Bilaterale occlusione comune Arteria carotide come uno stimolo precondizionamento in grado di indurre tolleranza ischemica precoce di focale Ischemia Cerebrale

Esistono evidenze, che il precondizionamento ischemico (PC) - una sfida ischemica non-dannoso per il cervello - conferisce una protezione transitoria a un successivo insulto ischemico dannoso. Abbiamo stabilito bilaterale dell'arteria carotide comune occlusione (BCCAO) come stimolo di precondizionamento per indurre la tolleranza ischemica precoce (IT) di ischemia cerebrale focale transitoria (indotta da occlusione dell'arteria cerebrale, MCAO) in C57Bl6 / J topi.

L'obiettivo generale del seguente esperimento è dimostrare che l'occlusione bilaterale dell'arteria carotide comune induce uno stato transitorio di tolleranza ischemica all'ischemia cerebrale nella finestra temporale precoce. Ciò si ottiene posizionando una sonda laser doppler a fibra ottica sopra la corteccia per monitorare continuamente il flusso sanguigno cerebrale. Come seconda fase, viene eseguita l'occlusione bilaterale dell'arteria carotide comune, che induce una precoce tolleranza ischemica.

Successivamente, viene eseguita l'occlusione dell'arteria cerebrale media per indurre l'ischemia cerebrale focale. Si ottengono risultati che mostrano differenze nelle dimensioni delle lesioni ischemiche tra animali precondizionati e non precondizionati in base alle misurazioni istologiche del volume dell'infarto, I metodi descritti saranno utilizzati per rispondere alla domanda se la tolleranza ischemica, che è uno stimolo stabilito nella finestra temporale ritardata, può anche indurre tolleranza ischemica nella finestra temporale precoce Dopo l'induzione dell'anestesia utilizzando il 2,5% di fluoro ISO, Fissarlo nel telaio stereotassico, quindi inserire una sonda di temperatura rettale per monitorarne la temperatura. Appoggiare il mouse su un termoforo controllato da termostato per garantire una temperatura interna costante di 37 gradi più o meno 0,5 gradi Celsius durante l'intervento chirurgico.

Successivamente, pulire e disinfettare il sito chirurgico. Praticare un'incisione sagittale sulla linea mediana di circa un centimetro per esporre il cranio parietale al microscopio. Rimuovere con cautela il tessuto connettivo con un paio di pinze.

Quindi fissare una sonda in fibra ottica direttamente al cranio, a due millimetri di coccola e a cinque millimetri lateralmente da BRE MA usando la colla istantanea. Quindi, gira il mouse per esporre il lato ventrale del collo. Quindi collegare la sonda in fibra ottica al dispositivo LDF tramite l'adattatore della sonda.

Il programma software Peri viene utilizzato per registrare il valore LDF. In questa procedura, praticare un'incisione della linea mediana ventrale sagittale di circa un centimetro. Separare le ghiandole salvifiche destra e sinistra l'una dall'altra.

Sezionare attentamente i nervi vagali e le vene circostanti per esporre le arterie carotidi sottostanti. Quindi crea un anello di sutura di seta da cinque oh sciolto attorno a ciascun CCA. Successivamente, inserire un piccolo tubo di silicone con un diametro di due millimetri tra i CCA e le suture di seta su ciascun lato dell'arteria carotide comune.

Questo tubo viene utilizzato come splintaggio dei CCA per evitare di danneggiare le pareti arteriose quando le suture vengono serrate. Successivamente occludere entrambi i CCA per un minuto stringendo i punti di sutura della seta. Includere nello studio solo il mouse con la riduzione del segnale LDF a meno del 10% del segnale basale.

Dopo la riapertura dei CCA, iniziare un periodo di riperfusione di cinque minuti. Ripetere la sequenza di un minuto B-C-C-A-O e cinque minuti di riperfusione fino a un totale di tre minuti, B-C-C-A-O. Nel frattempo, utilizzare una soluzione fisiologica normale per mantenere bagnata la ferita del collo dopo l'ultima riperfusione, rimuovere tutti i tubi e le suture.

Chiudere la ferita con una sutura. Quindi applicare l'unguento alla lidocaina sul sito chirurgico per l'analgesia. Successivamente, gira il mouse.

Rimuovere la sonda in fibra ottica attaccata al cranio, suturare la ferita e applicare la lidocaina mento. Successivamente, trasferisci il mouse in una scatola di recupero preriscaldata. Rimettilo nella gabbia dell'animale dopo che ha ripreso completamente conoscenza al microscopio.

Fai una legatura permanente attorno al CCA prossimale con una lunga sutura di seta sette oh. Tirare delicatamente il filo in modo coccoloso usando una pinza per zanzare. Quindi fare un'altra legatura permanente attorno all'arteria carotide esterna.

Tira il filo verso il lato destro dell'animale. Quindi, rimuovere il tessuto connettivo che circonda l'arteria carotide interna. Sollevare con cautela e delicatezza il nervo ipoglosso per avere una buona visione d'insieme del decorso distale dell'ICA, piegare l'ICA sinistro a sinistra mentre l'arteria tego palatina segue il decorso dell'ICA prossimale a destra.

Successivamente, crea un anello di sutura sciolto attorno all'ICA prossimale con un filo di seta da cinque oh. Utilizzando un piccolo morsetto microvascolare, occludere temporaneamente l'ICA distalmente all'ansa di sutura allentata per prevenire il sanguinamento retrometrico dall'ICA. Successivamente, praticare una piccola incisione nella parte distale del CCA appena prima della biforcazione del CCA utilizzando le forbici microvascolari.

Introdurre un monofilamento rivestito di silicone preselezionato nel CCA attraverso la piccola incisione fino a quando non si ferma in corrispondenza del morsetto microvascolare. Quindi rimuovere con cautela il micro morsetto dall'ICA allo stesso tempo, far avanzare il monofilamento più in profondità nell'ICA fino a quando non si ferma dopo che il monofilamento è stato quasi completamente avanzato nell'ICA. Stringere l'anello di sutura cinque oh allentato attorno all'ICA prossimale per tenere il filamento in posizione e verificare se è avvicinato al recipiente giusto.

Il primo segno che indica una procedura MCAO di successo è il giro in senso orario dell'animale e l'animale che si piega da un lato solo quando viene sollevato dalla coda, la gravità del deficit funzionale può essere quantificata. Utilizzando il punteggio di Peterson modificato per i topi per la riperfusione, anestetizzare nuovamente il topo e rimuovere il monofilamento dopo aver allentato con cura la sutura di seta a cinque oh attorno all'ICA prossimale, quindi stringere nuovamente con cura la sutura a cinque oh per prevenire il sanguinamento. Questa figura mostra l'andamento dei valori medi di CVF misurati da LDF durante la riperfusione B-C-C-A-O.

Ecco il profilo temporale dei volumi di infarto a diversi ritardi temporali di MCAO dopo B-C-C-A-O. C'è stata una significativa riduzione dei volumi di infarto rispetto a Sham Group quando B-C-C-A-O è stato eseguito 30 minuti prima di MCAO. Inoltre, i volumi di infarto sono stati ridotti quando l'MCAO è stato eseguito due ore e 24 ore dopo B-C-C-A-O.

Un ritardo di 24 ore tra B-C-C-A-O e MCAO è la finestra temporale ottimale per la tolleranza ischemica ritardata. Pertanto, si può concludere che la finestra temporale ottimale per l'utilizzo precoce di B-C-C-A-O come stimolo PC è 30 minuti prima dell'induzione dell'ischemia cerebrale focale transitoria. In generale, questo metodo è adatto a fornire dati affidabili nel campo della tolleranza ischemica.

Durante l'esecuzione di questa procedura, è importante utilizzare monofilamenti con una lunghezza obliqua standardizzata o utilizzare filamenti disponibili in commercio con una dimensione predefinita.