Name: On-Chip Fenotipizzazione Endothelial infiammatoria (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-07-21T18:00:00.000+00:00
Duration: 12 min 43 s
Description: Impara la fenotipizzazione infiammatoria endoteliale su chip usando cellule endoteliali aortiche umane e microfluidica. Questo metodo quantifica l'adesione monocitica in tempo reale sotto stress di taglio differenziale.

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Questo lavoro è stato supportato dal NIH / NHLBI concessione R01 HL082689 a Scott I. Simon e Anthony G. Passerini.

1. Di coltura cellulare e Preparazione del substrato <ol><li> Tagliare supporti circolari da 3 pollici da una x 100 20 piatto di coltura tissutale mm (BD Falcon) usando un tornio. Sterilizzare substrati mediante immersione in etanolo al 70%. Posto in una capsula di Petri e mantello con 4 ml di collagene di tipo I (100 pg / ml) per 1 ora a temperatura ambiente, poi lavare con 4 ml 1 x PBS. </li><li> Sospendere Le cellule endoteliali aortiche (HAEC, passaggio 4-6) a 6.5x10 5 cellule / ml e di sementi mediante l&#39;applicazione di 1 ml direttamente al substrato. Posto a 37 ° C, 5% CO 2 incubatore e permettere alle cellule di aderire al substrato per 1 h. </li><li> Aggiungere 9 ml di crescita endoteliale Medio-2 (EGM-2) integrato con 1x antibiotico-antimicotico soluzione alle cellule. Modificare i media ogni 2 giorni fino a quando le cellule raggiungere il 90% di confluenza. </li><li> Mantenere cellule THP-1 in mezzo RPMI 1640 integrato con 10% FBS e 1x antibiotico-antimicotico soluzione. Cellule Passage quando raggiungono una densità di 10 6 cellule / ml. </li></ol> 2. Cella Shearing protocollo Le cellule sono condizionati in un costume cono-and-piastra di dispositivo a cella Shearing (CSD). Dettagli del dispositivo e specifiche di progetto sono documentati nella Tabella 1 e Figura 4. <ol><li> Preparare il CSD. Sterilizzare l&#39;alloggiamento camera con etanolo e risciacquare con PBS sterile. Riscaldare l&#39;alloggiamento a 37 ° C e livello per assicurare che il cono è perpendicolare al monostrato cellulare. Assemblare il substrato con le cellule dal fondo del contenitore e impostare il cono all&#39;altezza desiderata. </li><li> Utilizzare Leibovitz-15 (L-15) mezzo supplementato con BulletKit Endothelial come mezzo di taglio per mantenere il pH corretto in assenza di CO 2. Per stimolare infiammazione, aggiungere fattore di necrosi tumorale-α (TNF-α, 0,5 ng / ml) al mezzo di taglio e iniettare 6 ml nel dispositivo tramite una siringa collegata ad una porta di ingresso, avendo cura di non introdurre ariabolle nella camera. </li><li> Cellule di taglio ad un elevato sforzo di taglio grandezza costante (HSS, 15 dyne / cm 2) o una sollecitazione di taglio oscillatoria (OSS, 0 ± 5 dyne / cm 2, 1 Hz) per 4 ore. La SS desiderato si ottiene ruotando il cono di sopra delle celle, che è controllato con precisione con un micro-motore a passo, come precedentemente descritto 6 La parete SS in superficie (τ w) è approssimata da.: <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq1.jpg" alt="Equazione 1" /> dove μ è la viscosità del mezzo, ω è la velocità angolare del cono, e α è l&#39;angolo del cono (0,5 °). L&#39;allineamento cono con il substrato viene regolata entro 0,05 ° attraverso il livellamento di precisione e l&#39;altezza gap fissato a 20 ± 10 micron utilizzando un calibro di profondità per ridurre al minimo variazione circonferenziale e radiale in τ w. Il dispositivo è stato convalidato per garantire caratteristiche di flusso laminare. Rimuovere cells dal dispositivo e preparare l&#39;analisi di adesione dei monociti. </li></ol> 3. Fabbricazione di PDMS Microfluidic Camera <ol><li> Ottenere stampo master per numero di canale desiderato microfluidica e l&#39;altezza del canale a seconda dell&#39;applicazione. Le caratteristiche del disegno specifico utilizzato in questo protocollo sono dettagliati nella Tabella 1. Il metodo per creare questi è già ben documentata in letteratura. 1 In breve, la rete di canali è progettato utilizzando software CAD (Autodesk Inventor) e stampato a 5000 dpi su una trasparenza. Fotoresist negativo (SU8) viene filata su un wafer di silicio ad uno spessore di 100 um. La trasparenza è sovrapposta ed esposto alla luce UV. Non polimerizzato photoresist viene rimosso per generare la matrice positiva replica. </li><li> Per rendere la soluzione base di silicone PDMS mix con silicone agente di indurimento a 10:01 in peso in una barca a pesare e mescolare con una pipetta 5 ml sierologico. Fare attenzione a non grattare le paretidel peso della barca per evitare di aggiungere fiocchi di plastica per la soluzione. </li><li> Posizionare il wafer master in un piatto 100x15mm Petri e versare la soluzione PDMS nel piatto. </li><li> Coprire il piatto e metterla in un contenitore vuoto per 15 minuti per rimuovere le bolle. Dopo 15 minuti prendere la piastra di Petri e rimuovere le bolle in eccesso delicatamente soffiando aria sulla superficie. </li><li> Porre la capsula Petri in un forno per 1 ora a 70 ° C. Rimuovere il piatto e tagliare le camere microfluidici utilizzando una lama affilata. </li></ol> 4. Montaggio del dispositivo sul microscopio <ol><li> Accendere sorgente di luce al microscopio invertito e impostare riscaldamento a 37 ° C. Collegare il tubo di una siringa da 10 ml e riempirlo con acqua distillata in modo tale che non ci siano bolle. Posizionare la siringa nella pompa a siringa e portata impostata per indurre una parete di SS 1 dyne / cm 2. La sollecitazione di taglio parete (τ w) generata lungo la mezzeria del canale è approssimata utilizzando lo standardequazione per un parallelo-plate camera di flusso: <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq2.jpg" alt="Equazione 2" /> dove μ è la viscosità del mezzo, Q è la portata volumetrica, h è l&#39;altezza del canale, e w è la larghezza del canale. Nota: poiché i canali sono di larghezza finita effettivo τ w varia con w seconda del canale rapporto di aspetto, e le misurazioni vengono evitati al 25% più vicino alle pareti laterali. 1,7 </li><li> Posizionare PDMS camera in acqua e utilizzare una micropipetta 100 microlitri per rimuovere aria dai singoli canali. Collegare l&#39;alimentatore alla camera a vuoto facendo attenzione che la valvola è disattivata. </li><li> Porre Petri con monostrato HAEC rispetto all&#39;obiettivo. Posizionare la camera di PDMS sulla piastra di Petri e cautela impostato sul monostrato HAEC, assicurando che non si formano bolle d&#39;aria tra il dispositivo e il monostrato. Ruotare la valvola in modo che il vuoto è acceso e la camera è fissato saldamente. </li&gt; <li> Tagliare 19 aghi calibro smorzare tale che ci sia solo 5 mm di sinistra metallo. Riempire il serbatoio di plastica con il tampone e mettere in ingresso PDMS camera. Ripetere per appropriato numero di canali da utilizzare. Collegare il tubo dalle pompe siringa per PDMS uscite canale. </li></ol> 5. Adesione Assay monociti sotto stress Shear <ol><li> Sospensione cellule THP-1 a 2x10 6 cellule / ml in HBSS + Ca 2 + / Mg 2 + + HSA 0,1%. Attivazione cellule THP-1 mediante incubazione con stromale fattore-1 derivato (SDF-1, 50 ug / ml) per 15 min a temperatura ambiente. </li><li> Accendere pompa a siringa per stabilire un flusso, quindi si aggiungono 50 microlitri di sospensione cellulare al serbatoio senza introdurre bolle d&#39;aria. Quando il flusso è completamente sviluppato, iniziare l&#39;acquisizione dei dati. </li><li> Eseguire per 5 min a velocità di flusso del caso, aggiungendo tampone al serbatoio se la soluzione diventa bassa. Continuare tampone scorre nei canali per lavare le cellule non legate nella corrente di flusso. </li></ol> 6. Acquisizione dati e analisi <ol><li> Acquisire sequenze di immagini digitali a 3 fotogrammi / s per 2 min a seguito del flusso pienamente sviluppata lungo l&#39;asse longitudinale del canale a 3 posizioni nel canale, facendo attenzione a non registrare immediatamente dopo l&#39;ingresso o prima o porte di uscita 25% in più vicina al lato pareti. </li><li> Contare il numero di cellule arrestate per campo identificando loro fase aspetto brillante nello stesso piano focale del monostrato. </li><li> Cell arresto impresa è definita dal movimento &lt;cella diametro ½ in 10 s. Dati di una media di 3 campi aleatori per canale e quantificare utilizzando il software ImageJ. </li></ol> 7. Risultati rappresentativi Anche se l&#39;endotelio vascolare è uniformemente esposta agli agonisti che contribuiscono a infiammazione sistemica, l&#39;aterosclerosi è una malattia focale che si sviluppa preferenzialmente ai siti di disturbo del flusso nelle arterie, implicando eterogeneità spaziale in funzione endoteliale. 8 </sup&gt; mediatori circolanti infiammatorie come il TNF-α sono elevati nel siero umano in condizioni di stress metabolico e correlare con compromissione della funzione endoteliale. 9, 10, TNF-α induce una risposta ben caratterizzato in CE che include up-regolazione di molecole di adesione cellulare (CAM : ad esempio, VCAM-1, ICAM-1, E-selectina) e chemochine che reclutano monociti dal circolo, un segno distintivo della lesione aterosclerotica primi 11 emodinamica è un importante regolatore del fenotipo endoteliale infiammatoria 12 Alta tensione di taglio (HSS. magnitudo.; ad esempio 15 dyne / cm 2) o sollecitazione di taglio pulsatile (PSS, ad esempio 15 ± 5 dyne / cm 2) associati a siti di resistenza a aterosclerosi in arterie down-regolano TNF-α-risposte indotte. Al contrario, lo stress shear a bassa magnitudo (LSS: ad esempio, 2 dyne / cm 2) o di taglio oscillatoria (OSS, ad esempio 0 ± 5 dyne / cm 2), caratteristiche dei siti sensibili in vivo, esacerbare cytokine-indotta infiammazione. 13, 14 I nostri dispositivi microfluidici PDMS fornire una piattaforma per la realizzazione di studi meccanicistici per verificare ipotesi relative alla sovrapposizione di stress metabolico con i fattori idrodinamici nella regolazione della funzione endoteliale e la patologia. L&#39;utilità e la versatilità del metodo è ampiamente illustrata attraverso i seguenti risultati rappresentativi. <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig1.jpg" alt="Figura 1" /> Figura 1. Shear stress modula differenziale THP-1 di adesione delle cellule al TNF-alfa monostrati infiammate endoteliali. Questi dati sono stati acquisiti utilizzando il protocollo dettagliato descritto in precedenza e documentato nel video. Monostrati HAEC sono stati esposti contemporaneamente a una bassa dose di citochina infiammatoria TNF-α (0,5 ng / ml, ~ EC 50 per VCAM-1 up-regulation) e sia HSS (15 dyne / cm 2) o OSS (0 ± 5 dynes / cm 2, 1 Hz) in un CSD personalizzato per 4 ore come descriletto nel protocollo dettagliato. THP-1 arresto cellulare è stata quantificata sotto flusso di taglio in una camera di flusso PDMS. Questa linea cellulare che imita il fenotipo di monociti umani è stato scelto per la sua riproducibilità e facilità d&#39;uso. HSS attenuato la risposta infiammatoria rispetto agli OSS, con conseguente diminuzione THP-1 arresto cellulare. I dati sono stati analizzati mediante Student t-test e sono rappresentati come media ± SEM di 3 esperimenti indipendenti. Adattato con il permesso di DeVerse et al. 5 I dati che seguono dimostrano la versatilità del nostro approccio con esempi dal nostro lavoro pubblicato. Partenze dal protocollo di cui sopra sono indicati, se del caso. <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig2.jpg" alt="Figura 2" /> Figura 2. Modulazione di citochine indotta VCAM-1 e reclutamento dei monociti in un gradiente di sollecitazione di taglio. A) HAEC monostrati sono state stimolate con TNF-α (0,3 ng / ml) per 4 ore sotto flow in uno VMMC progettato sulla base Hele-Shaw teoria del flusso. 15 A decremento lineare in grandezza SS lungo l&#39;asse del canale è stato ottenuto progettando le pareti laterali della camera di coincidere con la ottimizza di un flusso due stagnazione dimensionali e di forma alla fine del canale per abbinare i iso-potenziali linee. La sollecitazione di taglio parete (τ w) generata lungo la mezzeria di questo canale ad una distanza assiale dall&#39;ingresso (x) è dato da: <img src="/files/ftp_upload/4169/4169eq3.jpg" alt="Equazione 3" /> dove μ è la viscosità del mezzo, Q è la portata volumetrica, h è l&#39;altezza del canale, w 1 è la larghezza del canale di ingresso, ed L è la lunghezza totale del canale. Q è stato scelto per generare un gradiente di grandezza da 16 SS dyne / cm 2 a monte che a 0 al punto di stagnazione &quot;a&quot; appena prossimale al outlet. B)-C), VCAM-1 espressione è stata misurata in situ tramite microscopia immunofluorescenza usando anticorpi coniugati punti quantici e presentati come percentuale di intensità di fluorescenza media (MFI) di controllo non stimolato statico. SS non modulare il livello basale di VCAM-1, che è basso in HAEC non stimolate (triangoli grigi). Tuttavia, espressione di VCAM-1 è aumentato rispetto al TNF-α a grandezze LSS, con un picco a ~ 2 dyne / cm 2 e tornare al TNF-α basale o inferiore a grandezze di taglio di 5 dyne / cm 2 (quadrati neri). D) monociti (10 6 / ml) sono stati perfusi a 2 dyne / cm 2 per 5 min in canali di flusso paralleli su monostrati precondizionati come in A). Reclutamento dei monociti all&#39;endotelio quantitativamente correlato con l&#39;espressione di VCAM-1 in un ampiezza di taglio dato stress. In particolare, la capacità di sondare espressione di VCAM-1 e il reclutamento dei monociti con fine risoluzione spaziale in un monolayer rivelato cambiamenti significativi su un range limitato in grandezza SS che non dovrebbe essere apprezzato dagli applicando valori discreti poche di taglio in esperimenti separati. I dati sono stati analizzati mediante ANOVA misure ripetute e valutate differenze di Newman-Keuls posttest, * P &lt;0,05 da TNF-α in condizioni statiche. I dati sono media ± SEM di 3-6 esperimenti indipendenti. Adattato con il permesso di Tsou et al. 2 <img src="/files/ftp_upload/4169/4169fig3.jpg" alt="Figura 3" /> Figura 3. Lipoproteine ​​ricche di trigliceridi (TGRL) modulare citochine indotta infiammazione in proporzione a livelli di trigliceridi di siero e VCAM-1 espressione. HAEC monostrati sono state stimolate con TNF-α (0,3 ng / ml) per 4 ore simultaneamente con TGRL (10 mg / dl ApoB) isolato da soggetti umani dopo un pasto ricco di grassi nella cultura statica. A) espressione di VCAM-1 è stato misurato separatamente in sospeso CE mediante citometria a flussoe adesione monociti quantificato utilizzando un VMMC come descritto nel protocollo dettagliato. I dati sono presentati come variazione% di TNF-α. Arresto Monocyte varia in proporzione diretta alla endoteliale espressione di VCAM-1, che ha aumentato direttamente con il livello di trigliceridi di siero. B) Monocyte arresto per un sottoinsieme di pro-infiammatorie donatori è abrogata in presenza di un anticorpo VCAM-1 blocco. La significatività è stata determinata la Student t-test accoppiato, significa ± SEM di 3-5 esperimenti indipendenti. Adattato con il permesso di Wang et al. 4

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</ol>

Non ci sono conflitti di interesse dichiarati.

Si descrivono l&#39;uso di dispositivi microfluidici PDMS per la valutazione on-chip di endoteliale fenotipo infiammatoria attraverso l&#39;imaging in tempo reale di espressione CAM e adesione monociti. Uno dei principali vantaggi del nostro approccio risiede nella capacità di quantificare i risultati associati a disfunzione endoteliale in cellule esposte a mediatori infiammatori come i lipidi alimentari e citochine in condizioni idrodinamiche definiti che rispecchiano shear stress nei vasi aterogene. Il VMMC facilitare...

<table border="1"><tbody><tr><td> Voce </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> 100 x 20mm piastre di Petri </td><td> BD Falcon </td><td> 353003 </td></tr><tr><td> Etanolo 95% </td><td> EMD Chemicals </td><td> EX0290-1 </td></tr><tr><td> DPBS </td><td> Cellgro </td><td> 21-031-CV </td></tr><tr><td> Collagene di tipo I Tail derivata Rat </td><td> Gibco </td><td> A10483-01 </td></tr><tr><td> Cellule endoteliali umane aortica </td><td> Genlantis </td><td> PH30405A </td></tr><tr><td> Antibiotico-antimicotica Solution </td><td> Invitrogen </td><td> 15240-062 </td></tr><tr><td> BulletKit endoteliale </td><td> Lonza </td><td> CC-4176 </td></tr><tr><td> Endoteliali basali Media-2 </td><td> Lonza </td><td> CC-3156 </td></tr><tr><td> Siringhe da 10 ml </td><td> BD Falcon </td><td> 309604 </td></tr><tr><td> Tubi in poliuretano </td><td> Tygon </td><td> ABW0001 </td></tr><tr><td> Leibovitz-15 supporti </td><td> Gibco </td><td> 11415-069 </td></tr><tr><td> Sylgard 184 Base in silicone elastomero </td><td> Dow Corning </td><td> 184 </td></tr><tr><td> Sylgard 184 elastomero siliconico Catalizzatore </td><td> Dow Corning </td><td> 184 </td></tr><tr><td> SU8 Photoresist Maestro Wafer </td><td> UC Davis Pan Lab </td><td> N / A </td></tr><tr><td> Eclipse TE200 microscopio invertito </td><td> Nikon </td><td> Eclipse TE200 </td></tr><tr><td> Pompa a siringa </td><td> Harvard Apparatus </td><td> PHD2000 </td></tr><tr><td> 19 gauge ago ipodermico </td><td> Kendall </td><td> 8881 </td></tr><tr><td> THP-1 linea cellulare monocitica </td><td> ATCC </td><td> TIB-202 </td></tr><tr><td> HBSS (Hanks soluzione salina tamponata) con Ca 2 + / Mg 2 + </td><td&gt; Gibco </td><td> 14025-092 </td></tr><tr><td> Fattore di Necrosi Tumorale alfa (TNF-α) </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 210-TA-010 </td></tr><tr><td> Stromal Factor Derivato - 1 (SDF-1) </td><td> R &amp; D Systems </td><td> 350-NS-010 </td></tr><tr><td> RPMI 1640 </td><td> Cellgro </td><td> 10-040-CV </td></tr><tr><td> Albumina serica umana (HSA) </td><td> ZLB Behring </td><td> NDC 0053-7680-32 </td></tr></tbody></table> Tabella 2. Reagenti e attrezzature specifiche.

on-chip fenotipizzazione endothelial infiammatoria

On-Chip Endothelial Inflammatory Phenotyping

Aterogenesi è potenziato da alterazioni metaboliche che contribuiscono ad un elevato stato di infiammazione sistemica con conseguente disfunzione endoteliale. Tuttavia, i primi cambiamenti funzionali dell&#39;endotelio che indicano il livello individuale di rischio non sono direttamente valutato clinicamente per aiutare strategia terapeutica guida. Inoltre, la regolazione di infiammazione emodinamica locali contribuisce alla non casuale distribuzione spaziale di aterosclerosi, ma i meccanismi sono difficili da delineare in vivo. Descriviamo un approccio lab-on-a-chip basato su test di quantitativamente perturbazione metabolica di eventi infiammatori nelle cellule endoteliali umane (CE) e dei monociti in condizioni di flusso precise. Metodi standard di litografia soft sono usati per microfabricate vascolari camere mimetici microfluidica (VMMC), che sono legati direttamente alla coltura monostrati CE. 1 Questi dispositivi hanno il vantaggio di utilizzare piccoli volumi di reagenti, mentrefornendo una piattaforma per l&#39;imaging direttamente gli eventi infiammatori a livello della membrana di CE esposto ad un ben definito campo di taglio. Abbiamo applicato con successo questi dispositivi per indagare citochine, lipidi 2-3, 4 e 5 RAGE indotta infiammazione in umano aortica CE (HAEC). Qui documentare l&#39;uso della cella VMMC di dosaggio monocitiche (THP-1) laminazione e arresto su monostrati HAEC che sono condizionati alle caratteristiche di taglio differenziali e attivato dalla citochina infiammatoria TNF-α. Studi come questi stanno fornendo informazioni meccanicistica in atherosusceptibility in caso di fattori di rischio metabolici.

Camere di flusso Microfluidic incisi da fotolitografia e fabbricati da PDMS sono applicate per sondare gli esiti funzionali associati alla disfunzione CE e l&#39;infiammazione. In un esperimento rappresentativo, la capacità di sforzo di taglio differenziale di modulare l&#39;adesione cellulare monocitica di citochina attivato CE monostrati è dimostrata.

On-Chip Fenotipizzazione Endothelial infiammatoria

L'aterogenesi è potenziata da anomalie metaboliche che contribuiscono a uno stato di infiammazione sistemica accentuata, con conseguente disfunzione endoteliale...

L'obiettivo di questo video è dimostrare una tecnica di laboratorio su un chip per caratterizzare lo stato infiammatorio delle cellule endoteliali. Per iniziare, le cellule endoteliali aortiche umane vengono coltivate fino a confluenza su un substrato per colture cellulari, quindi inserite in un dispositivo di taglio a piastra Conan. Le cellule vengono trattate con la citochina pro-infiammatoria, TNF alpha, ed esposte contemporaneamente a condizioni di stress da taglio differenziale per quattro ore, controllando con precisione la rotazione del cono sopra il substrato. Lo stress da taglio modula una risposta infiammatoria ben caratterizzata alla citochina.Ciò include l'upregolazione di molecole di adesione come VCA-1 e ICAM-1. Il substrato viene trasferito sul palchetto del microscopio, dove un dispositivo microfluidico A-P-D-M-S viene sigillato sotto vuoto direttamente al monolayer, creando canali di flusso. Cellule monocitiche attivate, linee cellulari THP-1, vengono fatte fluire sopra l'hs precondizionato, dove si legano in proporzione al livello di espressione delle molecole di adesione cellulare.Lo stato infiammatorio dell'endotelio viene determinato quantificando il numero tot

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In questo video, dimostriamo la visualizzazione in tempo reale delle interazioni cellula del sangue-endoteliale nelle vene mesenteriali di un modello murino iniettato per via intraperitoneale con lipopolisaccaride.

Microscopia intravitale per analizzare le interazioni tra cellule del sangue ed endoteliali in un modello murino di infiammazione

Endotelio vascolare controlla strettamente reclutamento leucocitario. Diapedesi inadeguata contribuiscono a malattie infiammatorie umane. Di conseguenza, alla ricerca di nuovi elementi regolatori dell'attivazione endoteliale è necessaria ideare terapie migliori per disordini infiammatori. Qui, descriviamo una metodologia globale per caratterizzare nuovi regolatori endoteliale che possono modificare del leucocita traffico durante l'infiammazione.

Saggi per caratterizzare nuovi endoteliale regolatori coinvolti nella risposta infiammatoria di screening

Questo protocollo dettagliato fornisce una descrizione dettagliata della messa a punto sperimentale e analisi dei dati per la valutazione delle risposte infiammatorie in hiPSC-ECs e l'analisi di adesione del leucocita sotto flusso fisiologico.

Saggio di microfluidic per la valutazione di adesione del leucocita alle cellule endoteliali derivate da cellule staminali pluripotenti indotte umane (hiPSC-ECs)

Lo sviluppo di importanti eventi cardiovascolari avversi, che influenzano la prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronarica, sono influenzati dall'entità del danno coronarica e dalla riparazione vascolare. L'uso di nuovi biomarcatori cellulari e solubili, reattivi ai danni vascolari e alla riparazione, sono utili per prevedere lo sviluppo di MACE e prognosi.

Cellule progenitrici coronariche e biomarcatori solubili nella prognosi cardiovascolare dopo l'angioplastica coronaria

Gli organoidi intestinali derivati dalla biopsia e le tecnologie organ-on-a-chips sono combinati in una piattaforma microfisiologica per ricapitolare la funzionalità intestinale specifica della regione.

Combinazione di organoidi umani e tecnologia Organ-on-a-Chip per modellare la funzionalità specifica della regione intestinale

Qui, descriviamo un protocollo, il metodo di coltura cellulare endoteliale estesa (EECM), che consente la differenziazione delle cellule staminali pluripotenti in cellule simili alle cellule endoteliali microvascolari del cervello (BMEC). Queste cellule mostrano l'espressione della molecola di adesione delle cellule endoteliali e sono quindi un modello di barriera emato-encefalica umana adatto a studiare le interazioni delle cellule immunitarie in vitro.

Differenziazione delle cellule staminali pluripotenti indotte umane in cellule simili a cellule microvascolari simili a cellule endoteliali microvascolari del cervello con un fenotipo immunitario maturo

Isotachophoresis (ITP) è una separazione solido elettrocinetico e tecnica preconcentrazione con applicazioni che vanno dal rilevamento della tossina alla preparazione del campione. Esaminiamo i principi fisici di ITP e la metodologia di applicazione di questa tecnica per due applicazioni specifiche esempio: separazione e la rilevazione di piccole molecole e di purificazione degli acidi nucleici da lisato di coltura cellulare.

On-Chip Isotachophoresis per separazione degli ioni e purificazione di acidi nucleici

Lensfree ottico tomografia è una tecnica tridimensionale microscopia che offre una risoluzione spaziale di &lt;1 um x &lt;1 um x &lt;3 pm di x, y e Z, rispettivamente, per un grande volume di imaging di 15-100...

Lensfree On-chip Tomographic Microscopia Utilizzando Multi-angolo di illuminazione e Pixel Super-risoluzione

Le caratteristiche meccaniche del glicocalice endoteliale sono state misurate utilizzando sfere indentazione micron di dimensioni su cantilever AFM. Le cellule endoteliali sono state coltivate in una camera personalizzata in condizioni fisiologiche di flusso per indurre l'espressione glicocalice. I dati sono stati analizzati utilizzando un modello di pellicola sottile per determinare lo spessore glicocalice e modulo.

Quantificare le proprietà meccaniche del glicocalice endoteliale con microscopia a forza atomica

Questo protocollo commenti elettrico Cell-substrato Impedance Sensing, un metodo per registrare ed analizzare lo spettro di impedenza di cellule aderenti per la quantificazione di adesione cellulare, la proliferazione, motilità, e le risposte cellulari agli stimoli farmacologici e tossici. Rilevamento di permeabilità endoteliale e la valutazione di cellula-cellula e cellula-substrato contatti sono enfatizzati.

Elettrico Cell-substrato Impedance Sensing per la quantificazione dei Endothelial proliferazione, Barriera funzione e motilità

Impara la fenotipizzazione infiammatoria endoteliale su chip usando cellule endoteliali aortiche umane e microfluidica. Questo metodo quantifica l'adesione monocitica in tempo reale sotto stress di taglio differenziale.

On-Chip Fenotipizzazione Endothelial infiammatoria

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