ricerca è stata sostenuta da sovvenzioni NIH / NIAAA (AA11852 e AA007471).

<ol><li>Geiger, B. M., Frank, L. E., Caldera-Siu, A. D., Pothos, E. N. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Survivable+stereotaxic+surgery+in+rodents%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Vis.+Exp%22%5BJournal%5D)">Survivable stereotaxic surgery in rodents.</a> J. Vis. Exp. (20), e880(2008).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+dopamine+response+in+the+nucleus+accumbens+core-shell+border+differs+from+that+in+the+core+and+shell+during+operant+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">The dopamine response in the nucleus accumbens core-shell border differs from that in the core and shell during operant ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 33, 1355-1365 (2009).</li>
<li>Doyon, W. M., York, J. L., Diaz, L. M., Samson, H. H., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Dopamine+activity+in+the+nucleus+accumbens+during+consummatory+phases+of+oral+ethanol+self-administration%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Dopamine activity in the nucleus accumbens during consummatory phases of oral ethanol self-administration.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 27, 1573-1582 (2003).</li>
<li>Pettit, H. O., Justice, J. B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+dose+on+cocaine+self-administration+behavior+and+dopamine+levels+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+Res%22%5BJournal%5D)">Effect of dose on cocaine self-administration behavior and dopamine levels in the nucleus accumbens.</a> Brain Res. 539, 94-102 (1991).</li>
<li>Paxinos, G., Kus, L., Ashwell, K. W. S., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22Chemoarchitectonic+Atlas+of+The+Rat+Forebrain%22">Chemoarchitectonic Atlas of The Rat Forebrain</a>. , Academic Press Inc. (1998).</li>
<li>Paxinos, G., Watson, C. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aPaxinos%2C+G+%22The+Rat+Brain+in+Stereotaxic+Coordinates%22">The Rat Brain in Stereotaxic Coordinates</a>. , Academic Press Inc. (1986).</li>
<li>Skoog, D. A., Holler, F. J., Nieman, T. A. <a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=author%3aSkoog%2C+DA+%22Principles+of+Instrumental+Analysis%22">Principles of Instrumental Analysis</a>. , 5th Edition, Thomson Learning, Inc. (1998).</li>
<li>Doyon, W. M., Anders, S. K., Ramachandra, V. S., Czachowski, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Effect+of+operant+self-administration+of+10%25+ethanol+plus+10%25+sucrose+on+dopamine+and+ethanol+concentrations+in+the+nucleus+accumbens%5BTitle%5D)+AND+%22J+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Effect of operant self-administration of 10% ethanol plus 10% sucrose on dopamine and ethanol concentrations in the nucleus accumbens.</a> J Neurochem. 93, 1469-1481 (2005).</li>
<li>Carrillo, J., Gonzales, R. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+single+exposure+to+voluntary+ethanol+self-administration+produces+adaptations+in+ethanol+consumption+and+accumbal+dopamine+signaling%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol%22%5BJournal%5D)">A single exposure to voluntary ethanol self-administration produces adaptations in ethanol consumption and accumbal dopamine signaling.</a> Alcohol. 45, 559-5566 (2011).</li>
<li>Howard, E. C., Schier, C. J., Wetzel, J. S., Duvauchelle, C. L., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+shell+of+the+nucleus+accumbens+has+a+higher+dopamine+response+compared+with+the+core+after+non-contingent+intravenous+ethanol+administration%5BTitle%5D)+AND+%22Neuroscience%22%5BJournal%5D)">The shell of the nucleus accumbens has a higher dopamine response compared with the core after non-contingent intravenous ethanol administration.</a> Neuroscience. 154, 1042-1053 (2008).</li>
<li>Robinson, D. L., Lara, J. A., Brunner, L. J., Gonzales, R. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantification+of+Ethanol+Concentrations+in+the+Extracellular+Fluid+of+the+Rat+Brain%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurochem%22%5BJournal%5D)">Quantification of Ethanol Concentrations in the Extracellular Fluid of the Rat Brain.</a> J. Neurochem. 75, 1685-1693 (2000).</li>
<li>Gonzales, R. A., McNabb, J., Yim, H. J., Ripley, T., Bungay, P. M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Quantitative+Microdialysis+of+Ethanol+in+Rat+Striatum%5BTitle%5D)+AND+%22Alcohol+Clin.+Exp.+Res%22%5BJournal%5D)">Quantitative Microdialysis of Ethanol in Rat Striatum.</a> Alcohol Clin. Exp. Res. 22, 858-867 (1998).</li>
</ol>

Questo articolo è stato finanziato dal Med Associates, Inc.

Applicazioni e limitazioni Droga auto-amministrazione è utilizzato in roditori a dipendenza del modello di droga. Molti farmaci di abuso che sono modellate in questo modo può essere somministrato per via endovenosa, in cui il farmaco viene consegnato direttamente al vano centrale. Questo consente un attento monitoraggio della dose per un auto-amministrazione sessione. Dal momento che l&#39;etanolo è di solito auto-somministrato per via orale, è molto più difficile di monitorare i livelli di farmaco a causa di differenze individuali di assorbimento e il metabolismo. Utilizzando microdialisi a campione dalla regione del cervello di interesse, non sono in grado di controllare il modello di etanolo raggiungere la regione, ma siamo anche in grado di monitorare simultaneamente i cambiamenti dei neurotrasmettitori nella stessa regione nel corso del tempo durante ogni fase di auto-somministrazione. Alterazioni neurochimiche indotte da farmaci e le risposte del cervello sono associati con abuso e di dipendenza, quindi, la possibilità di concomitanza MEAneurochimico che concentrazioni del farmaco nel corso di specifiche fasi di auto-amministrazione fornisce uno strumento molto potente e unico. Una questione da tenere a mente per correlare le concentrazioni di analiti con dialisato comportamento è le caratteristiche fisiche del l&#39;impianto idraulico microdialisi. Specificamente, il tempo necessario per il fluido da trasferire dal lume della sonda microdialisi al tubo di raccolta è critica, e riducendo i tempi sono migliori. Nel nostro laboratorio, costruiamo le sonde in modo che il tempo è di circa 90 secondi. Utilizzando queste condizioni, abbiamo scoperto che vi è un aumento della dopamina accumbal all&#39;inizio del consumo di etanolo, che diminuisce nel corso dei periodi bevande e post-bevanda al crescere dialisato concentrazione di etanolo. 2,3,8,9 Questi esperimenti , in combinazione con i dati provenienti da studi farmacologici, ci hanno permesso di analizzare gli effetti strettamente farmacologici di etanolo e di auto-somministrazione associati stimoli ambientali sul canaleanges delle concentrazioni di neurotrasmettitori. Va notato che questa particolare applicazione del combinato comportamentale-microdialisi tecniche è adatto agli attuali interessi di ricerca del nostro laboratorio. È stato progettato per valutare il pattern temporale di etanolo che raggiunge il cervello in confronto al modello di cambiamenti dei neurotrasmettitori nella stessa regione, in modo da poter collegare queste misure sincroni auto-amministrazione comportamenti. I derivati ​​concentrazioni di etanolo dialisato non sono corretti per il recupero della sonda in vivo, e sono solo una frazione della concentrazione di etanolo tessuto cerebrale. Se microdialisi quantitativa di etanolo è richiesto, la frazione di estrazione di etanolo che diffonde dallo spazio extracellulare nella sonda deve essere determinato sperimentalmente. Vedere pubblicazioni precedenti del nostro laboratorio per i metodi e le ulteriori discussioni. 10,11,12 Sebbene questo protocollo illustra l&#39;uso di gas chromatography con microestrazione in fase solida di etanolo dallo spazio di testa dei campioni di microdialisi, altri metodi per l&#39;analisi del contenuto di etanolo nel campione microdialisi potrebbe essere utilizzato. Tuttavia, metodi alternativi possono soffrire di alcuni svantaggi. Ad esempio, i metodi di analisi meno sensibili possono richiedere un volume di campione più ampio che necessita di tempi di campionamento superiore al 5-7 minuti qui illustrato. Il tipo di sistema discusso qui usa un microestrazione in fase solida che concentra l&#39;etanolo nella fase vapore nella fiala campione sigillato, consentendo l&#39;assorbimento alla fibra collocato nello spazio di testa flaconcino. Questo migliora il limite di rilevazione rispetto campionamento headspace diretta che consente tipicamente 50-100 microlitri del vapore da iniettare. Un altro grande vantaggio del metodo è che spazio di testa del campione iniettato per analisi è estremamente pulita e priva di sali. Iniezione diretta del campione microdialisi liquido può essere utilizzato anche con maggiore SENsitivity, ma ciò richiederà più tempo strumento verso il basso a causa di manutenzione ordinaria necessaria per pulire i sali iniettati. Risoluzione dei problemi e altre note <ol><li> Prima che l&#39;esperimento ha inizio, concedetevi un po &#39;di tempo per verificare che i microdialisi set-up corretto funzionamento e per problemi sparare eventuali problemi. Si consiglia di avere un extra set-up, perfusi con ACSF, pronti a passare con un malfunzionamento set-up per risparmiare tempo, in quanto la maggior parte delle sessioni operante tendono a manifestarsi in un momento specifico ogni giorno. </li><li> Assicurarsi che le sonde da microdialisi sono inseriti in un periodo di circa 5 min per minimizzare il danno ai tessuti prodotti da taglio del tessuto, come la sonda penetra il cervello. </li><li> Durante il trasferimento del ratto nella camera operante è utile avere una seconda persona assistere in modo che la linea di trasferimento (parte della microdialisi set-up) non diventa aggrovigliato, e in modo che il programma può essere operante initIATED in tempo. </li><li> Assicurarsi che vi darà l&#39;abbondanza di acqua campionatore bagno di tempo per raggiungere la temperatura adeguata. Il nostro sistema richiede in genere due ore per raggiungere i 50 ° C. Inoltre, assicurarsi che i campioni siano completamente vaporizzato prima di analizzare i campioni. Noi di solito visivamente confermare che questo si è verificato prima di iniziare l&#39;analisi dei campioni. </li><li> Standard di buone pratiche di chimica analitica devono essere seguite. Questi includono, ma non sono limitati a, convalida di individui, attrezzature e procedure. In breve, si impiegano le seguenti linee guida: i singoli utenti devono dimostrare la capacità di generare riproducibili i valori di altezza di picco per le concentrazioni di standard e lineari curve standard (R2 ≥ 0,99) nell&#39;arco di più giorni. Per verificare la GC-FID sistema funziona correttamente, le norme devono essere sempre essere analizzati prima di qualsiasi campione dializzato vengono iniettati. La curva standard generata deve avere un R2 ≥ 0,99. </li><li> La maggior parte delle apparecchiature che utilizzanoè stato acquistato attraverso Varian, Inc., che è stata acquisita da Agilent Technologies nel 2010. In questo momento, Bruker Strumenti scientifici ottenuti Varian laboratorio di gascromatografia affari strumenti. Per gli acquisti futuri, consultare entrambe le società. </li><li> Il protocollo attuale mostra un comportamento operante con i ratti, ma lo spettatore deve essere consapevole che più interruzioni di comportamento è probabile che si verificano con il modello più piccolo topo. Un altro aspetto da considerare è che l&#39;inserimento di una sonda da microdialisi in altre regioni del cervello che la corteccia prefrontale mediale e nucleo accumbens può interrompere un comportamento operante in misura maggiore rispetto a quanto mostrato qui. E &#39;importante esaminare attentamente numerosi parametri comportamentali per determinare se il danno causato dal posizionamento della sonda produce gravi alterazioni nel comportamento. </li></ol>

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> 95% etanolo </td><td> AAPER alcool e Chemical Co., Shelbyville, KY </td><td> E190, 111000190 </td></tr><tr><td> Ultra-Pure Saccarosio </td><td> MP Biomedicals, LLC, Solon, OH </td><td> 821721 </td></tr><tr><td> Ultra High Purity elio </td><td> Air Gas </td><td> HE UHP300 </td></tr><tr><td> Aria </td><td> Air Gas </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> Idrogeno </td><td> Air Gas </td><td> AIZ300 </td></tr><tr><td> GC 2 ml fiale </td><td> Agilent </td><td> # 8010-0015 </td></tr><tr><td> Tappi delle fiale GC con PTFE / silicone setti </td><td> Agilent </td><td> 8010-0084 # </td></tr></tbody></table> Tabella 1. Reagenti specifici

microdialisi di etanolo durante la determinazione operante auto-amministrazione ed etanolo etanolo mediante gascromatografia

Microdialysis of Ethanol During Operant Ethanol Self-administration and Ethanol Determination by Gas Chromatography

Operante auto-somministrazione metodi sono comunemente usati per studiare gli effetti comportamentali e farmacologici di molti farmaci di abuso, tra cui l&#39;etanolo. Tuttavia, l&#39;etanolo è in genere auto-somministrato per via orale, piuttosto che per via endovenosa come molte altre sostanze d&#39;abuso. La farmacocinetica dei farmaci somministrati per via orale sono più complesse di farmaci somministrati per via endovenosa. Poiché la comprensione del rapporto tra gli effetti farmacologici e comportamentali di etanolo richiede la conoscenza dell&#39;andamento nel tempo di etanolo raggiunge il cervello durante e dopo bere, usiamo microdialisi in vivo e gascromatografia con rivelatore a ionizzazione di fiamma per monitorare cerebrali concentrazioni di etanolo dialisato nel tempo. Combinati microdialisi-comportamentali esperimenti comportano l&#39;uso di tecniche diverse. In questo articolo, chirurgia stereotassica, formazione comportamentale e microdialisi, che può essere adattato per testare una moltitudine di auto-somministrazione e neupetrolchimico ipotesi centrato, sono inclusi solo per illustrare il loro rapporto con le successive fasi di raccolta dei campioni e analisi di etanolo dialisato. Dializzato concentrazione di etanolo analisi tramite gascromatografia con rivelazione a ionizzazione di fiamma, che è specifico per studi etanolo, è descritto in dettaglio. I dati prodotti da questi metodi di rivelare il disegno di etanolo che raggiunge il cervello durante la procedura di auto-amministrazione, e se abbinato con l&#39;analisi neurochimica dei campioni dialisato stessi, permette di trarre conclusioni circa gli effetti farmacologici e comportamentali di etanolo.

Un metodo per determinare l&#39;andamento nel tempo della concentrazione di etanolo nel cervello di ratti durante etanolo operante autosomministrazione viene descritto. Gascromatografia con rivelazione a ionizzazione di fiamma viene utilizzato per quantificare etanolo nei campioni di dialisato, perché ha la sensibilità richiesta per i piccoli volumi generati.

Microdialisi di etanolo durante la determinazione operante auto-amministrazione ed etanolo etanolo mediante gascromatografia

I metodi di autosomministrazione operante sono comunemente utilizzati per studiare gli effetti comportamentali e farmacologici di molte sostanze d'abuso, incluso l'etanolo.

L'obiettivo generale di questa procedura è monitorare i livelli di etanolo nel dializzato cerebrale durante una sessione di autoiniezione di etanolo. Per confrontare questa misura con i comportamenti sincroni di autoiniezione, si procede innanzitutto con l'implantazione chirurgica di una guida per microdialisi, una cannula e un bullone di fissaggio, seguita dall'addestramento dei ratti ad autoiniettarsi etanolo in modo operante. Il secondo passaggio consiste nell'abituare i ratti al collegamento del cavo cranico, in modo che non ostacoli l'autoiniezione di etanolo durante la microdialisi.Successivamente, viene eseguita la microdialisi durante una sessione di auto-amministrazione di etanolo, durante la quale una porzione del dializzato viene preparata per l'analisi dell'etanolo. In seguito, i campioni di dializzato vengono analizzati per determinare la concentrazione di etanolo mediante gascromatografia con rivelazione a ionizzazione di fiamma. Infine, i risultati ottenuti mostrano l'andamento temporale del raggiungimento della regione cerebrale d'interesse da parte dell'etanolo durante una sessione di auto-amministrazione.Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti, come la puntura della coda o della vena safena, è che questa procedura è minimamente invasiva al momento del prelievo del campione e consente la misurazione del farmaco nel tempo nella regione cerebrale di interesse mentre l'animale esegue un compito comportamentale. In generale, chi si approccia per la prima volta a questo metodo potrebbe incontrare difficoltà, poiché richiede numerose competenze specialistiche, molte delle quali possono essere acquisite solo attraverso una pratica ripetuta o l'esperienza. La procedura sarà inoltre dimostrata da Jeffrey Dilley, un assistente di ricerca undergraduate del nostro laboratorio.Tutte le procedure sugli animali mostrate sono state approvate dal Comitato Istituzionale per la Cura e l'Uso degli Animali dell'Università del Texas e seguono tutte le linee guida per la cura e l'uso degli animali da laboratorio. Per questi esperimenti di microdialisi comportamentale si utilizzano ratti Long Evans ben addestrati, ospitati presso un impianto accreditato ALAC dell'Università del Texas ad Austin, ai quali è stata chirurgicamente impiantata una cannula da 21 gauge sopra la regione cerebrale di interesse. Tutti gli animali devono ricevere almeno una settimana di cure post-operatorie e di recupero e devono essere in buona salute prima di iniziare le seguenti procedure.Posizionare il ratto in una camera operante Med Associates, dotata di una leva retrattile Lichter e di un tubo erogatore, e addestrarlo a premere la leva per accedere a una soluzione di saccarosio al 10%. Una volta che il ratto è stato addestrato a rispondere per la soluzione di saccarosio, iniziarlo con un programma di addestramento appropriato durante il quale l'etanolo viene aggiunto gradualmente alla soluzione in più sessioni di assunzione la notte precedente la penultima sessione operante. Dopo aver anestetizzato l'animale e verificato il livello di sedazione, collegare la molla del tethere al bullone del tethere sulla base cranica del ratto per abituarlo all'apparato, costituito da una leva bilanciata, un braccio, un tethere girevole, una molla e un supporto ad anelli.Lasciare che il ratto trascorra la notte nella stanza operante nella sua gabbia con accesso libero a cibo e acqua, quindi completare la sessione di addestramento del giorno successivo con il tether e l'apparecchiatura associata posizionati il giorno precedente all'esperimento di microdialisi. Dopo aver anestetizzato il ratto con isoflurano, verificare lo stato di sedazione eseguendo una compressione del dito del piede ed inserire una sonda per microdialisi perfusa con liquido cerebrospinale artificiale. Fissare correttamente la sonda, quindi regolare la portata della sonda a 0,2 microlitri al minuto.Posizionare il ratto nella sua gabbia abituale nella stanza operante per trascorrere la notte con tutta l'apparecchiatura per dialisi in posizione, fornendo cibo e acqua ad libitum. Il giorno successivo all'inserimento della sonda, almeno due ore prima dell'inizio dell'esperimento, aumentare la sonda fino alla sua portata operativa. Utilizzando una siringa Hamilton, verificare che la portata della sonda sia costante e pari almeno al 90% della portata impostata.Se si valutano i neurotrasmettitori nei campioni di dialisi, prelevare campioni durante tutte le fasi dell'esperimento. Iniziare raccogliendo campioni di dialisi mentre l'animale si trova nella sua gabbia di mantenimento. Conservare i campioni in modo appropriato per analisi successive.Trasferire con attenzione il ratto nella camera operante e avviare il programma operante che controlla la camera. Continuare a prelevare campioni mentre il ratto attende che la leva si estenda nella camera, prelevando due campioni prima che la leva si estenda. Iniziare a raccogliere una porzione di ciascun campione di dializzato per l'analisi dell'etanolo prelevando con pipetta un'opportuna aliquota di dializzato in un vial di vetro da due millilitri e sigillare il vial con un settore ermetico; pipettare e sigillare rapidamente i campioni di etanolo.Poiché l'etanolo è volatile e il volume del campione è ridotto, una preparazione del campione incoerente o lenta porterà a risultati inaccurati. Conservare il residuo per l'analisi dei neurotrasmettitori. Il periodo di consumo di 20 minuti inizia dopo che il programma del computer Med Associates estende la leva nella camera e il ratto la preme per accedere a una bottiglia di soluzione da bere.Continuare a prelevare campioni per tutto il periodo di assunzione della bevanda; al termine di questo periodo, il programma informatico ritrae la bottiglia dalla camera. Mantenere l'animale nella camera per un ulteriore periodo post-bevanda di 20 minuti alla fine dell'esperimento di microdialisi. Dopo aver anestetizzato il ratto, rimuovere la sonda.Se l'animale non viene immediatamente soppresso in modo umano, sostituire l'obturatore per garantire la visualizzazione del percorso della sonda. Raccogliere il cervello entro tre giorni dall'esperimento. Analizzare i campioni insieme a standard esterni di etanolo mediante gascromatografo dotato di rivelatore a ionizzazione di fiamma, un autosampler in fase di testa riscaldato a 50 gradi Celsius e una colonna capillare con elio come fase mobile.Per registrare e analizzare i cromatogrammi, utilizzare un software per stazione di lavoro cromatografica per preparare il sistema all'analisi dell'etanolo. Utilizzare un bagno d'acqua a ricircolo per riscaldare la piastra del campionatore automatico e aprire le bombole di aria e idrogeno. Successivamente, avviare il programma di accensione.Quando è pronto, avviare una combustione della durata di 20 minuti, che decontamina la fibra. Preparare gli standard utilizzando un matraccio tarato da 100 millilitri per diluire 238 microlitri di etanolo al 95% con acqua fino a un volume finale di 100 millilitri. Utilizzare una diluizione seriale uno a uno per creare gli standard.Trasferire con pipetta gli standard in vial di vetro e sigillarli esattamente come i campioni sono stati preparati. Assicurarsi di eseguire anche un bianco di acqua insieme agli standard. Posizionare gli standard e i campioni nel vassoio del campionatore automatico e riscaldarli fino a quando l'intera aliquota liquida è stata vaporizzata.Per eseguire standard e campioni, creare un elenco dei campioni indicando quale campione si trova in ciascun alloggiamento del campionatore automatico, specificando che ogni campione deve essere perforato. Una volta instradati i file dati in una cartella selezionata, scegliere un metodo appropriato per i campioni e avviare l'analisi. Dopo che il sistema ha elaborato tutti i campioni, verificare che il programma abbia integrato correttamente ciascun picco.Tracciare l’altezza del picco in funzione di ciascuno standard esterno noto. Concentrazione di etanolo. Utilizzare la funzione lineare ottenuta dai punti per interpolare la concentrazione di etanolo di ciascun campione di dializzato.Questa figura mostra esempi di cromatogrammi per tre concentrazioni di standard di etanolo e uno per un campione di dializzato di ratto raccolto al termine della sessione di auto-somministrazione di etanolo. I picchi di etanolo dovrebbero essere relativamente simmetrici, avere tempi di ritenzione costanti e un rapporto segnale-rumore superiore a 10. Il mancato rispetto di questi criteri indica che il sistema necessita di manutenzione, una cromatografia di qualità e standard corretti producono una curva standard lineare che viene utilizzata per calcolare la concentrazione di etanolo nei campioni di dializzato raccolti da animali che auto-somministrano etanolo nel corso della loro auto-somministrazione.Le concentrazioni di etanolo nel dializzato derivato non sono corrette per il recupero del microdosatore in vivo e rappresentano solo una frazione della concentrazione tissutale cerebrale di etanolo. Se è richiesta una microdialisi quantitativa dell'etanolo, la frazione di estrazione dell'etanolo che diffonde dallo spazio extracellulare all'interno del microdosatore viene determinata sperimentalmente. Una volta acquisita padronanza, questa tecnica può essere eseguita correttamente in circa quattro o cinque ore.Questo varierà in base alla durata della sessione comportamentale. Il completamento con successo della fase di microdialisi dell'esperimento dipende in larga misura dalla qualità delle fasi preparatorie. Quando si tenta questa procedura, è importante assicurarsi che i ratti siano stati ben manipolati e che siano stati abituati a eventuali stimoli potenzialmente disturbanti che potrebbero verificarsi durante l'esperimento di dialisi, in modo che il comportamento di auto-somministrazione dell'animale non venga influenzato.

microdialysis-ethanol-during-operant-ethanol-self-administration

Research

Ricerca

JoVE Journal

Neuroscience

Neuroscienze

Dimostriamo la costruzione di camere di vapori dell'alcol utilizzando materiali facilmente reperibili che ospitano contemporaneamente 6 gabbie del mouse. Descriviamo ulteriormente il loro utilizzo in un modello murino di esposizione fetale da alcol equivalente a tutti i 3 trimestri di gravidanza umana. Questo paradigma espone gli animali durante la gestazione e giorni postnatali 1-12.

Costruzione di vapore Chambers utilizzato per esporre topi da alcol Durante l&#39;equivalente di tutti i tre trimestri di Sviluppo Umano

Semplici saggi per misurare la sensibilità all'etanolo e la rapida tolleranza in Drosophila facilitano l'uso di questo organismo modello per studiare questi importanti comportamenti correlati all'etanolo. Qui viene descritto un test relativamente semplice e scalabile per misurare la sensibilità all'etanolo e la rapida tolleranza nei moscerini.

Un poco costoso, test comportamentale scalabile per la misurazione etanolo sedazione sensibilità e tolleranza Rapid in<em&gt; Drosophila</em

Questo protocollo descrive un nuovo metodo ed efficiente di avviare rapidamente operante rispondere per etanolo in ratti che, contrariamente a metodi standard, non richiede privazione di acqua o saccarina / saccarosio dissolvenza di avviare rispondere.

Un metodo per valutare le proprietà di rinforzo di etanolo in ratti senza acqua privazione, Saccarina dissolvenza o di formazione accesso esteso

Descriviamo un protocollo per indurre gratificante e nonrewarding esperienze nei moscerini della frutta (Drosophila melanogaster) utilizzando il consumo di etanolo volontaria come misura per le modifiche negli stati di ricompensa.

Un modo semplice per misurare alterazioni in ricompensa il comportamento di ricerca Utilizzando<em&gt; Drosophila melanogaster</em

Disordine di uso di alcol (AUD) è un problema importante di salute nazionale e lo sviluppo di trattamenti più efficaci è necessaria per compensare le esigenze di questa popolazione di pazienti. A tal fine, il seguente protocollo utilizza due modelli beventi del roditore semplici per valutare l'efficacia preclinica di composti di piombo anti-alcol.

Murino bere modelli nello sviluppo delle farmacoterapie per l'alcolismo: bere nella scelta scura e due-bottiglia

Questo lavoro descrive un protocollo per quantificare i livelli di etanolo in un embrione di pesce zebra utilizzando la cromatografia del gas dello spazio della testa da metodi di esposizione adeguati alla lavorazione degli embrioni e all'analisi dell'etanolo.

Quantificazione dei livelli di etanolo negli embrioni di pesce zebra utilizzando la cromatografia dello spazio della testa

Questo studio mira a dimostrare che il paradigma Progressive-Ratio Computer-assisted Alcohol-Infusion System (CAIS) è un metodo affidabile e sensibile che può essere utilizzato per esaminare le proprietà motivanti associate all'auto-somministrazione di alcol negli esseri umani.

La motivazione per la ricompensa dell'alcol: predittori di auto-somministrazione di alcol per via endovenosa progressiva negli esseri umani

Presentato qui è un protocollo per il modello 2BC/CIE della dipendenza da alcol nei topi per studiare il disturbo da uso di alcol.

Esposizione cronica intermittente ai vapori di etanolo abbinata alla scelta di due bottiglie per modellare il disturbo da uso di alcol

Questo protocollo descrive un paradigma standard di consumo in gabbia domestica con accesso intermittente a due bottiglie per modellare il consumo di alcol nei ratti. Inoltre, fornisce istruzioni dettagliate per aumentare il protocollo standard con un sistema di rilevamento delle leccate fai-da-te che consente l'analisi microstrutturale del comportamento nel bere.

Modellazione del consumo di alcol nei roditori utilizzando l'uso di due bottiglie di alcol in gabbia domestica e l'analisi microstrutturale

Farmaci auto-amministrazione e vocalizzazioni ultrasoniche (USV) sono usati come valutazioni comportamentali in ricerca su animali, ma raramente in associazione. Lo scopo di questo articolo è quello di descrivere i vantaggi della registrazione durante USV droga auto-somministrazione procedure per valutare le risposte affettive di esperienza con la droga.

Valutazione di vocalizzazioni ultrasoniche Durante Drug autosomministrazione in topi

Impara la microdialisi cerebrale per monitorare l'etanolo durante l'auto-somministrazione operante nei ratti. Questa tecnica combina campionamento continuo con gascromatografia per analisi quantitativa in tempo reale.

Microdialisi di etanolo durante la determinazione operante auto-amministrazione ed etanolo etanolo mediante gascromatografia

Esplora altri video