Somministrazione intranasale di terapeutica del sistema nervoso centrale di topi Awake

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di indirizzare i farmaci al sistema nervoso centrale utilizzando la somministrazione intranasale nei topi senza anestesia. Ciò si ottiene acclimatando prima il mouse alla manipolazione. Il secondo passo consiste nell'utilizzare un'impugnatura per collottola modificata per immobilizzare la testa dell'animale.

Successivamente, le goccioline di farmaco vengono somministrate per via intranasale con un pipettatore. Nella fase finale, il topo viene riportato nella sua gabbia con una ricompensa. I principali vantaggi di questa tecnica sono che la somministrazione intranasale indirizza i farmaci al sistema nervoso centrale senza esposizione sistemica e che la somministrazione intranasale di farmaci da sveglio consente il trattamento cronico nei topi senza anestesia.

Questo metodo può essere utilizzato per aiutare a rispondere a domande chiave nello sviluppo di farmaci per il trattamento delle malattie neurologiche. In generale, le persone che non conoscono questo metodo avranno difficoltà perché è difficile tenere la bocca saldamente per impedire il movimento della testa. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale in quanto il posizionamento delle dita per la presa corretta è fondamentale e difficile da spiegare tramite testo e fotografie Da due a quattro settimane prima della somministrazione intranasale, acclimatare i topi alla manipolazione eseguendo i passaggi seguenti nell'arco di due o tre giorni, ciascuno dei quali conferma che il topo non mostra segni di stress prima di passare alla fase successiva.

Per il primo passaggio di acclamazione, posizionare il mouse nel palmo della mano per un periodo di due o tre minuti. Non più di un piede sopra la gabbia. Successivamente, posiziona il mouse nel palmo della mano per tre minuti e accarezza delicatamente l'animale dalla testa alla coda, permettendogli di muoversi liberamente.

Una volta che l'animale tollera le carezze, posiziona il mouse nel palmo della mano per tre minuti e poi usa il pollice e l'indice per pizzicare leggermente la pelle sulla parte posteriore del collo dell'animale. Per la fase successiva di acclimatazione, sollevare il mouse per la collottola per 30 secondi. Quindi lasciare riposare l'animale sulla parte superiore della gabbia per altri 30 secondi prima di ripetere nuovamente la presa.

Ora esercitati con la presa intranasale usando prima il pollice e l'indice della mano dominante per tenere il mouse per la coda. Quindi usa l'anulare centrale e il mignolo per fissare leggermente la parte inferiore del corpo dell'animale alla gabbia. Lascia che il topo si aggrappi alle sbarre allungando leggermente l'animale per afferrare meglio la collottola.

Usando il pollice e il medio sulla mano non dominante, procedi pizzicando saldamente il mouse sulla collottola dietro il collo e le spalle, tirando verso l'alto la pelle flaccida della parte superiore della schiena per formare una tenda attraverso le scapole. Quindi posiziona rapidamente il dito indice della mano non dominante sulla testa del topo il più vicino possibile al naso e tira indietro la pelle. Allo stesso tempo, far scorrere il pollice e il medio verso la testa per un posizionamento ottimale.

Idealmente, il mouse non dovrebbe essere in grado di muovere la testa verticalmente o orizzontalmente. Durante la sessione successiva, eseguire la presa intranasale come appena dimostrato. Questa volta invertendo l'animale in modo che il suo lato ventrale sia rivolto verso il soffitto e il suo collo sia parallelo al pavimento.

Una volta che il mouse si è sentito a suo agio con l'impugnatura intranasale invertita, esercitarsi brevemente a posizionare una micropipetta con la punta vuota vicino a ciascuna narice. Infine, somministrare sei microlitri di soluzione fisiologica, prima a una sola nare, e poi nella sessione successiva a entrambi utilizzando la procedura di somministrazione intranasale del farmaco dimostrata in modo più completo nella sezione successiva prima di iniziare la somministrazione intranasale del farmaco. Per prima cosa, sistemare le gabbie e gli strumenti di dosaggio in modo che siano facilmente raggiungibili.

Quindi rimuovi il primo topo dalla sua gabbia e usa la presa intranasale appena dimostrata per sollevare l'animale. Successivamente, utilizzando la mano dominante, caricare la micropipetta con sei microlitri di farmaco. Posizionare la punta della pipetta riempita vicino alla narice sinistra del topo con un angolo di 45 gradi.

Quindi espellere lentamente il farmaco per formare una piccola gocciolina con circa la metà del volume nella punta, posizionare la gocciolina abbastanza vicino alla narice del topo in modo che il topo possa inalarla immediatamente dopo che il topo ha inalato la goccia, espellere il resto del farmaco nella punta della pipetta per formare un'altra piccola gocciolina che il topo possa inalare attraverso la stessa narice circa due o tre secondi dopo, Tenere il mouse in questa posizione per 15 secondi, quindi somministrare il farmaco alla narice destra allo stesso modo. Ora, riposiziona il topo sopra la gabbia per due minuti, quindi somministra nuovamente il farmaco a entrambe le narici, come appena dimostrato esattamente due minuti dopo la somministrazione alla prima narice per dosare uno o due topi contemporaneamente. Questo schema di esempio può essere seguito dopo che il topo ha ricevuto l'intera dose di farmaco.

Rimetti l'animale nella sua gabbia. Dopo ogni acclimatazione o sessione di dosaggio intranasale, ai topi dovrebbe essere somministrato un bocconcino come un cheerio come rinforzo positivo per ridurre lo stress, ripristinare sempre i nidi ai loro stati originali prima di riportare gli animali nelle loro gabbie, cambiare i guanti tra le gabbie quando il gruppo di dosaggio ospitava gli animali in modo da non trasferire l'odore da una colonia di gabbia all'altra, che indurrebbe un comportamento aggressivo del compagno di gabbia. Una volta padroneggiato, una persona può somministrare il farmaco per via intranasale a 15-20 topi in un'ora mentre tenta questa procedura con più di un topo alla volta.

È importante prendere precauzioni per evitare che i topi cambino accidentalmente gabbia. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come utilizzare la somministrazione intranasale nei topi senza anestesia. Per indirizzare i farmaci al sistema nervoso centrale.

Ricorda di prendere sempre precauzioni quando lavori con i topi, come indossare una maschera N95 e guanti per prevenire l'esposizione agli allergeni.