Aortica trapianto ortotopico in Mouse per lo studio della malattia vascolare

Lo scopo di questa procedura è trapiantare l'aorta addominale di un topo donatore in un topo ricevente allogenico. Ciò si ottiene ottenendo prima l'aorta del donatore. Successivamente, il sito di innesto viene costruito nell'animale ricevente.

L'aorta nativa dell'animale ricevente viene quindi sezionata e divisa. Il passaggio finale consiste nell'utilizzare due anastomosi vascolari end-to-end per impiantare l'aorta del donatore. In definitiva, questa procedura può essere utilizzata per studiare lo sviluppo della malattia vascolare post-trapianto in combinazioni di ceppi allogenici.

Il vantaggio di questo metodo rispetto, ad esempio, al trapianto di cuore eterotopico, è che è più facile eseguire l'analisi morfometrica perché i vasi sono di dimensioni uniformi. Inoltre, il vaso non è circondato da tessuto parenchimale, che può essere circondato da infiltrati cellulari e altre cose che possono complicare l'analisi I dati generati. L'uso di questa tecnica può essere particolarmente utile per illustrare i meccanismi coinvolti nella malattia vascolare post-trapianto, il che significa un problema intrattabile nel trapianto clinico umano.

Per ridurre al minimo gli effetti dello stress e massimizzare le loro riserve energetiche, mantenere gli animali nel vivaio per almeno 72 ore prima dell'intervento. Il giorno dell'intervento, posizionare una tavola operatoria in metallo sopra un termoforo impostato a 35-38 gradi Celsius. Quindi, dopo l'anestesia, rimuovere i peli sull'addome ventrale dell'animale.

Utilizzare del nastro adesivo da laboratorio per montare l'animale in una posizione a forma di aquila divaricata sul tavolo operatorio, quindi disinfettare l'intera area rasata degli animali tre volte con un disinfettante seguito da etanolo utilizzando forbici sterili. Successivamente, fai un'incisione attraverso la parete del corpo per esporre i visceri addominali. Quindi utilizzare un batuffolo di cotone sterile per spingere i visceri di lato su un pezzo di garza sterile inumidita con soluzione salina calda, esponendo i grandi vasi dell'addome.

Ora, con molta attenzione smussato, sezionare l'aorta addominale lontano dal tessuto circostante, compreso lo speleologo della vena inferiore, e poi sollevare e cauterizzare con cura l'arteria lombare. La sezione dell'aorta per la dissezione deve essere al di sotto dei vasi renali e al di sopra della biforcazione dell'aorta nelle arterie femorali. Dopo aver identificato l'area, la sutura del pneumatico appena sotto le arterie renali e un'altra appena sopra la biforcazione.

Quindi, usa le forbici per dividere l'aorta e poi tieni con molta attenzione un'estremità del vaso e gocciola la soluzione salina eparinizzata in modo che scorra attraverso il vaso per gravità. Quindi maneggiando le estremità del vaso il meno possibile. Rimuovere l'innesto e metterlo immediatamente in un contenitore di soluzione salina ghiacciata.

Dopo aver somministrato l'anestesia e l'analgesia all'animale ricevente, radere l'addome ventrale come appena mostrato. Applicare l'unguento oftalmico alla gentamicina sugli occhi per evitare che si secchino, quindi igienizzare l'addome come appena dimostrato per garantire un'adeguata disinfezione. Ora fai un'incisione sulla linea mediana attraverso la pelle e la parete del corpo in più fasi.

Quindi inserire un divaricatore per tenere aperta l'incisione addominale, puntando il gruppo vite verso l'estremità posteriore dell'animale per mantenere la maggior parte del morsetto fuori mano. Quindi posizionare una garza sterile imbevuta di soluzione salina sull'intestino. Quindi tenendo delicatamente la garza in posizione con un dito.

Inserisci un batuffolo di cotone sterile sotto l'intestino e riflettelo delicatamente in modo che l'intestino si trovi sopra la garza. Metti un altro pezzo di garza sterile sull'intestino e bagnalo con soluzione fisiologica. Dopo aver rimosso delicatamente il tessuto adiposo che copre l'ATA e lo speleologo della vena inferiore, utilizzare una pinza per sezionare accuratamente l'aorta infrarenale dallo speleologo della vena inferiore.

Ora libera un'area abbastanza grande da fornire spazio per due pinze e con abbastanza vasi in modo tale che, una volta diviso, ci sia abbastanza vaso a cui l'innesto può essere suturato. Si noti che la sutura nera può essere utilizzata per sentire il peso lungo il vaso. Durante la dissezione, cercare i rami dei vasi, cauterizzando i rami con un cauterizzatore a bassa temperatura, se necessario.

Successivamente, inserire un morsetto vascolare appena sotto l'arteria renale e un altro morsetto vascolare appena sopra la biforcazione. Quindi tagliare l'aorta. In questo caso, il taglio viene effettuato più vicino alla biforcazione perché un vaso di ramificazione è stato cauterizzato vicino al centro delle due pinze, rendendolo un sito poroso per l'anastomosi, le estremità dell'aorta di solito si ritraggono, lasciando uno spazio di circa cinque millimetri.

Controlla l'emostasi. Se le pinze funzionano correttamente, dopo il taglio dovrebbe fuoriuscire solo una piccola quantità di sangue. Quindi, sciacquare le estremità tagliate dell'aorta con soluzione salina eparinizzata e quindi rimuovere la soluzione in eccesso.

Ora fissa l'innesto in posizione usando tre suture discontinue a ciascuna estremità. Quindi sutura un lato dell'anastomosi a ciascuna estremità e riempi il resto con sette-otto suture discontinue. Se si preferisce una sutura in esecuzione, fare attenzione che le pareti dei vasi rimangano rilassate e che non si causi stenosi all'anastomosi.

Ora rimuovi con cautela il morsetto all'estremità cranica dell'aorta e cerca perdite sulle linee di sutura. Quindi, premere delicatamente sull'aorta sopra il sito dell'anastomosi con un applicatore di cotone bagnato e rimuovere il secondo morsetto Premere leggermente e rilasciare l'aorta un paio di volte per verificare che il vaso sia pervio. L'innesto verrà immediatamente perfuso e dovrebbe essere visibile un polso.

A questo punto, togliete la garza che copre gli intestini e rimetteteli in posizione, mantenendo il loro normale orientamento anatomico ed evitando che si attorciglino. Utilizzare una sutura Vicryl a cinque zero per chiudere lo strato muscolare e quindi chiudere la pelle con una sutura a prolina a cinque zero o sei zero. Trattare il topo per via sottocutanea con carprofene per aumentare l'analgesia prima di terminare l'anestesia, quindi somministrare al topo da 0,5 a 0,8 millilitri di soluzione fisiologica con la stessa radice.

Infine, metti il topo in una gabbia riscaldata per il recupero e monitora attentamente l'animale. A 12 e 24 ore dall'operazione, somministrare rispettivamente buprenorfina e carprofene per via sottocutanea all'animale. Questa prima figura mostra un innesto aortico.

Notare le linee di sutura come indicato dalle frecce bianche qui. Viene illustrato un tipico esperimento in cui la sopravvivenza del ricevente è stata seguita per un periodo di 56 giorni. Il gruppo di controllo era composto da topi selvatici di tipo C 57 BL six di FVB trapiantati con aorta C intestinale.

Il gruppo sperimentale era composto da C 57 BL 6 di destinatari FVB, carenti nell'espressione dell'eme ossigenasi uno. Questo knockout provoca la trombosi degli innesti entro 24 ore. In particolare, ciò ha provocato la morte di tutti i destinatari.

Quest'ultima figura mostra le misurazioni ecografiche della vena inferiore, dello speleologo e dell'aorta addominale in un animale normale e in un ricevente di trapianto. Si noti che l'innesto è pervio e simile nell'aspetto all'aorta non trapiantata. Come hai visto, i tessuti sono molto delicati e piccoli, quindi devi tenere a mente che questa procedura è sicuramente un'abilità acquisita e quindi ci vorrà un bel po' di pratica prima che la procedura possa essere eseguita con successo, di routine, una volta padroneggiata.

Questa tecnica può essere eseguita entro un'ora se eseguita correttamente.