Name: Isolamento di cellule melanociti-come primario dal Cuore del mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2014-09-29T13:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 38 s
Description: Scopri l'isolamento di cellule melanociti-come cardiache da cuori di topo per studiare l'aritmia atriale. Questo metodo consente analisi elettrofisiologiche e trascrizomiche su cellule vitali.

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Questo lavoro è stato supportato dal National Institutes of award Salute R01 HL105734 a VVPMDL è supportato, in parte, dal National Institutes of Health Research Career Award K08 HL094748. VVP è un ricercatore innovativo della American Heart Association sostenuta da sovvenzioni 11IRG900384.

1 Preparare le soluzioni necessarie e attrezzature <ol><li> In primo luogo, sterilizzare gli strumenti chirurgici (pinze diritte forma, pinze forma curva, forbici forma diritta, e forbici forma curva) da loro autoclave per 15 min. a 121 ° C. Preparare 2 set di strumenti, in cui viene utilizzato un set per sezionare i cuori e l&#39;altro insieme saranno utilizzati per tritare il tessuto. </li><li> Sciogliere 1 bustina di MCDB153 cultura media in 900 ml di sterile, acqua filtrata e mescolare lentamente fino a che la polvere si è sciolta. Aggiungere 1,2 g di bicarbonato di sodio, o 15,7 ml di soluzione di bicarbonato di sodio [7,5% w / v], per ogni litro di volume finale di soluzione in fase di preparazione e mescolare fino alla dissoluzione. Regolare il pH a 7,2 aggiungendo o 1 N HCl o NaOH 1 N, quindi versare i media attraverso un filtro 0,2 micron top bottiglia in condizioni di sterilità in una cappa coltura tissutale (cabinet biosicurezza). Poi raccogliere i media e conservarlo a 4 ° C. </li><li> Preparare i supplementi aiaggiungere al terreno di coltura (Elenco materiali). Gli integratori devono essere aggiunti ai media poco prima è necessario il supporto per la placcatura le cellule. </li><li> Preparare DPBS con 10% FBS più antibiotici (penicillina e streptomicina). </li><li> Avanti, preparare una soluzione di tripsina 0,25% con l&#39;aggiunta di 0,25 g di tripsina (pancreas bovino, attività&gt; 2.500 unità USP / mg, ultrapura, USB) a 100 ml di DPBS più antibiotici (penicillina e streptomicina). </li><li> Altre apparecchiature necessarie necessaria per completare questa procedura includono uno stereomicroscopio, Petri-piatti (10 cm), tubi conici da 50 ml, filtri cellulari 40-micron, DPBS più antibiotici, 60 mm piatti della cultura e da 35 mm piatti della cultura. </li></ol> 2 Isolare Cuori da neonatali mouse Pups <ol><li> In primo luogo, ottenere P0 a P2 cuccioli di topo neonatale (n = 6 a 8). Si consiglia di utilizzare cuccioli generati da allevamento DCT-Cre femmine omozigoti con i maschi che sono eterozigoti per entrambi il R26R: EYFP allele o Z / EG allele per etichettare l&#39;cellule melanociti-like. Entrambi R26R: EYFP e Z / EG topi sono disponibili da Jackson Laboratories (numeri azionari 006.148 e 003.920 rispettivamente). </li><li> Avanti, eutanasia neonatale i cuccioli di topo, pulire il petto con un batuffolo imbevuto di alcool e poi mettere i cuccioli in un cm 10 Scatola di Petri con DPBS. </li><li> Tagliare la pelle sul petto e lo sterno con le pinze e forbici sterilizzate e poi aprire con cautela il petto sotto uno stereomicroscopio. I cuori di cuccioli neonati di topo sono molto piccole quindi fate attenzione a fare in modo di rimuovere l&#39;intero cuore con gli atri allegate. </li><li> Lavare i cuori in DPBS e trasferirli in un nuovo piatto di Petri di 10 cm. </li></ol> 3 Digestione enzimatica <ol><li> Portare la piastra di Petri con il cuore asportato ad una cappa di coltura tissutale (cabinet biosicurezza) e poi seguire le istruzioni riportate di seguito utilizzando tecniche sterili nella cappa. </li><li> In primo luogo, lavare i cuori per tre volte in DPBS sterili, più antibiotici. </li><li> Posizionare i cuori (n = 6-8) in un60-mm piatto di coltura e aggiungere 6-8 ml di soluzione di tripsina allo 0,5% al ​​piatto. </li><li> Quindi, tagliare i cuori in piccoli pezzi (meno di 1 mm di dimensioni) e incubare a 37 ° C per 30 minuti in una atmosfera di CO 2 5%. </li><li> Dopo il periodo di incubazione è completa, versare la soluzione risultante di tessuto cardiaco e tripsina dal piatto in un tubo conico da 50 ml sterile. </li><li> Poi, usando una pipetta sterile da 10 ml, rapidamente ma delicatamente, triturare la soluzione nel tubo conico da 50 ml 30-50 volte. </li><li> Filtrare la soluzione attraverso un filtro cella 40 micron sulla cima di una nuova pulita tubo conico da 50 ml, per raccogliere il filtrato. </li><li> Successivamente, centrifugare la provetta da 50 ml a 240 xg in una centrifuga da tavolo per 5 min a temperatura ambiente. Poi, delicatamente Aspirare il sopranatante e risospendere il pellet residuo in 6-8 ml di DPBS sterili. Ripetere questa operazione altre 2 volte. Questo passaggio Pellet miociti atriali e melanociti cardiache, ma non far cadere il fifibroblasti in quanto i fibroblasti sono più piccole e rimarranno nel surnatante. </li></ol> Celle 4 placcatura cardiaca melanocita-like <ol><li> Dopo il terzo risciacquo dopo la centrifugazione, scarico con attenzione o aspirare al largo della soluzione di lavaggio (DPBS) e risospendere il pellet in 6 ml di terreni di coltura MCDB a cui sono stati aggiunti i supplementi. </li><li> Ora, disegnare la soluzione risospeso in una pipetta di trasferimento sterile e posizionare le cellule in un piatto da 35 mm, o in un pozzetto di una piastra da 6 pozzetti, e in comune le cellule cardiache isolate da 3 topi neonati in un piatto da 35 mm o bene. </li><li> Incubare i piatti per una notte a 37 ° C in atmosfera di CO 2 5%, aspirare fuori dal terreno di coltura insieme a tutte le cellule non attaccati e poi sciacquare le piastre una volta con DPBS. Quindi aggiungere mezzi freschi per le piastre e sostituire i media ogni 2 giorni. Le cellule isolate da cuori neonatale o embrionali possono essere mantenuti in coltura per fino a 3 settimane, mentre le cellule isolate da sentire adultots possono essere mantenute in coltura per un massimo di 10 giorni. </li></ol> Cellule 5. isolamento Cardiac melanocita-come da Cuore topo adulto <ol><li> In primo luogo, rimuovere i cuori di topi maturo (3-4 settimane di età, n = 3) attraverso una sternotomia linea mediana dopo somministrazione di eparina 100 U intraperitoneale ai topi e poi li eutanasia. Si consiglia di utilizzare pentobarbital di eutanasia topi per questa procedura, ma questo farmaco non è disponibile in tutte le località. </li><li> Successivamente, lavare i cuori asportati in DPBS sterili contenenti antibiotici in una cappa coltura tissutale (cabinet biosicurezza). Spremere il cuore leggermente con dissettore curve per rimuovere il sangue residuo da loro e poi sciacquare i cuori in DPBS ancora una volta. </li><li> Rimuovere gli atri e anello atrioventricolare dal cuore (queste strutture contengono le cellule melanociti-like) e posizionare i campioni di tessuto asportato in un piatto da 35 mm. </li><li> Tagliare i cuori in piccoli pezzi con le forbici curve e forzaps e poi aggiungere 6-8 ml di soluzione di tripsina allo 0,5% al ​​piatto. Poi incubare le piastre a 37 ° C per 45-60 min. </li><li> Ora, seguire i passaggi della procedura di cui sopra a partire dal punto 3.6 in poi. </li></ol>

<ol><li>Hornyak, T. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mitf+dosage+as+a+primary+determinant+of+melanocyte+survival+after+ultraviolet+irradiation%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Mitf dosage as a primary determinant of melanocyte survival after ultraviolet irradiation.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 22, 307-318 (2009).</li>
<li>Yonetani, S., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((In+vitro+expansion+of+immature+melanoblasts+and+their+ability+to+repopulate+melanocyte+stem+cells+in+the+hair+follicle%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">In vitro expansion of immature melanoblasts and their ability to repopulate melanocyte stem cells in the hair follicle.</a> J. Invest. Dermatol. 128, 408-420 (2008).</li>
<li>Levin, M. D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Melanocyte-like+cells+in+the+heart+and+pulmonary+veins+contribute+to+atrial+arrhythmia+triggers%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Clin.+Invest%22%5BJournal%5D)">Melanocyte-like cells in the heart and pulmonary veins contribute to atrial arrhythmia triggers.</a> J. Clin. Invest. 119, 3420-3436 (2009).</li>
<li>Patel, V. V. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Novel+insights+in+the+cellular+basis+of+atrial+fibrillation%5BTitle%5D)+AND+%22Expert+Rev.+Cardiovasc.+Ther%22%5BJournal%5D)">Novel insights in the cellular basis of atrial fibrillation.</a> Expert Rev. Cardiovasc. Ther. 8, 907-915 (2010).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Functional+neurons+and+melanocytes+induced+from+immortal+lines+of+postnatal+neural+crest-like+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22FASEB+J%22%5BJournal%5D)">Functional neurons and melanocytes induced from immortal lines of postnatal neural crest-like stem cells.</a> FASEB J. 23, 3179-3192 (2009).</li>
<li>Sviderskaya, E. V., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((P16Ink4a+in+melanocyte+senescence+and+differentiation%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Natl.+Cancer.+Inst%22%5BJournal%5D)">P16Ink4a in melanocyte senescence and differentiation.</a> J. Natl. Cancer. Inst. 94, 446-454 (2002).</li>
<li>Cook, A. L., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Human+melanoblasts+in+culture%3A+Expression+of+BRN2+and+synergistic+regulation+by+fibroblast+growth+factor-2%2C+stem+cell+factor%2C+and+endothelin-3%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Invest.+Dermatol%22%5BJournal%5D)">Human melanoblasts in culture: Expression of BRN2 and synergistic regulation by fibroblast growth factor-2, stem cell factor, and endothelin-3.</a> J. Invest. Dermatol. 121, 1150-1159 (2002).</li>
<li>Fang, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Defining+the+conditions+for+the+generation+of+melanocytes+from+human+embryonic+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Stem+Cells%22%5BJournal%5D)">Defining the conditions for the generation of melanocytes from human embryonic stem cells.</a> Stem Cells. 24, 1668-1677 (2006).</li>
<li>Brito, F. C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Timeline+and+distribution+of+melanocyte+precursors+in+the+mouse+heart%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">Timeline and distribution of melanocyte precursors in the mouse heart.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 464-470 (2008).</li>
<li>Yajima, I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+isolation+of+heart+melanocytes+is+specified+and+the+level+of+pigmentation+in+the+heart+may+correlate+with+coat+color%5BTitle%5D)+AND+%22Pigment+Cell+Melanoma+Res%22%5BJournal%5D)">The isolation of heart melanocytes is specified and the level of pigmentation in the heart may correlate with coat color.</a> Pigment Cell Melanoma Res. 21, 471-476 (2008).</li>
</ol>

Non abbiamo nulla da rivelare.

Melanociti cardiache sono presenti in sedi anatomiche all&#39;interno del cuore che spesso danno luogo a trigger aritmie atriali. Queste regioni comprendono le vene polmonari, l&#39;anello atrioventricolare, posteriore sinistra dell&#39;atrio e del forame ovale (Figura 4). Per comprendere il ruolo di queste cellule svolgono in aritmogenesi, sviluppiamo tecniche per isolare loro e studiare la loro fisiologia. Tuttavia, abbiamo riconosciuto che il miglioramento di questa tecnica a cedere quantitativi più ...

Abbiamo recentemente identificato una popolazione di cellule romanzo nel cuore di topi e gli esseri umani che esprimono enzimi melanina-sintesi e morfologicamente assomigliano melanociti cutanei. Abbiamo chiamato &#39;melanociti cardiaci&#39; queste cellule e l&#39;ho trovato sono presenti in posizioni anatomiche da cui aritmia atriale trigger spesso origine negli esseri umani. Abbiamo anche trovato melanociti cardiaci contribuiscono ad aritmie atriali nei topi con delezione linea germinale di Dct. Melanociti cardiache sono scarsamente distribuiti in tutto l&#39;atrio del mouse dove essi costituiscono meno dello 0,1% di tutte le cellule atriali. Per studiare le proprietà elettriche e biologiche dei melanociti cardiaci abbiamo sviluppato una procedura per isolarli dal cuore mouse utilizzando marcatori specifici melanociti Cre-inducibile. La nostra procedura iniziale è stato sviluppato da quelli utilizzati per isolare cardiomiociti murini neonatali e fruttate molto piccolo numero di cellule adatti per le registrazioni di patch clamp o analisi PCR. Tuttavia, per migliorare la guarigioneesima e la vitalità dei melanociti cardiaci, per più approfondita analisi elettrofisiologica o studi biochimici, abbiamo sviluppato una procedura raffinata da quelli progettati per isolare melanociti cutanei. La procedura descritta e dimostrata in questa recensione ha il vantaggio di produrre sani melanociti cardiaco che può essere placcato come una popolazione pura o con cardiomiociti.

<table><tbody><tr><td>MCDB 153</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>M7403</td><td>Sciogliere in acqua</td></tr><tr><td>DPBS, senza calcio né magnesio</td><td>Invitrogen</td><td>14190136</td><td>Conc. di stock: 1x&lt;br/&gt; Conc. di lavoro: 1x</td></tr><tr><td>Penicillina-streptomicina</td><td>Invitrogen</td><td>15140163</td><td>Conc. di stock: 100x&lt;br/&gt; Conc. di lavoro: 1x</td></tr><tr><td>Serum Fetale Bovino</td><td>Life Technology</td><td>Certificato</td><td>Conc. di lavoro: 4%</td></tr><tr><td>TPA</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>P1585</td><td>Sciogliere in DMSO&lt;br/&gt;Conc. di stock: 3,2 &amp;mu;M&lt;br/&gt;Conc. di lavoro: 32 nM</td></tr><tr><td>Transferrina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>T8158</td><td>Sciogliere in DPBS&lt;br/&gt;Conc. di stock: 0,1 mg/ml&lt;br/&gt;Conc. di lavoro: 1 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>AMP ciclico dibutirrico</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>D0627</td><td>Sciogliere in DPBS&lt;br/&gt;Conc. di stock: 0,5 mM&lt;br/&gt;Conc. di lavoro: 5 &amp;mu;M</td></tr><tr><td>Insulina</td><td>Sigma-Aldrich</td><td>I6634</td><td>Sciogliere in acido acetico 10 mM&lt;br/&gt;Conc. di stock: 1 mg/ml&lt;br/&gt;Conc. di lavoro: 5 &amp;mu;g/ml</td></tr><tr><td>FGF basico</td><td>BD Biosciences</td><td>354060</td><td>Sciogliere in acqua&lt;br/&gt;Conc. di stock: 4 ng/&amp;mu;l&lt;br/&gt;Conc. di lavoro: 4 ng/ml</td></tr></tbody></table>

isolamento di cellule melanociti-come primario dal cuore del mouse

Isolating Primary Melanocyte-like Cells from the Mouse Heart

Abbiamo identificato una popolazione romanzo di cellule melanociti-simile (anche conosciuto come melanociti cardiaci) nel cuore dei topi e gli esseri umani che contribuiscono a trigger di aritmia atriale nei topi. Per studiare le proprietà elettriche e biologiche dei melanociti cardiaci abbiamo sviluppato una procedura per isolarli dai cuori di topo che derivati ​​da quelli progettati per isolare cardiomiociti murini neonatali. Al fine di ottenere melanociti cardiache sane adatte per una più ampia patch clamp o studi biochimici, abbiamo sviluppato una procedura raffinata per isolare e placcatura melanociti cardiaci basati su quelli originariamente progettato per isolare melanociti cutanei. La procedura raffinata è dimostrato in questa recensione e produce un numero maggiore di cellule melanociti-come sani che può essere placcato come una popolazione pura o con cardiomiociti.

Il protocollo descritto in questo articolo è una tecnica migliorata rispetto a quella che abbiamo già pubblicato per isolare melanociti cardiache dal cuore murino. Questa procedura impiega l&#39;uso di marcatori fluorescenti guidati da sintesi della melanina specifica-enzima Cre-ricombinasi di etichettare cellule melanociti-simile cardiaci. E &#39;importante utilizzare un marcatore per etichettare melanociti cardiaci quando si lavora con le cellule embrionali o neonatali appena isolate, dal momento che le differenze mor...

In questo protocollo, w e identificato una popolazione romanzo di cellule melanociti-simile (anche conosciuto come melanociti cardiaci) nel cuore dei topi e gli esseri umani che contribuiscono ad aritmia atriale provoca nei topi.

Isolamento di cellule melanociti-come primario dal Cuore del mouse

Abbiamo identificato una nuova popolazione di cellule simil-melanociti (note anche come melanociti cardiaci) nei cuori di topi e umani che contribuiscono all'atrio...

L'obiettivo generale di questa procedura è isolare cellule vitali simili a melanociti cardiaci dal cuore del topo. Questo viene ottenuto innanzitutto prelevando i cuori da topi sottoposti a eutanasia. Il secondo passaggio consiste nel tritare i cuori e dissociare le cellule mediante digestione enzimatica e agitazione meccanica.Successivamente, la sospensione cellulare viene centrifugata e il pellet contenente i cardiomiociti e le cellule simili ai melanociti viene risospeso. L'ultimo passaggio consiste nell'allestimento e nella coltivazione delle cellule. Le cellule isolate, ovvero le cellule simili ai melanociti cardiaci, possono essere utilizzate per studi mediante patch-clamp o per analisi con microarray in risposta a stress patofisiologici, al fine di valutare l'eccitabilità cellulare o lo stato del trascrittoma.Il principale vantaggio di questa tecnica rispetto ai metodi esistenti progettati per isolare e coltivare i cardiomiociti è che consente l'isolamento di numerose cellule simili ai melanociti cardiaci vitali. Inizialmente, abbiamo avuto l'idea di questo metodo quando abbiamo scoperto una nuova popolazione cellulare nel cuore del topo e desideravamo indagarne la fisiologia. Per cominciare, preparare due serie di strumenti chirurgici sterilizzati, una per dissezionare i cuori e un'altra per tritare il tessuto.Successivamente, preparare i supplementi per il mezzo, ma attendere ad aggiungerli al mezzo di coltura fino a immediatamente prima della semina delle cellule. Dopo aver preparato il filtro per il mezzo di coltura per sterilizzare la soluzione mentre si lavora in una cappa a flusso laminare, conservare il mezzo a quattro gradi Celsius. Preparare la soluzione del DNA aggiungendo 0,05 grammi di DNA a 100 millilitri di DPBS contenente il 10% di FBS più antibiotici.Successivamente, preparare una soluzione di tripsina allo 0,5% aggiungendo 0,5 grammi di tripsina a 100 millilitri di DPBS contenente antibiotici. Infine, raccogliere tutti gli altri strumenti necessari per completare la procedura, tra cui piastre di Petri, provette coniche da 50 millilitri, filtri cellulari da 40 micron, DPBS con antibiotici e piatti di coltura da 60 e da 35 millimetri. Dopo l'eutanasia di topolini neonati da P zero a P due, pulire il torace con alcol ed immergerli in una piastra P due da 10 centimetri contenente DPBS; operando al microscopio stereoscopico, aprire con attenzione la cavità toracica ed estrarre l'intero cuore con le atria ancora attaccate.Lavare i cuori in DPBS e trasferirli in una nuova piastra di Petri da 10 centimetri. Spostare la piastra di Petri con i cuori escissi in una cappa a flusso laminare e seguire una tecnica sterile per i passaggi successivi. Per prima cosa, lavare i cuori tre volte in DPBS sterile aggiunto di antibiotici.Posizionare i cuori in una piastra di coltura da 60 millimetri e aggiungere da sei a otto millilitri di tripsina al 0,5% in soluzione. Successivamente, tagliare i cuori in piccoli pezzi e incubarli a 37 gradi Celsius per 30 minuti. Al termine dell'incubazione, aspirare la soluzione risultante dalla piastra e trasferirla in un tubo conico sterile da 10 millilitri.Utilizzando una pipetta sterile da 10 millilitri, rimescolare rapidamente ma delicatamente la soluzione da 30 a 50 volte, quindi filtrare la sospensione risultante attraverso un filtro cellulare da 40 micron in un nuovo tubo conico sterile da 50 millilitri. Dopo la centrifugazione, aspirare delicatamente il sopernatante e risospendere il pellet rimanente in sei-otto millilitri di DPBS sterile. Ripetere questo passaggio altre due volte.Dopo il terzo risciacquo successivo alla centrifugazione, rimuovere con attenzione il liquido di lavaggio tramite decantazione o aspirazione e risospendere il pellet in sei millilitri di mezzo di coltura integrato. Successivamente, aspirare la soluzione risospesa in una pipetta sterile per trasferimento e posizionare le cellule in una piastra da 35 millimetri. Prelevare le cellule cardiache isolate da tre topi neonati dopo un'incubazione notturna, aspirare il mezzo di coltura insieme alle cellule non aderenti, quindi risciacquare le piastre una volta con DPBS, aggiungere mezzo fresco alle piastre e sostituire il mezzo.Ogni due giorni, le cellule isolate da cuori neonatali o embrionali possono essere mantenute in coltura fino a tre settimane, mentre le cellule isolate da cuori adulti possono essere mantenute in coltura fino a 10 giorni. Per isolare cellule simili a melanociti da un cuore di topo adulto, lavare innanzitutto i cuori escissi in DPBS sterile contenente antibiotici in una cappa a flusso laminare. Premere leggermente il cuore con pinze anatomiche curve per rimuovere eventuali residui di sangue, quindi risciacquare nuovamente il cuore in DPBS.Successivamente, rimuovere le atria e l'anello atrioventricolare dai cuori e posizionare i campioni di tessuto escisso in una piastra da 35 millimetri. Tagliare i cuori in piccoli pezzi utilizzando forbici curve e pinze. Aggiungere sei-otto millilitri di soluzione di tripsina 0,5% alla piastra e incubare a 37 gradi Celsius per 45-60 minuti.Dopo l'incubazione, ripetere i passaggi illustrati in precedenza per ottenere una sospensione di cellule cardiache adulte e piastre precedenti. In questo esempio, la freccia bianca identifica il melanocita cardiaco in entrambi i pannelli. Si noti che, senza l'ausilio del marcatore fluorescente, il melanocita cardiaco è difficile da identificare e distinguere dai miociti atriali aderenti alla piastra; la freccia azzurra indica cellule atriali che non sono ben aderenti alla piastra, come mostrato qui, un melanocita cardiaco sano isolato dal cuore di un topo neonato.Hanno sviluppato estesi processi dendritici e assomigliano strettamente ai melanociti cutanei. Una volta padroneggiata, questa tecnica può essere eseguita in poche ore se effettuata correttamente. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come isolare cellule melanocitarie vitali dal cuore.Sarà adatto per l'analisi fisiologica e molecolare.

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Singoli cardiomiociti di topi wild type e mutanti possono essere isolati dal cuore per studiare la loro contrattilità e i transitori del calcio. Ciò consente di caratterizzare il contributo della disfunzione cellulare alla disfunzione cardiaca da qualsiasi causa.

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Isolamento e Cultura del topo adulto Cardiomyocytes per Cell Signaling e<em&gt; In vitro</em&gt; Cardiaca Ipertrofia

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Isolamento, caratterizzazione e differenziamento di cellule staminali cardiache dal cuore di topo adulto

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