Name: Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-05-09T12:00:00.000+00:00
Duration: 7 min 46 s
Description: Scopri come l'occlusione bilaterale delle carotidi comuni induce tolleranza ischemica precoce nel cervello di topi C57Bl6/J. Questo metodo utilizza sonda Doppler laser per monitorare il flusso ematico cerebrale e valuta i volumi infartuali istologici.

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Tutte le procedure descritte in questo articolo sono stati eseguiti in conformità con le linee guida ei regolamenti del Landesamt für Gesundheit und Soziales, Berlino, Germania. Procedure di pre-chirurgiche 1. Preparazione del Monofili <ol><li> Per la preparazione di filamenti intraluminale, nylon monofilamento 8-0 sono stati utilizzati e sono state tagliate ad una lunghezza di 13 mm ciascuna. </li><li> Per il rivestimento dei monofilamenti, Xantopren M mucosa, (Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Germania) è stato utilizzato attivato con l&#39;aggiunta di una goccia di soluzione di attivatore (Activator, Universal plus, Heraeus Kulzer GmbH, Hanau, Germania). </li><li> Il monofilamento è stato lentamente tirato attraverso il silicone finché fu completamente coperto con esso. Così facendo, il monofilamento sarebbe uniformemente coperto con silicone. Evitate di aspettare troppo a lungo, perché il materiale di rivestimento attivato diventerà ferma e si asciugano rapidamente. </li><li> Prima che il silicone inizia a solidificare, Si raccomanda di togliere silicone eccessivo dal filamento tirandola sopra un foglio di carta. In questo modo, lo strato di silicone può essere assottigliato ad uno spessore approssimativo di 200 um. </li><li> La base del monofilamento di silicone coperto è stato bloccato in plastilina per lasciarlo asciugare durante la notte. </li></ol> Commento: Idealmente, solo sterilizzati o almeno dovrebbero essere usati monofilamenti disinfettati per garantire la sterilità nel sito chirurgico. In pratica, sterilizzazione o disinfezione dei monofilamenti fatte a mano è molto difficile perché la qualità dei monofilamenti può peggiorare 9. Pertanto, potrebbe essere preferibile utilizzare comuni monofilamenti sterili invece. 2. Preparazione di strumenti chirurgici e degli Animali <ol><li> Tutti gli strumenti chirurgici sono stati conservati in alcool etilico al 70%. Inoltre, prima di ogni nuova procedura chirurgica, tutti gli strumenti chirurgici sono stati accuratamente puliti unaND disinfettato con alcool etilico al 70%. </li><li> L&#39;area chirurgica è stata completamente disinfettato con alcool etilico al 70% in tutti gli animali prima della resezione. I siti disinfettati stato permesso di asciugare completamente prima di eseguire le incisioni. Ulteriori ritaglio di pelliccia non è stato eseguito in quanto ciò potrebbe causare microabrasioni e conseguente infiammazione della pelle 9. </li></ol> Le procedure chirurgiche 3. Posizionamento della sonda LDF e LDF monitoraggio <ol><li> Per l&#39;induzione di anestesia, topi sono stati esposti ad una miscela gassosa costituita da 30% di ossigeno, 70% N 2 O e 2,5% isoflurano utilizzando un vaporizzatore. Per il mantenimento dell&#39;anestesia, concentrazione isoflurano è stata ridotta a 1,5%. I topi sono stati respiro spontaneo con maschera di respirazione durante tutta la procedura chirurgica. </li><li> Una sonda di temperatura rettale è stata inserita e topi sono stati fissati al telaio stereotassico esponendo la testa parietale. Durante l&#39;intervento chirurgico, i topi sono stati appoggiati su untermostato controllato rilievo di riscaldamento, garantendo una temperatura costante di 37,0 ± 0,5 ° C. Una incisione mediana sagittale (~ 1 cm di lunghezza) è stata eseguita per esporre il cranio parietale. </li><li> Il lato sinistro del cranio è stato dissezionato e accuratamente una sonda a fibre ottiche è stato fissato direttamente al cranio caudale 2 millimetri e 5 millimetri laterale dal bregma usando colla istantanea. In seguito, i bordi della ferita sono stati attentamente adattate per evitare l&#39;ipotermia cerebrale così come le infezioni. </li><li> Il mouse è stato girato per esporre il lato ventrale del collo. La sonda a fibre ottiche è stata collegata al dispositivo LDF (PeriFlux System 5000, Perimed, Järfälla, Sweden) tramite adattatore di connessione per sonda (Master Probe 418-1, Perimed; Järfälla, Svezia). </li></ol> Commento: Ruotando il mouse intorno, la sonda a fibre ottiche deve essere piegato con cura per evitare che esso si stacca dal cranio. <ol start="5"><li> Il dispositivo LDF è stato collegato ad un com computer portatilecomputer. Registrazione continua di valori LDF è stato avviato utilizzando PeriSoft per Windows (versione 2.50, Järfälla, Svezia). Figura 1 dimostra il corso CBF medio ottenuto dieci registrazioni LDF durante BCCAO e riperfusione. </li></ol> 4. Bilaterale carotide comune di occlusione dell&#39;arteria <ol><li> L&#39;anestesia è stata mantenuta come descritto in 3.1. Mouse è stato posto sulla sua schiena. Coda e le zampe dell&#39;animale sono stati fissati per il rilievo di riscaldamento con del nastro adesivo. È stata eseguita una incisione mediana sagittale ventrale (~ 1 centimetro di lunghezza). </li><li> Entrambe le ghiandole salivatory stati accuratamente separati e mobilitati per visualizzare il sottostante del CCA. </li><li> Entrambi CCA di stati accuratamente separati dai rispettivi nervi vagali e vene di accompagnamento senza danneggiare queste strutture. Manipolazioni dei nervi vagali potrebbero portare a disfunzioni transitoria o permanente del sistema nervoso parasimpatico, che ha il potenziale per il verificarsi di significative arr cardiacohythmia o addirittura irreversibili arresto cardiaco. Pertanto, è fondamentale per evitare eventuali manipolazioni dei nervi vagali. Un sciolto 5-0 ciclo sutura di seta è stata fatta intorno ad ogni CCA. </li><li> Un piccolo tubo in silicone (diametro 2 mm) è stato inserito tra il CCA e le suture di seta su ogni lato. Questo tubo è stato utilizzato come splintaggio del CCA di onde evitare danneggiamento delle pareti arteriose quando sono stati serrati le suture (Figura 4). </li><li> Entrambi CCA è erano occluse per un minuto stringendo le suture di seta. Solo i topi, in cui il segnale LDF è stato ridotto a &lt;10% del segnale di base sono stati inclusi nello studio. Dopo la riapertura di entrambi CCA di, è stato avviato un periodo di cinque minuti di riperfusione. Con LDF è stata assicurata una riperfusione completa. Sono stati esclusi gli animali con riperfusione incomplete (ovvero &lt;90% di recupero di CBF rispetto al basale CBF). La sequenza di un minuto di BCCAO e cinque minuti di riperfusione è stata ripetuta due volte per un totale BCCAO duratisu di 3 min. Figura 1 mostra il corso CBF medio ottenuto dieci registrazioni LDF durante BCCAO e riperfusione. Durante la procedura, si raccomanda di mantenere il collo ferita umido mediante soluzione fisiologica. </li><li> Dopo l&#39;ultimo riperfusione, tutti i tubi e suture ed anche la sonda a fibre ottiche attaccato al cranio sono stati rimossi, le ferite sono state suturate e lidocaina pomata (xylocaina 2%; AstraZeneca GmbH, Wedel, Germania) è stato ripetutamente applicati alle ferite come necessario per gestione analgesico. </li><li> I topi sono stati trasferiti in un pre-riscaldato (30 ° C) scatola di recupero (MediHEAT. PecoServives Ltd. Brough, Cumbria, Regno Unito) fino a che non aveva ripreso conoscenza completa. Successivamente, i topi sono stati restituiti alle loro gabbie per animali. </li></ol> 5. Occlusione dell&#39;arteria cerebrale media <ol><li> I topi sono stati ri-anestetizzato, una sonda di temperatura rettale è stato inserito e topi sono stati posizionati su una piastra elettrica per esporre il lato ventrale del collo. Successivamente, essi were fissato come descritto nella sezione BCCAO. </li><li> Una legatura permanente utilizzando una lunga sutura di seta 7-0 è stata fatta intorno sinistra prossimale CCA ed il filo è stato delicatamente tirato caudalmente utilizzando un morsetto zanzara (Figura 4). </li><li> Un&#39;altra legatura permanente è stata fatta intorno carotide esterna sinistra (ECA) e il filo è stato tirato verso il lato destro dell&#39;animale (Figura 4). </li><li> Il tessuto connettivo che circonda l&#39;ICA sinistra è stata attentamente mobilitato e il nervo ipoglosso è stato delicatamente sollevato per avere una buona visione del corso distale ICA. L&#39;ACI si piega a sinistra a sinistra, mentre l&#39;arteria pterigopalatino (PPA), segue il corso del prossimale ICA a destra (Figura 4). </li></ol> Commento: C&#39;è un&#39;altra arteria da identificare che si gira a destra in direzione caudale. Questa è l&#39;arteria occipitale, che proviene variabile sia dalla biforcazione CCA o dalla proximal parte della Corte dei conti (Figura 4). <ol start="5"><li> Un ciclo di sutura sciolto è stato fatto tutto il prossimale ICA utilizzando un filo di seta 5-0. </li><li> Usando una piccola pinza microvascolare, l&#39;ICA è stato temporaneamente occlusa distalmente alla 5-0 allentato anello di sutura (Figura 4). </li><li> Una piccola incisione è stata fatta nella parte distale del CCA appena prima della biforcazione CCA usando forbici microvascolari (Figura 4). </li><li> Un preselezionata monofilamento silicone rivestito è stato introdotto nel CCA attraverso la piccola incisione e spinto nella ICA finché fermato al morsetto microvascolare (Figura 4). </li><li> Il microclamp stato accuratamente rimosso dalla ICA, mentre il monofilamento è stata avanzata più profondo nella ICA finché si è fermato (Figura 4). Commento: A questo punto, capovolgere la pinza nella mano sinistra in modo che non lo si tiene come una penna. Questo aiuta ad afferrare il filamento con la pinza più facilmente.La pinza vascolare-applicatore dovrebbero tenersi nella mano destra. Potrebbe essere necessario quasi stringere il allentata 5-0 sutura intorno alla ICA per impedire il sanguinamento dal lato incisione. </li><li> La posizione esatta della punta monofilo è stato identificato per verificare se è stata avanzata in ICA e non nel PPA. Se la punta monofilamento è stato introdotto nel prossimale PPA, il filamento è stato gentilmente tirato indietro appena prima della biforcazione ICA / PPA. Si è tentato di far avanzare il monofilo nella ICA di nuovo, mentre si tira delicatamente il prossimale ICA un po &#39;verso il lato destro. In questo modo, il corso naturale del distale della ICA è stato simulato rendendo più facile l&#39;accesso alla ICA. </li><li> Dopo che il monofilo è stata avanzata nella ICA quasi completamente, a piede libero 5-0 sutura anello intorno alla prossimale ICA è stato rafforzato al fine di tenere il filo in posizione. In seguito, tutti i fili di seta sono stati accorciati e la ferita è stata suturata la pelle. </li><li> La perdita di liquidi durante l&#39;intervento chirurgico è stato ricostitumentata iniettando 1,0 ml di una normale soluzione salina ip Successivamente, il topo è stato trasferito alla casella recupero preriscaldata fino ripreso conoscenza completa. </li><li> Per riperfusione, i topi sono stati ri-anestetizzati e il monofilo è stato rimosso dopo allentando la sutura 5-0 di seta intorno al prossimale ICA. Successivamente, la sutura 5-0 venne nuovamente serrato con attenzione per evitare il sanguinamento. </li><li> Dopo la conferma della completa emostasi, la ferita al collo è stata suturata. </li><li> Lidocaina unguento è stato ripetutamente applicato localmente sulla pelle come necessario per alleviare il dolore e il topo è stato trasferito alla pre-riscaldato (30 ° C) fino a che il recupero scatola riprese conoscenza completa. </li><li> Come è stato osservato una prima traccia per il procedimento MCAO successo, un orario circuitazione dell&#39;animale. La gravità del deficit funzionale è stata quantificata utilizzando il punteggio Bederson modificato per topi 10. Secondo questa Bederson punteggio modificato, punteggi neurologici noire classificati come segue: 0 (normale funzione motoria), 1 (flessione del tronco e degli arti anteriori controlaterale quando il mouse è stato sollevato per la coda), 2 (girando verso il lato controlaterale quando il mouse si è tenuta per la coda su una superficie piana, ma normale postura a riposo), 3 (appoggiandosi al lato controlaterale a riposo), e 4 (nessuna attività motoria spontanea o morti). </li></ol> 6. BCCAO Sham Chirurgia Per BCCAO procedure sham, i topi sono stati anestetizzati per la durata di un vero e proprio procedimento PC BCCAO, le ghiandole salivazione sono stati mobilitati e il CCA di stati esposti. E &#39;fondamentale che le manipolazioni diretti alle arterie carotidi o nervi vagali sono evitati durante la procedura simulata. Manipolazioni del CCA possono danneggiare lo strato endoteliale, che può risultare in un rilascio di sostanze vasoattive da endotelio o indurre trombosi locale all&#39;interno del lume arterioso. Come conseguenza, eventi tromboembolici potrebbero essere successiva ambulatorio finto. Questo sarebbe un importante fattore confondente di secoloprocedura e. D&#39;altra parte, manipolazioni dei nervi vagali potrebbero portare a disfunzioni transitoria o permanente del sistema nervoso parasimpatico, che ha il potenziale per il verificarsi di aritmia cardiaca significativa o addirittura irreversibili arresto cardiaco. Pertanto, è fondamentale per evitare eventuali manipolazioni dei nervi vagali durante BCCAO. Procedure di post-chirurgiche 7. Infarto misurazioni del volume Per la valutazione delle dimensioni infarto, i topi sono sopravvissuti per 72 ore dopo MCAO. Successivamente gli animali sono stati anestetizzati profondamente, i cervelli sono stati rimossi, snap-frozen in metilbutan, sezionati e colorati con ematossilina (utilizzando il protocollo di Papanicolau) per misure di volume di infarto. Sezioni di cervello sono stati raccolti a 600 micron di intervalli e volumi infarto furono determinate mediante un analizzatore di immagini (MCID nucleo 7.0 Rev.2.0, GE Healthcare Niagara Inc) e corretta per l&#39;edema secondo il metodo di Lin et al. 7,11 </sup&gt;. 8. Criteri di inclusione Sono stati inclusi solo gli animali che hanno avuto un LDF-misurato CBF riduzione di oltre il 90% in ciascuno dei tre episodi BCCAO. Idealmente, il monitoraggio LDF dovrebbe essere eseguita in entrambi gli emisferi cerebrali durante BCCAO. Per praticità, abbiamo eseguito il monitoraggio LDF solo negli emisferi sinistro, che sarà sottoposto alla MCAO seguito. Questo approccio è stato descritto prima 6,12. Riperfusione dopo ogni episodio BCCAO è stato richiesto di essere completa (cioè di ritorno ai valori basali). Per ragioni di riduzione dei tempi di durata topi sono stati tenuti sotto anestesia, non abbiamo monitoriamo CBF durante l&#39;intervento MCAO. In uno studio pilota con un gruppo separato di animali tuttavia, abbiamo monitorato CBF da LDF MCAO durante la chirurgia. In questo gruppo di topi, abbiamo costantemente misurato una riduzione CBF del 90% rispetto al basale prima CCA occlusione. Inoltre, dopo la rimozione dei monofilamenti CBF recuperato al&gt; 90% del rispettivovalori basali dopo circa occlusione. Questi criteri LDF sono stabiliti nella letteratura e causare consistenti volumi di infarto 7. Sono stati inclusi solo gli animali che hanno avuto un punteggio Bederson di almeno di 1 dopo il recupero dall&#39;anestesia dopo MCAO. Inoltre, solo gli animali che sono sopravvissuti per 72 ore dopo MCAO e che non hanno mostrato segni di emorragia intracranica sono stati inclusi nello studio.

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Non abbiamo nulla da rivelare.

Nel nostro studio, abbiamo dimostrato che tre sequenze di BCCAO, ciascuno della durata di un minuto e seguita da riperfusione per cinque minuti, sono un adeguato stimolo PC ischemico di indurre presto IT. Inoltre, abbiamo dimostrato che il protocollo utilizzato precondizionamento è una procedura invasiva sicura e minori senza notevole morbilità postoperatoria, senza segni di apoptosi in cervello e nessuna mortalità. Diversi protocolli di precondizionamento diversi sono stati descritti preced...

L&#39;ictus ischemico è una malattia con un alto tasso di mortalità e di un enorme peso socio-economico 1. Nonostante gli intensi sforzi scientifici sperimentali e clinici nel corso degli ultimi decenni, le opzioni di trattamento per i pazienti con ictus ischemico acuto rimane molto limitato 2. In contrasto a ciò, aumento della percentuale di persone anziane nei paesi sviluppati aumenterà drasticamente incidenza e prevalenza di pazienti con ictus ischemico nei prossimi decenni 3. Pertanto, vi è un urgente bisogno di nuove strategie di trattamento nei pazienti con ictus ischemico. Un approccio è di guadagnare ulteriore comprensione nei meccanismi di adattamento endogena del cervello per far fronte a uno stimolo dannoso. Questo neuroprotezione brain-derived è anche noto come precondizionamento ischemico (PC) o la tolleranza ischemica (IT) e descrive un fenomeno, in cui uno stimolo nocivo non dannoso applicato al cervello, induce una resistenza transitoriacontro una successiva dannosa insulto ischemico 4. Essa si verifica in due diverse finestre temporali: primi IT, che si verifica in pochi minuti a qualche ora dopo PC e ritardate IT, che ha bisogno di una latenza di un paio d&#39;ore a verificarsi 4. Finora, la ricerca su di essa nel cervello si è concentrata sulla ritardata IT. Molto meno si sa sui meccanismi della precoce IT. L&#39;obiettivo di questo studio è di stabilire bilaterale dell&#39;arteria carotide comune occlusione (BCCAO), che è uno stimolo istituito per indurla ritardo, come un adeguato stimolo PC di indurre presto IT di ischemia cerebrale focale transitoria (indotta da occlusione dell&#39;arteria cerebrale media, MCAO) in C57BL6 topi / J. Durante entrambe le procedure chirurgiche (BCCAO e MCAO), è stato eseguito il monitoraggio del flusso sanguigno cerebrale (CBF) mediante flussimetria laser Doppler (LDF). BCCAO è stata eseguita in topi anestetizzati e in respiro spontaneo. Entrambe le arterie carotidi comuni (CCA) sono stati espostie occluse per 60 secondi seguiti da 5 minuti di riperfusione. Questo BCCAO sequenza / riperfusione è stata ripetuta due volte. Dopo l&#39;intervento chirurgico, i topi recuperato velocemente e non hanno mostrato segni di compromissione funzionale. Al fine di escludere, che il protocollo BCCAO sopra descritto non ha provocato la morte cellulare ritardata nel cervello, abbiamo effettuato una dUTP-biotina nick etichettatura fine TdT-mediated (TUNEL) colorazione 72 ore dopo BCCAO (o ambulatorio finto) in un gruppo separato. MCAO è un modello ampiamente stabilito per l&#39;induzione di ischemia cerebrale focale in roditori 5-7. Le procedure chirurgiche sono state effettuate utilizzando procedure operative standard (SOP) 8. Dopo aver esposto sinistra CCA, un monofilamento di silicio ricoperto stato introdotto nel CCA distale, avanzato attraverso l&#39;arteria carotide interna (ICA) nel circolo di Willis fino cerebrale anteriore (ACA) e quindi, l&#39;origine della arteria cerebrale media ( MCA) è stato occluso per un periodo di tempo definito. In questo studio abbiamousato 45 min di MCAO, che in genere si traduce in una lesione ischemica nel territorio MCA coinvolge aree cerebrali striatali e corticali. Nel nostro studio, abbiamo analizzato il profilo temporale dei primi IT utilizzando BCCAO come stimolo PC. I nostri dati indicano che l&#39;intervallo di tempo ottimale tra BCCAO e MCAO di indurre presto IT è 30 min. In questo video, vi daremo una dimostrazione di entrambe le procedure chirurgiche, cioè BCCAO e MCAO.

<table><tbody><tr><td>Microscopio chirurgico binoculare</td><td>Zeiss</td><td>Stemi 2000 C</td><td></td></tr><tr><td>Fonte luminosa per microscopio</td><td>Zeiss</td><td>SteREO CL 1500 ECO</td><td></td></tr><tr><td>Piastra riscaldante con sonda rettale</td><td>FST</td><td>21061-10</td><td></td></tr><tr><td>Frame stereotassico</td><td>David Kopf</td><td>Modello 930</td><td></td></tr><tr><td>Forbici</td><td>FST</td><td>91460-11</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta Dumont n. 5</td><td>FST</td><td>11251-10</td><td></td></tr><tr><td>Pinzetta Dumont n. 7</td><td>FST</td><td>11271-30</td><td></td></tr><tr><td>Morsetto microvascolare</td><td>FST</td><td>00398-02</td><td></td></tr><tr><td>Applicatore per morsetti</td><td>FST</td><td>00072-14</td><td></td></tr><tr><td>Forbici a molla</td><td>FST</td><td>15372-62</td><td></td></tr><tr><td>Pinza per ago</td><td>FST</td><td>12010-14</td><td></td></tr><tr><td>Aghi</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td>BER 562-20</td><td></td></tr><tr><td>Filetto di seta 5-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto di seta 7-0</td><td>Feuerstein,Suprama</td><td></td><td></td></tr><tr><td>Filetto di seta 8-0</td><td>Feuerstein, Suprama</td><td></td><td></td></tr></tbody></table>

bilaterale occlusione comune arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale ischemia cerebrale

Bilateral Common Carotid Artery Occlusion as an Adequate Preconditioning Stimulus to Induce Early Ischemic Tolerance to Focal Cerebral Ischemia

Esistono evidenze, che precondizionamento ischemico - una sfida ischemica non-dannoso per il cervello - conferisce una protezione transitoria a un successivo insulto ischemico dannoso. Abbiamo stabilito bilaterale comune occlusione dell&#39;arteria carotide come stimolo di precondizionamento di indurre presto la tolleranza ischemica di ischemia cerebrale focale transitoria C57Bl6 / J topi. In questo video, dimostreremo la metodologia utilizzata per questo studio.

Il nostro protocollo BCCAO provocato immediato e profondo (&gt; 90%) riduzioni CBF quando entrambi erano occluse del CCA (Figura 1). Riapertura del CCA LED per completare riperfusione come monitorato da LDF (Figura 1). Dopo PC, gli animali non hanno mostrato segni di disabilità funzionale. Inoltre, non vi era alcuna mortalità. Colorazione TUNEL eseguita 72 ore dopo BCCAO in un gruppo separato di animali non hanno mostrato segni di morte cellulare ritardata nel cervello dopo BCCAO (dati ...

Esistono evidenze, che il precondizionamento ischemico (PC) - una sfida ischemica non-dannoso per il cervello - conferisce una protezione transitoria a un successivo insulto ischemico dannoso. Abbiamo stabilito bilaterale dell&#39;arteria carotide comune occlusione (BCCAO) come stimolo di precondizionamento per indurre la tolleranza ischemica precoce (IT) di ischemia cerebrale focale transitoria (indotta da occlusione dell&#39;arteria cerebrale, MCAO) in C57Bl6 / J topi.

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

Esistono prove crescenti che il precondizionamento ischemico — uno stimolo ischemico non dannoso somministrato al cervello — conferisca una protezione transitoria a un ...

L'obiettivo generale del seguente esperimento è dimostrare che l'occlusione bilaterale delle arterie carotidi comuni induce uno stato transitorio di tolleranza ischemica nei confronti dell'ischemia cerebrale durante una fase precoce. Questo risultato si ottiene posizionando una sonda di flussometria laser doppler a fibra ottica sopra la corteccia per monitorare in modo continuo il flusso sanguigno cerebrale. Come secondo passaggio viene eseguita l'occlusione bilaterale delle arterie carotidi comuni, che induce una tolleranza ischemica precoce.Successivamente viene eseguita l'occlusione dell'arteria cerebrale media al fine di indurre un'ischemia cerebrale focale. Si ottengono risultati che mostrano differenze nelle dimensioni delle lesioni ischemiche tra animali precondizionati e non precondizionati, in base alle misurazioni del volume dell'infarto istologico. I metodi descritti verranno utilizzati per rispondere alla domanda se la tolleranza ischemica, che è uno stimolo consolidato nella finestra temporale ritardata, possa indurre tolleranza ischemica anche nella finestra temporale precoce. Dopo l'induzione dell'anestesia mediante il 2,5% di ISO fluorina, fissare l'animale nel telaio stereotassico, quindi inserire una sonda rettale per il monitoraggio della temperatura. Posizionare il topo su un tappetino riscaldante controllato termostaticamente per mantenere una temperatura corporea costante di 37 ± 0,5 °C durante l'intervento chirurgico.Successivamente, pulire e disinfettare il sito chirurgico. Praticare un'incisione sagittale mediana di circa un centimetro per esporre il cranio parietale al microscopio. Rimuovere con cura il tessuto connettivo utilizzando una pinzetta.Quindi fissare una sonda in fibra ottica direttamente sul cranio, due millimetri caudali e cinque millimetri laterali rispetto al punto BRE MA, utilizzando colla istantanea. Successivamente, ruotare il mouse in modo da esporre la faccia ventrale del collo. Collegare poi la sonda in fibra ottica al dispositivo LDF tramite l’adattatore per sonda.Il programma Peri soft viene utilizzato per registrare il valore LDF. In questa procedura, effettuare un'incisione sagittale ventrale mediana di circa un centimetro. Separare la ghiandola salivare destra da quella sinistra.Dissezionare con attenzione i nervi vaghi e le vene circostanti per esporre le arterie carotidi sottostanti. Quindi, praticare un laccio di sutura in seta 5-0 intorno a ciascuna arteria carotide comune (CCA). Successivamente, inserire un piccolo tubo di silicone del diametro di due millimetri tra le CCA e le suture in seta su ciascun lato dell'arteria carotide comune.Questo tubicino viene utilizzato come stecca per le arterie carotidee comuni (CCA) al fine di evitare danni alle pareti arteriose quando i punti di sutura vengono serrati. Successivamente, ocludere entrambe le CCA per un minuto stringendo i punti di sutura in seta. Includere nello studio soltanto il topo in cui la riduzione del segnale LDF è inferiore al 10% del segnale di base.Dopo la riapertura delle CCA, iniziare un periodo di riperfusione di cinque minuti. Ripetere la sequenza di un minuto B-C-C-A-O e cinque minuti di riperfusione fino a un totale di tre minuti di B-C-C-A-O. Nel frattempo, dopo l'ultima riperfusione, utilizzare soluzione fisiologica normale per mantenere umida la ferita al collo, quindi rimuovere tutti i tubi e i punti di sutura.Chiudere la ferita con punti di sutura. Successivamente, applicare l'unto di lidocaina sul sito chirurgico per analgesia. Dopodiché, girare il topo.Rimuovere la sonda in fibra ottica collegata al cranio, suturare la ferita e applicare lidocaina ment. Successivamente, trasferire il topo in una scatola per il recupero preriscaldata. Restituirlo alla gabbia degli animali dopo che ha riacquistato completa coscienza sotto il microscopio.Effettuare una legatura permanente attorno all'arteria carotide comune prossimale con un filo di seta 7-0 lungo. Tirare delicatamente il filo utilizzando una pinza emostatica. Quindi effettuare un'altra legatura permanente attorno all'arteria carotide esterna.Tirare il filo verso il lato destro dell'animale. Successivamente, rimuovere il tessuto connettivo che circonda l'arteria carotide interna. Sollevare con cura e delicatezza il nervo ipoglosso per ottenere una buona visione d'insieme del decorso distale della carotide interna, piegare la carotide interna sinistra verso sinistra mentre l'arteria tegopalatina segue il decorso della carotide interna prossimale verso destra.Successivamente, eseguire un punto di sutura lasso attorno all'ICA prossimale con un filo di seta cinque zero. Utilizzando una piccola pinza microvascolare, occludere temporaneamente l'ICA in posizione distale rispetto al punto di sutura lasso cinque zero per prevenire un sanguinamento retrogrado dall'ICA. Successivamente, praticare una piccola incisione nella parte distale della CCA, appena prima della biforcazione della CCA, utilizzando forbici microvascolari.Introdurre un monofilamento preselezionato rivestito in silicone nella CCA attraverso la piccola incisione fino a quando non si arresta alla pinza microvascolare. Successivamente, rimuovere con attenzione la pinza microvascolare dall'ICA nello stesso momento in cui si spinge più in profondità il monofilamento all'interno dell'ICA, fino a quando non si ferma dopo che il monofilamento è stato quasi completamente introdotto nell'ICA. Stringere il laccio di sutura 5-0 allentato attorno all'ICA prossimale per mantenere il filamento in posizione e verificare che sia entrato nel vaso corretto.Il primo segno che indica un intervento di MCAO riuscito è il movimento circolare in senso orario dell'animale e la curvatura dell'animale su un solo lato quando viene sollevato per la coda; la gravità del deficit funzionale può essere quantificata. Utilizzando il punteggio di Peterson modificato per i topi in caso di riperfusione, risedare il topo e rimuovere il monofilamento dopo aver allentato con cura il punto di seta 5-0 intorno all'ICA prossimale, quindi stringere nuovamente con attenzione il punto 5-0 per prevenire emorragie. Questa figura mostra l'andamento dei valori medi di CVF misurati mediante LDF durante la riperfusione B-C-C-A-O.Di seguito è riportato il profilo temporale dei volumi di infarto in diversi intervalli di tempo tra B-C-C-A-O e MCAO. Si è osservata una riduzione significativa dei volumi di infarto rispetto al gruppo Sham quando la B-C-C-A-O è stata eseguita 30 minuti prima della MCAO. Inoltre, i volumi di infarto sono risultati ridotti anche quando la MCAO è stata eseguita due ore e 24 ore dopo la B-C-C-A-O.Un ritardo di 24 ore tra B-C-C-A-O e MCAO rappresenta la finestra temporale ottimale per la tolleranza ischemica ritardata. Pertanto, si può concludere che la finestra temporale ottimale per la tolleranza ischemica precoce, utilizzando B-C-C-A-O come stimolo di condizionamento precoce (PC), è di 30 minuti prima dell'induzione dell'ischemia cerebrale focale transitoria. In generale, questo metodo è adatto a fornire dati affidabili nei campi della tolleranza ischemica.Quando si esegue questa procedura, è importante utilizzare monofilamenti con una dimensione standardizzata dell'inserto auricolare, oppure utilizzare filamenti disponibili in commercio con una dimensione predefinita.

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Questo video mostra la procedura di esecuzione dell'occlusione permanente dell'arteria cerebrale media distale, o MCAO, con l'arteria carotide comune, o legatura CCA, nei ratti anziani per modellare l'ictus ischemico. Questo blocca il flusso sanguigno al cervello, portando alla morte neuronale e generando un modello per studiare i meccanismi dell'ictus e i potenziali trattamenti.

Indurre l'ischemia attraverso l'occlusione dell'arteria carotide media e comune in un modello di ratto

Fonte: Zheng, Y., et al. Modelli sperimentali per studiare la neuroprotezione del postcondizionamento acido contro l'ischemia cerebrale. J. Vis. Exp. (2017)Questo video mostra l'applicazione del postcondizionamento acido (APC) per valutare i suoi effetti neuroprotettivi contro il danno ischemico in un modello murino di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO). Delinea le fasi coinvolte nella riperfusione nel modello MCAO e l'applicazione dell'APC durante la riperfusione per mitigare...

 Valutazione degli effetti neuroprotettivi del postcondizionamento acido in un modello murino di ischemia cerebrale

Questo protocollo descrive il precondizionamento ipossico ripetitivo, o brevi esposizioni all'ipossia sistemica che riducono i volumi di infarto e l'interruzione della barriera emato-encefalica a seguito di occlusione transitoria dell'arteria cerebrale media nei topi. Descrive inoltre la doppia quantificazione del volume dell'infarto e dell'interruzione della barriera emato-encefalica dopo l'ictus per valutare l'efficacia della protezione neurovascolare.

Quantificazione della Protezione Neurovascular seguito ripetitivo ipossico precondizionamento e transitoria occlusione dell&#39;arteria cerebrale media nei topi

Qui vi presentiamo un protocollo per la produzione di distale occlusione dell'arteria cerebrale media permanente anziani ratti femmina con occlusione simultanea delle arterie carotidi a generare grandi infarti corticali e deficit sostenuti. Mostriamo conferma della dimensione della lesione utilizzando la risonanza magnetica strutturale a 24 ore e 8 settimane dopo l'ictus.

Esecuzione permanente distale Medio cerebrale con arteria carotide comune di occlusione in ratti anziani per studiare corticale Ischemia con disabilità sostenuta

L'occlusione di filamento intraluminal dell'arteria cerebrale centrale è il modello più utilizzato in vivo di colpo sperimentale nei roditori. Approccio chirurgico alternativo per consentire la riparazione dell'arteria carotica comune avviene qui, che permette la riperfusione dell'arteria carotica comune e un completo riperfusione nel territorio dell'arteria cerebrale media.

Occlusione dell'arteria cerebrale centrale consentendo di riperfusione tramite riparazione dell'arteria carotica comune nei topi

Un modello murino di ischemia-riperfusione cerebrale è istituito per studiare la patofisiologia del colpo. Abbiamo distalmente legare l'arteria cerebrale centrale di destra e l'arteria carotica comune di destra e ripristinare il flusso sanguigno dopo 10 o 40 min di ischemia.

Occlusione del vaso due Mouse modello di Ischemia-riperfusione cerebrale

Questo protocollo presenta una guida passo passo per i ricercatori per eseguire la procedura di occlusione dell'arteria cerebrale media sui topi utilizzando il metodo dell'arteria carotide esterna Longa modificata. Le modifiche presentate in questo articolo mirano ad aumentare l'accuratezza dell'occlusione dell'arteria cerebrale media e a garantire la completa riperfusione.

Ottimizzazione del metodo di occlusione dell'arteria cerebrale media Longa per la riperfusione completa

Questo protocollo descrive il processo di preparazione alla riperfusione dell'occlusione dell'arteria cerebrale media attraverso l'arteria carotide comune.

Una preparazione del modello modificata per la riperfusione dell'occlusione dell'arteria cerebrale media

Il metodo dell'ago della stenosi bilaterale asimmetrica dell'arteria carotide comune è proposto per creare un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza. Si traduce in risultati a lungo termine rispetto ai modelli precedentemente stabiliti ed è compatibile con la risonanza magnetica dal vivo. La rappresentazione visiva che dimostra la procedura fornisce una guida per padroneggiare l'intervento chirurgico.

Un modello murino per il deterioramento cognitivo vascolare e la demenza basato sulla stenosi dell'arteria carotide comune bilaterale asimmetrica guidata da ago

Questo protocollo descrive il processo per indurre un modello di coma ischemico cerebrale utilizzando un metodo di occlusione a quattro vasi modificato.

Modello di coma ischemico cerebrale indotto da occlusione a quattro vasi modificata

Scopri come l'occlusione bilaterale delle carotidi comuni induce tolleranza ischemica precoce nel cervello di topi C57Bl6/J. Questo metodo utilizza sonda Doppler laser per monitorare il flusso ematico cerebrale e valuta i volumi infartuali istologici.

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale (Video) | JoVE Journal

Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

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