Preparazione e inattivazione dei patogeni di Double Dose Buffy prodotti piastrinici cappotto con il sistema INTERCEPT Blood System

In questo video, verrà preparato un concentrato piastrinico in dose doppia a partire da un pool di sette Buffy coat e successivamente trattato con Intercept. Dopo aver visto questo video, si avrà una buona comprensione di come produrre un concentrato piastrinico in dose doppia inattivato per i patogeni. Innanzitutto, presentiamo una panoramica schematica seguita da una dimostrazione.

Le prime sette unità di sangue intero donato vengono centrifugate e separate per ottenere sette unità di strato buffy che soddisfano i requisiti di volume ed ematocrito. Gli strati buffy vengono collegati, uniti e centrifugati. La sospensione di piastrine viene quindi separata dai globuli rossi residui per produrre un concentrato di piastrine in dose doppia, al fine di inattivare patogeni e leucociti.

Il concentrato piastrinico a dose doppia viene trattato mediante il sistema di intercettazione, che crea legami incrociati con gli acidi nucleici. Alla fine, questa procedura produce due dosi terapeutiche di piastrine con una qualità in vitro accettabile per sette giorni di conservazione, come determinato dalla valutazione di pH, glucosio, lattato, PO₂ e PCO₂ e shallot doru. Un tecnico del mio centro trasfusionale illustrerà la procedura e i requisiti di lavorazione che descriveremo.

Prima di tutto, assicurarsi che il concentrato piastrinico a dose doppia soddisfi le specifiche di lavorazione del sistema di inattivazione: volume compreso tra 300 e 420 millilitri, dose piastrinica compresa tra 2,5 e 7 × 10¹¹ e meno di 4 × 10⁶ globuli rossi per millilitro. Iniziare questa procedura con sette unità di sangue intero raccolte in sistemi di raccolta da 450 millilitri con sacca superiore e inferiore.

Posizionare le unità di sangue nei contenitori per centrifuga ed eseguire una centrifugazione intensa a 4.880 RCF per 11 minuti a temperatura ambiente con l'impostazione di freno B cinque, secondo le istruzioni del produttore. Dopo la centrifugazione, il sangue si separerà in tre strati: globuli rossi, strato buffy coat e plasma. Trasferire il plasma nel sacchetto satellita superiore e i globuli rossi nel sacchetto satellita inferiore, lasciando il buffy coat di circa 48 millilitri e con un ematocrito del 37% nel contenitore di raccolta.

Posizionare i buffy coat su un agitatore per piastrine a temperatura ambiente durante la notte. Collegare in modo sterile sette buffy coat e 300 millilitri di soluzione additiva per piastrine SSP plus in una configurazione a catena, con la soluzione additiva in alto. Chiudere con una molletta la linea tra la soluzione additiva e il primo buffy coat come mostrato qui. Aprire le saldature tra le unità di buffy coat e lasciarle defluire nel contenitore dell'ultimo buffy coat.

Successivamente, aprire la pinza e il saldatore tra la soluzione additiva e il primo buffy coat, e lasciare scorrere circa un terzo della soluzione additiva, circa 100 millilitri, attraverso ciascun contenitore di buffy coat in modo sequenziale prima di chiudere la pinza; ripetere il lavaggio altre due volte, utilizzando ogni volta circa 100 millilitri di soluzione additiva. Scollegare il contenitore del buffy coat raccolto dai contenitori vuoti. Il volume totale del pool di buffy coat, inclusa la soluzione additiva, dovrebbe essere di circa 600 millilitri.

Posizionare i buffy coat raccolti su un agitatore per un'ora a temperatura ambiente. Quindi collegare un contenitore per la conservazione delle piastrine dotato di filtro integrato per la riduzione dei leucociti al sacchetto contenente il pool di buffy coat. Posizionare i buffy coat raccolti e il contenitore per la conservazione delle piastrine in una centrifuga ed eseguire la centrifugazione a 462 RCF per nove minuti e 20 secondi.

Dopo la centrifugazione, far passare la sospensione di piastrine attraverso il filtro riduttore Luca nel contenitore di conservazione delle piastrine. Il risultato è un concentrato piastrinico a dose doppia contenente circa sette volte 10 alla 11a piastrine in 420 millilitri, che può subire l'inattivazione dei patogeni con il sistema Intercept. Il concentrato piastrinico a dose doppia viene trattato utilizzando un set di elaborazione Intercept, costituito da un contenitore per l'antoin, un contenitore per l'illuminazione e due contenitori di conservazione.

Collegare il contenitore della sospensione di piastrine al contenitore Amin sul set di elaborazione Intercept. Successivamente, appendere le piastrine. Rotturare la cannula inferiore sul contenitore Amin per consentire alla soluzione di fluire nel contenitore di illuminazione.

Quindi rompere la cannula superiore sul contenitore di Amin per permettere ai piastrini di fluire attraverso il contenitore di Amin nel contenitore di illuminazione. Mescolare delicatamente la miscela di piastrine e am tosin. Premere leggermente il contenitore di illuminazione per espellere l'aria dal contenitore di illuminazione.

Chiudere il tubo tra l'illuminazione e il contenitore amato in modo che non più di quattro centimetri di tubo sporgano dal contenitore di illuminazione. Rimuovere e scartare i contenitori vuoti. Posizionare il set di elaborazione nell'illuminatore con il contenitore di illuminazione nel vano grande a sinistra e l'organizer nel vano più piccolo sul lato destro.

Scansionare l'ID della donazione. Codice del prodotto e lavorazione. Impostare il numero del lotto nell'illuminatore.

Chiudere il coperchio metallico e il cassetto. Premere avvio per iniziare l'illuminazione. L'illuminatore fornisce una dose controllata di luce UVA alla miscela di aminoplatelleti nel contenitore di illuminazione.

Amin si inserisce tra le coppie di basi degli acidi nucleici dei patogeni, che potrebbero essere presenti nell'unità di piastrine. A seguito dell'illuminazione, si formano legami incrociati permanenti che bloccano insieme il DNA o l'RNA, impedendo ai patogeni di replicarsi e di causare malattie nel ricevente del prodotto ematico. Al termine dell'illuminazione, rimuovere il set di lavorazione.

Successivamente, rimuovere i contenitori dall'organizer, appendere le piastrine e il set di lavorazione. Spezzare la cannula all'uscita del contenitore di illuminazione e lasciare defluire le piastrine nel contenitore CAD. All'interno del contenitore CAD è presente una wafer con perle di polistirene macroporose immobilizzate che riducono i livelli di amin residuo nel prodotto ematico.

Avendo cura di non piegare la wafer CAD. Espellere l'aria dal contenitore CAD nel contenitore di illuminazione. Sigillare il tubo vicino alla porta di ingresso del contenitore CAD.

Rimuovere e scartare il contenitore di illuminazione vuoto. Posizionare il contenitore CAD con i contenitori di conservazione collegati su un agitatore per piastrine da sei a 16 ore. Ciò determinerà una riduzione dell'amlin residuo a una concentrazione inferiore o uguale a due micromolar.

Dopo il trattamento con CAD, rimuovere le unità di piastrine dall'agitatore, appendere le piastrine, spezzare la cannula all'uscita del contenitore CAD e lasciare che le piastrine fluiscano nei due contenitori di conservazione. Successivamente, espellere l'aria dai contenitori di conservazione. Sigillare il tubo sopra il raccordo a Y e rimuovere il contenitore CAD.

Il risultato è rappresentato da due concentrati piastrinici sottoposti ad inattivazione del patogeno, da valutare per la funzione piastrinica in vitro. Il dosaggio piastrinico pH PO2 PC O2 produzione di lattato e consumo di glucosio dell'intercetta. I concentrati piastrinici sono stati determinati fino al settimo giorno di conservazione.

Questa figura mostra la dose media iniziale di piastrine del concentrato piastrinico a dose doppia prima del trattamento con il sistema di intercettazione, e la dose media di piastrine in ciascun prodotto frazionato trattato fino al settimo giorno di conservazione. Come si può osservare, la perdita di piastrine durante la conservazione è stata di circa il 9%. Questa riduzione non differisce dalla perdita attesa di piastrine durante la conservazione di piastrine convenzionali. Secondo i requisiti europei, il pH delle piastrine deve rimanere superiore a 6,4 fino al termine della durata di conservazione.

Durante la lavorazione, il pH dei concentrati piastrinici diminuisce leggermente in base al volume della concentrazione piastrinica e alla permeabilità al gas del contenitore di conservazione delle piastrine. Questo grafico mostra il pH dei prodotti piastrinici frazionati durante sette giorni di conservazione; il pH si mantiene stabile e adeguatamente entro i requisiti di lavorazione. Il metabolismo aerobico dovrebbe continuare a verificarsi nelle piastrine conservate ed è un indicatore della capacità delle piastrine di funzionare in vivo dopo la trasfusione in un paziente.

Il consumo di O2 e la produzione di CO2 da parte delle piastrine indicano una respirazione continua delle piastrine nel contenitore PL 24 10 durante i sette giorni di conservazione. Allo stesso modo, il metabolismo anaerobico dovrebbe proseguire nelle piastrine conservate. Pertanto, il consumo di glucosio e la produzione di lattato sono anche indicatori della capacità delle piastrine di funzionare dopo la trasfusione.

Questi due grafici mostrano i livelli di lattato e glucosio durante sette giorni di conservazione. Il consumo di glucosio da parte delle piastrine e la produzione di lattato sono coerenti tra loro. Durante i sette giorni di conservazione, cinque unità hanno presentato livelli di glucosio inferiori a 1,11 millimoli per litro, che rappresenta il limite inferiore per il saggio del glucosio.

La preparazione del buffy coat e la validazione del pooling hanno prodotto concentrati piastrinici che soddisfano i criteri di ingresso per il trattamento di inattivazione, in particolare volume, conta piastrinica, rapporto con il plasma e contaminazione da globuli rossi. Le unità finali soddisfano i criteri di validazione per sette giorni di conservazione, inclusi il dosaggio piastrinico e il pH. Il vantaggio principale di questa tecnica rispetto al metodo convenzionale di preparazione del buffy coat, che produce un concentrato piastrinico a dose singola, è che massimizza il rendimento dei componenti ottenuti dai prelievi di sangue, riduce i costi operativi mediante l’utilizzo di una tecnica a dose doppia e migliora la sicurezza del paziente inattivando i patogeni trasmissibili tramite trasfusione.