Lavaggio broncoalveolare (BAL) di ricerca; ottenere un'adeguata Yield Esempio

Lo scopo generale di questa procedura è eseguire un lavaggio broncoalveolare in modo sicuro ed efficace. Questo viene raggiunto innanzitutto assicurando la sicurezza, la collaborazione e il comfort dei soggetti selezionati, utilizzando criteri di inclusione ed esclusione chiari.

Vengono eseguiti anche controlli e osservazioni pre-procedurali. Successivamente, una volta nella sala di broncoscopia, dopo aver verificato tutta l'apparecchiatura, al soggetto viene somministrato anestetico locale e viene offerta una sedazione cosciente. Poi, dopo l'intubazione delle corde vocali, il broncoscopio viene avanzato in una posizione adeguata all'interno del LBR.

Questo garantisce un buon rendimento in volume del liquido di lavaggio broncoalveolare (BAL). Infine, il liquido di BAL viene raccolto mediante aspirazione manuale delicata ed è quindi trasportato senza ritardo su ghiaccio per l'immediata lavorazione in laboratorio. In definitiva, questa tecnica permette di raccogliere le cellule preservandone la vitalità, favorendone la crescita in colture es vivo.

Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti utilizzati dai medici specializzati in pneumologia e terapia intensiva, spesso definiti lavaggi bronchiali, lavaggio broncoalveolare o lavaggio intestinale, volti a ottenere un beneficio diagnostico o terapeutico, consiste nell’utilizzo di un’aspirazione manuale delicata del liquido instillato. Questa procedura è progettata per massimizzare il volume di liquido recuperato dall’intestino e applicare una forza di taglio minima sull’epitelio cigliato, al fine di preservare la struttura e la funzionalità delle cellule presenti nel liquido intestinale. La procedura di lavaggio broncoalveolare viene eseguita in regime ambulatoriale, con appropriati controlli prima e dopo l’intervento secondo le linee guida standard dell’ospedale, inclusa la verifica che il modulo di consenso informato sia stato correttamente firmato e datato.

All'arrivo, il soggetto viene accolto dall'infermiere specializzato nella ricerca respiratoria, che effettua tutti i controlli preliminari necessari, verificando in particolare che il soggetto sia a digiuno da almeno quattro ore per cibi solidi e da due ore per liquidi. Se il soggetto soddisfa tutti i criteri richiesti, indossa un camice ospedaliero e vengono effettuate le osservazioni pre-procedura, inclusi i rilevamenti di pressione arteriosa, frequenza cardiaca e saturazione di ossigeno. Viene inserita una cannula di piccolo calibro, preferibilmente nella mano sinistra.

Questo rimarrà in C due fino al termine del periodo di recupero post-procedura. Il soggetto viene quindi trasferito nell'ambiente per broncoscopia, dove è presente un broncoscopista esperto in ricerca respiratoria. Successivamente, l'apparecchiatura di monitoraggio viene collegata al soggetto.

Questo include un ECG a tre derivazioni, un manometro A, fig o e un ossimetro di pulso. Non è necessario un supporto anestetico. Una cannula nasale viene applicata a tutti i volontari prima dell'inserimento del broncoscopio; l'ossigeno viene somministrato se la saturazione scende al di sotto del 96%, fino a quattro litri al minuto.

A questo punto, l'operatore esegue controlli preliminari sul broncoscopio. Ciò include verificare l'efficacia dell'aspirazione aspirando soluzione fisiologica sterile. Una volta accertato che il broncoscopio funziona in modo ottimale, viene somministrata un'anestesia topica ai passaggi nasali e alla mucosa orale del soggetto, applicando rispettivamente instillagel e Xylocaine.

Se la sedazione è appropriata ed è stata richiesta dal soggetto, viene somministrata per via endovenosa una dose adeguata di midazolam. Come per tutte le procedure che prevedono l'uso di anestetici, un agente antagonista appropriato deve essere immediatamente disponibile. Inoltre, assicurarsi che siano presenti anche apparecchiature per la rianimazione.

Il soggetto viene intubato attraverso il naso. Se ciò non è possibile, l'intubazione può essere effettuata attraverso la bocca, a condizione che venga utilizzata una pinza adatta a livello della laringe. L'anestesia topica viene somministrata utilizzando da quattro a sei millilitri di lidocaina al 4% una volta superate le corde vocali.

Inoltre, si somministra un'anestesia mucosale utilizzando aliquote di due millilitri di lidocaina al 2% alla carina, al punto di divisione del lobo inferiore destro e del lobo medio destro o LMD, e all'ingresso del LMD. Infine, il broncoscopio raggiunge il lobo medio destro e idealmente viene posizionato nel segmento mediale in una posizione distale sicura. Eseguire il test del battito di ciglia utilizzando il pulsante di aspirazione per assicurarsi che il broncoscopio non sia posizionato troppo in profondità, condizione che potrebbe causare un collasso delle vie aeree.

Quattro siringhe da 60 millilitri sono riempite in anticipo con un volume di 60 millilitri, due volumi da 50 millilitri e un volume da 40 millilitri di soluzione salina sterile riscaldata. Quando il soggetto e il broncoscopista sono pronti, la prima siringa di soluzione salina viene instillata dall'assistente alla broncoscopia. Mentre il broncoscopista mantiene la posizione nel LBM (Lobo Medio Destro), l'assistente esegue un'aspirazione manuale delicata utilizzando lo stesso canale e la stessa siringa.

La procedura viene quindi ripetuta altre tre volte, utilizzando ciascuna delle siringhe successivamente con un volume massimo di 200 millilitri impiegato in questa tecnica specifica; il liquido di lavaggio broncoalveolare (BAL) recuperato viene espulso delicatamente in contenitori di plastica che possono essere già pre-siliconati e mantenuti su ghiaccio fondente. La pre-siliconizzazione inibisce l'adesione cellulare e massimizza il recupero cellulare. Il liquido di BAL appare torbido alla luce, con bolle superficiali simili a sapone formate da proteine e surfattanti.

Infine, il broncoscopio viene lentamente ed completamente rimosso. Il soggetto viene quindi trasferito per il recupero monitorato e il liquido di lavaggio broncoalveolare viene trasportato senza indugio su ghiaccio. Per l'elaborazione immediata, consentire al soggetto di riprendersi fino a quattro ore sotto la supervisione di un'infermiera specializzata in ricerca respiratoria.

Durante questo periodo, consentire al soggetto di riposare ma di non mangiare né bere fino a quando non siano trascorsi almeno 60 minuti dalla procedura. Una volta che la capacità di deglutire è stata valutata come sicura, questa misura ha lo scopo di ridurre il rischio di aspirazione. Le osservazioni post-procedurali vengono monitorate e registrate.

Viene effettuata un'esame clinico prima della dimissione. Al soggetto vengono inoltre illustrate le comuni effetti collaterali e fornito un numero di contatto nel caso si verifichino effetti collaterali significativi. Un appuntamento di follow-up con il soggetto viene effettuato da uno specialista o da un'infermiere da uno a cinque giorni dopo la procedura.

Questo può avvenire sia per telefono che di persona. Una volta in laboratorio di ricerca, eseguire tutte le manipolazioni su ghiaccio bagnato, quando possibile.

Per prima cosa, registrare il volume del lavaggio broncoalveolare. Quindi filtrare il liquido attraverso un doppio strato di garza sterile per rimuovere i tappi di muco e raccogliere il filtrato in provette sterili da 50 millilitri. Centrifugare i tubi per ottenere il pellet cellulare mediante centrifugazione a 500 G a quattro gradi Celsius per cinque-dieci minuti.

Rimuovere il surnatante e lavare con 50 millilitri di soluzione salina normale fredda. Ripetere la centrifugazione. Una volta ancora, risospendere le cellule in un volume appropriato di mezzo di coltura.

Di solito, due millilitri forniscono una buona densità cellulare per il conteggio. Eseguire quindi il conteggio cellulare utilizzando un emocitometro e il blu di trian in base alle procedure standard; aggiustare la densità della sospensione cellulare a un milione di cellule per millilitro (1 × 10⁶ cellule/mL) aggiungendo un volume appropriato di mezzo. Successivamente, trasferire un millilitro di sospensione cellulare in ciascun pozzetto di una piastra a 24 pozzetti.

Incubare le cellule in una piastra a pozzetti a 37 gradi Celsius per tre ore per consentire l'adesione dei macrofagi ai linfociti. Dopo tre ore di incubazione, il mezzo di coltura viene pipettato delicatamente su e giù per tre volte e raccolto. Questo mezzo contiene linfociti e macrofagi non aderenti e può essere utilizzato per valutare la funzione dei linfociti.

Può inoltre essere utilizzato in ulteriori passaggi di purificazione per lavori sui macrofagi. Dopo tre ore di incubazione, aspirare con attenzione il mezzo e sostituirlo con mezzo fresco e caldo senza antibiotici; in questo punto i macrofagi sono aderenti alla piastra per colture cellulari. Le cellule BAL sono state centrifugate su un vetrino utilizzando un citocentrifugo Thermo Shandon ed colorate con un colorante nucleare differenziale per rivelare i tipi cellulari.

La maggior parte delle cellule sono macrofagi, come la cellula indicata con M, ma si osservano occasionalmente anche un neutrofilo indicato con N e un linfocita indicato con L. Dopo aver visto questo video, si dovrebbe avere una buona comprensione di come eseguire in modo sicuro ed efficace la broncoscopia e il lavaggio broncoalveolare a fini di ricerca utilizzando questa tecnica, elementi fondamentali dei quali sono un'adeguata anestesia della base della lingua e della faringe posteriore, il controllo del broncoscopio per verificarne l'efficacia del sistema di aspirazione e l'assenza di perdite d'aria prima della procedura, e la scelta del settore subsegmentale più appropriato nel lobo medio destro. Gli operatori dovrebbero raccogliere costantemente oltre cento millilitri di lavaggio broncoalveolare da soggetti che presentano effetti collaterali minimi.