Name: Procedura per decellularizzazione del Cuore di suino da retrograda perfusione coronarica (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2012-12-06T12:00:00.000+00:00
Duration: 11 min 30 s
Description: Impara la decellularizzazione cardiaca mediante perfusione coronarica retrograda su cuore di suino integro. Questo metodo produce scaffold di matrice extracellulare specifici per il sito per applicazioni in ingegneria tissutale cardiaca.

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Gli autori desiderano ringraziare Brogan Guest, Michelle Weaver, e Kristen Lippert. Il finanziamento per questo studio sono state fornite dal NIH Grant R03EB009237, così come le borse di formazione NIH T32EB001026-06 dal National Institute of Biomedical Imaging e Bioingegneria e T32HL076124-05.

1. Preparazione di tessuto ed esperimento di installazione <ol><li> Harvest organo suina immediatamente dopo l&#39;eutanasia da un impianto di macellazione o di ricerca e risciacquare sangue in eccesso. Tagliare il cuore di grasso in eccesso e tessuto, mantenendo gli atri e aorta intatto. Tagliare via il grasso per separare l&#39;arteria polmonare dall&#39;aorta. Se ci sono dei tagli nel tessuto, eliminare in modo appropriato. </li><li> Avvolgere ogni cuore singolarmente in carta freezer e memorizzare tutti i tessuti in un congelatore a -80 ° C per almeno 24 ore per garantire congelamento completo. </li><li> Quando si è pronti per l&#39;uso (di solito meno di 3 mesi), scongelare un cuore intatto suino congelato di tipo 1 acqua per una notte immersi in un bicchiere 4 L a 4 ° C. </li><li> Dopo che il cuore è completamente scongelato, accarezzare il cuore arido, pesare il cuore, e registrare il peso. Il cuore di un maiale del peso di mercato dovrebbe pesare circa 375-450 g. </li><li> Collegare taglia 18 tubo Masterflex alla fine ¼ &quot;di un riduttore spinato. Inserire il riduttore spinato etubo dentro l&#39;aorta. Luogo 2 fascette o fascette sicure in tutto il aorta, appena sotto il tronco brachiocefalico. Il riduttore e la tubazione deve rimanere al di sopra della valvola aortica, così le arterie coronarie possono essere perfuso (Figura 1). </li><li> Utilizzare una siringa da 30 o 60 ml per riempire il tubo con acqua di tipo I. Inserire il tubo all&#39;interno della cartuccia di una pompa a rulli Masterflex nel suo punto medio approssimativo. Immergere l&#39;estremità del tubo di afflusso nel fondo di un bicchiere 4 L riempito con 2,5 L di acqua e fissare il tubo. </li><li> Posizionare il cuore nel becher riempito con acqua, e adescare la pompa per rimuovere le bolle d&#39;aria. Se si osservano bolle proveniente dalla aorta dove è inserito il tubo, l&#39;aorta può essere necessario riposizionare o fissato con legami aggiuntivi. Una chiusura ermetica è importante per mantenere la pressione necessaria durante il processo di decellularizzazione (Figura 2). </li><li> Posizionare i 4 becher contenente L 3 L di un 0,2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% NaN3 soluzione sul piatto mescolare e riscaldare a 37 ° C, in preparazione del processo di decellularizzazione. </li></ol> 2. Tissue Risciacqui <ol><li> Impostare la pompa ad una portata di 400 ml / min, assicurando che la misura del tubo sia selezionata. Lavare il cuore di tipo I acqua per 15-25 minuti. Poiché la pompa viene avviata, il cuore deve gonfiarsi e effonderà sangue dai ventricoli. Soluzione fresca dovrebbe essere sostituito ogni 5-10 minuti, o quando necessario sulla base della quantità di sangue prelevato dal cuore. Se il sangue non è effuso dal cuore, regolare il tubo e morsetti sufficiente. </li><li> Arrestare la pompa e trasferire il cuore in un becher separato riempito di 2X Phosphate Buffered Saline (PBS). Dopo il tubo viene immerso in soluzione, avviare la pompa e aumentare il flusso di 700 ml / min. Il cuore dovrebbe rimanere in soluzione per 15 minuti, cambiando la soluzione ogni 5 min. Ogni cambiamento soluzione richiede la pompa da arrestare temporaneamente mentre il tessuto e il tubo viene spostatonel becher nuovo. </li><li> Trasferire il cuore di tipo I di acqua per 10 min e aumentare il flusso di 750 ml / min. </li></ol> 3. Decellularizzazione e soluzione di perfusione <ol><li> Trasferire il cuore nel becher contenente 0,2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% NaN 3 a 37 ° C. Aumentare la velocità della pompa a 1.200 ml / min e avviare la pompa. Utilizzare un agitatore posizionato sul fondo del bicchiere per far circolare la soluzione nel becher. Il cuore deve rimanere nella Trypsin/0.05% 0,2% EDTA/0.05% NaN 3 soluzione a 37 ° C per un totale di tre ore. Dopo 1 h, aumentare la velocità della pompa a 1.500 ml / min. Dopo un&#39;altra ora, aumentare la velocità della pompa a 1800 ml / min. Il tessuto è sottoposto a lenta velocità di perfusione aumento alla condizione del tessuto e prevenire la rottura dei vasi. Il cuore si gonfiano e quasi raddoppia durante questa fase del protocollo. Il tessuto perderà il suo colore naturale, procedendo dagli atri ai all&#39;apice tutto °e protocollo (Figura 3). </li><li> Dopo ogni soluzione di perfusione, in due fasi di risciacquo viene eseguita per rimuovere i detriti cellulari, residui chimici, e lisi cellulare aiuto. Ogni lavaggio è costituito da un risciacquo 10 min in acqua di tipo I seguita da 10 min risciacquo con soluzione 2X PBS a temperatura ambiente. Ogni lavaggio consiste nella rimozione della soluzione dal recipiente originale, aggiungere soluzioni di risciacquo, e la circolazione del perfusato nel becher contenente il cuore sommerso. Dopo il 0,2% Trypsin/0.05% EDTA/0.05% NaN 3 soluzione, acqua profumato a 1.900 ml / min e quindi perfondere 2X PBS a 1950 ml / min. </li><li> Trasferire il cuore ad una soluzione di 3% Triton X-100/0.05% EDTA/0.05% NaN 3 a temperatura ambiente. Aumentare la velocità della pompa a 2.000 ml / min e profumato soluzione per un&#39;ora. Rimuovere la soluzione dal bicchiere e sostituire con soluzione fresca, aumentare la velocità della pompa a 2100 ml / min, e perfondere la soluzione fresca per un&#39;altra ora e mezzo, portando il tempo totale in3% Triton X-100/0.05% EDTA/0.05% NaN 3-2,5 ore. </li><li> Risciacquare il tessuto in acqua di tipo I a 2150 ml / min e 2X PBS a 2180 ml / min per 10 min. </li><li> Trasferire il cuore di una soluzione di sodio desossicolato 4% a temperatura ambiente. Aumentare la velocità della pompa a 2200 ml / min e profumato soluzione per 3 ore. </li><li> Risciacquare il tessuto in acqua a tipo I e 2X PBS a 2.200 ml / min per 15 min ciascuna, cambiando le soluzioni dopo 5-10 minuti per ogni soluzione. Le fasi di perfusione descritti possono essere suddivisi su più giorni eseguendo la fase di lavaggio due volte e memorizzazione del cuore con tubo attaccato notte a 4 ° C e sommersa in acqua Tipo I. </li><li> Il giorno seguente, eseguire un 5 min risciacquo con acqua di tipo I a 750 ml / min, seguito da un risciacquo 5 min in 1X PBS a 1.500 ml / min. Il protocollo può essere continuato con la portata descritto nella soluzione adeguata. </li></ol> 4. Disinfezione e trattamento finale <ol><li> Trasferire il cuore ad un Perac 0,1%ETIC acido / soluzione di etanolo al 4% e la soluzione profumato per 1,5 ore a 2.200 ml / min. </li><li> I risciacqui finali per i tessuti sono tutti eseguiti in 2.200 ml / min. Perfondere il tessuto con 1X PBS per 15 minuti, seguito da due lavaggi 5 min in acqua di tipo I. Questa serie di risciacqui viene ripetuta ancora una volta, per completare la procedura di perfusione soluzione. </li><li> Spegnere la pompa e rimuovere il cuore da soluzione di scendere al cuore. Tagliare i legami della aorta, rimuovere tutti i tubi, e posizionare il cuore in un bicchiere vuoto a sgocciolare per 1 ora. Liquido in eccesso deve essere svuotato periodicamente. Gettare il cuore su un cuscinetto assorbente per drenare completamente il cuore (Figura 4). </li><li> Dopo la maggior parte dell&#39;acqua viene rimossa, registrare il peso della matrice extracellulare cardiaca (C-ECM). Il cuore può aspettare di perdere circa il 20-25% del suo peso iniziale durante il processo di decellularizzazione. </li><li> Sezionare i ventricoli destro e sinistro, così come il setto ventricolare per DNA quantificatie il trattamento istologico per confermare decellularizzazione completa del tessuto (Figura 5). </li><li> Congelare il C-ECM a -80 ° C per almeno 2 ore prima della liofilizzazione. </li></ol>

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</ol>

Il dottor Gilbert era sul Scientific Advisory Board a Acell, Inc. mentre lo studio era stato fatto, e recentemente è diventato il VP di Ricerca e Sviluppo. Acell, Inc. vende matrice della vescica urinaria e non ha alcun interesse commerciale in questo studio.

Lo studio attuale metodologia descritta per decellularizzazione coerente ed efficace di un cuore suino. Il protocollo era una modifica a un precedentemente pubblicato con il rapporto 1, e comprendeva più l&#39;esposizione al flusso e aumento della pressione, che ha fornito risultati più ripetibili. Il tessuto risultante decellularizzato soddisfatto tutti i criteri pubblicati per decellularizzazione successo del tessuto 2. Soluzione cambia frequenti sono stati eseguiti per limitare la reintroduzione...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente / materiale </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td><td> Commenti </td></tr><tr><td> Tripsina </td><td> Gibco </td><td> 15090 </td><td></td></tr><tr><td> EDTA </td><td> Pescatore </td><td> BP120-500 </td><td></td></tr><tr><td> NaN 3 </td><td> Sigma </td><td> S2002-500G </td><td></td></tr><tr><td> Triton X-100 </td><td> Sigma </td><td> X100-1L </td><td></td></tr><tr><td> 10X PBS </td><td> Pescatore </td><td> BP399-20 </td><td></td></tr><tr><td> Sodio desossicolato </td><td> Sigma </td><td> D6750-500G </td><td></td></tr><tr><td> Acido peracetico </td><td> Pfaltz e Bauer </td><td> P05020 </td><td> 35% CAS # 79-21-0 </td></tr><tr><td> Etanolo </td><td> Pharmco </td><td> 111000200 </td><td></td&gt; </tr><tr><td> Masterflex azionamento della pompa </td><td> Cole Parmer </td><td> SI-07.524-50 </td><td></td></tr><tr><td> Masterflex Tubi </td><td> Cole Parmer </td><td> 96400-18 </td><td> Size 18 </td></tr><tr><td> Riduttore spinato </td><td> Cole Parmer </td><td> EW-30612-20 </td><td></td></tr><tr><td> Beaker 4L </td><td> Fisher Scientific </td><td> 02-540T </td><td></td></tr></tbody></table>

procedura per decellularizzazione del cuore di suino da retrograda perfusione coronarica

Procedure for Decellularization of Porcine Heart by Retrograde Coronary Perfusion

Perfusione basata decellularizzazione intero organo ha recentemente guadagnato interesse nel campo dell&#39;ingegneria dei tessuti come mezzo per creare sito-specifici scaffold della matrice extracellulare, mentre gran parte conservando l&#39;architettura nativa del ponteggio. Ad oggi, questo approccio è stato utilizzato in una varietà di sistemi di organi, compreso il cuore, polmone, fegato e 1-5. Decellularizzazione metodi precedenti per tessuti senza una rete facilmente accessibile vascolare hanno invocato esposizione prolungata del tessuto a soluzioni di detergenti, acidi, o trattamenti enzimatici come mezzo per rimuovere i componenti cellulari e nucleari dall&#39;ambiente circostante extracellulare 6-8. Tuttavia, l&#39;efficacia di questi metodi incernierato sulla capacità delle soluzioni di permeare il tessuto tramite diffusione. In contrasto, la perfusione di organi attraverso il sistema vascolare naturale ridotto efficacemente la distanza di diffusione e trasporto facilitato di decellularizatisugli agenti nel tessuto e componenti cellulari dal tessuto. Qui, si descrive un metodo per decellularize pienamente un cuore intatto suino attraverso perfusione coronarica retrograda. Il protocollo ha prodotto completamente decellularizzato cardiaca matrice extracellulare (ECM-c) scaffold con la struttura tridimensionale del cuore intatto. Il nostro metodo utilizzato una serie di enzimi, detergenti e acidi accoppiato con risciacqui ipertoniche e ipotoniche per facilitare la lisi delle cellule e la rimozione. Il protocollo utilizzato una soluzione di tripsina per staccare celle della matrice seguito da Triton X-100 e sodio desossicolato soluzioni per aiutare nella rimozione di materiale cellulare. Il protocollo descritto utilizza anche velocità di perfusione maggiore di 2 L / min per lunghi periodi di tempo. L&#39;elevata portata, accoppiato con soluzione cambia accettati trasporto di agenti al tessuto senza contaminazione di detriti cellulari e assicurato efficace risciacquo del tessuto. Il metodo descritto rimosso tutto il materiale nucleare da native suina tessuto cardiaco, creando un sito-specifico cardiaca ECM scaffold che può essere utilizzato per una varietà di applicazioni.

L&#39;effetto di decellularizzazione sui cuori suina tutto varia naturalmente a causa delle differenze in termini di dimensioni, pressioni, e la disposizione del serbatoio. Pertanto, la composizione esatta degli scaffold derivati ​​matrice extracellulare non sarà lo stesso da cuore a cuore. Il completamento del protocollo descritto produrrà un cuore che appare bianco o traslucido, indicando la perdita di materiale cellulare. Tuttavia, è ampiamente accettato che un tessuto può essere considerata &quot;decellularizzato&qu...

Un metodo per rimuovere rapidamente e completamente componenti cellulari da un cuore suino intatta attraverso perfusione retrograda viene descritto. Questo metodo fornisce uno specifico sito cardiaca matrice extracellulare ponteggio che ha il potenziale per l&#39;utilizzo in molteplici applicazioni cliniche.

Procedura per decellularizzazione del Cuore di suino da retrograda perfusione coronarica

Perfusion-based  whole organ decellularization has recently gained interest in the field of  tissue engineering as a means to create site-specific ...

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di rimuovere rapidamente e completamente i componenti cellulari da un cuore suino intatto attraverso la profusione retrograda per produrre un'impalcatura di matrice extracellulare cardiaca sito-specifica. Ciò si ottiene incannulando prima l'aorta di un cuore suino intatto. Successivamente il tubo viene collegato a una pompa peristaltica e il tessuto viene lavato con acqua e soluzioni saline a basse portate.Il cuore viene quindi perfuso con una serie di soluzioni detergenti ed enzimatiche a una velocità di flusso gradualmente crescente per rimuovere i componenti cellulari. Il passaggio finale consiste nel perfondere una soluzione disinfettante. Rimuovere il tubo e tagliare le pareti ventricolari per la lavorazione.In definitiva, il cuore viene analizzato per confermare la completa rimozione del materiale cellulare e nucleare dal tessuto. La dimostrazione visiva di questo metodo è fondamentale perché le fasi iniziali di incannulamento e profusione sono difficili da apprendere perché l'esatta posizione del tubo è fondamentale per il successo dell'esperimento. L'organo suino viene prelevato da un macello o da una struttura di ricerca subito dopo l'eutanasia.Inizia risciacquando il sangue in eccesso. Successivamente, taglia il cuore dal grasso e dai tessuti in eccesso, mantenendo intatti gli atri e l'aorta. Separare l'arteria polmonare dall'aorta tagliando via il grasso in eccesso.Una volta tagliato, avvolgere ogni cuore singolarmente in carta da congelatore e conservare a meno 80 gradi Celsius per almeno 24 ore per garantire il congelamento completo. Quando è pronto per l'uso, scongelare il cuore immergendolo in un becher da quattro litri riempito con acqua di tipo uno e lasciarlo a quattro gradi Celsius per una notte. Dopo che il cuore è completamente scongelato, asciugalo e registra il suo peso.Il cuore di un maiale di peso di mercato dovrebbe pesare circa 375-450 grammi. Una volta che il cuore è pronto, collegare il tubo Master flex di taglia 18 all'estremità da un quarto di pollice di un riduttore spinato. Quindi, inserire il riduttore spinato e il tubo all'interno dell'aorta.Posizionare due fascette stringitubo o fissare le fascette intorno all'aorta appena sotto il tronco brachiocefalo. Il riduttore e il tubo devono rimanere sopra la valvola aortica in modo che le arterie coronarie possano essere perfuse. Quindi, utilizzare una siringa per riempire il tubo con acqua di tipo uno e inserirla nella cartuccia di una pompa a rulli master flex al suo punto medio approssimativo.Quindi, immergere l'estremità di afflusso del tubo, insieme al cuore sul fondo di un becher riempito con 2,5 litri di acqua e fissarlo. Gli aspetti più difficili di questa procedura sono la corretta incannulamento del cuore e il mantenimento di un'adeguata velocità della pompa durante tutta la procedura. Garantiamo il successo del nostro esperimento ispezionando visivamente il tessuto alla ricerca di bolle d'aria durante la procedura, oltre a mantenere un corretto versamento dai ventricoli durante tutta la procedura.Adescare la pompa per rimuovere le bolle d'aria dal tubo, riposizionare o fissare ulteriori fascette attorno all'aorta e al tubo se si osservano bolle d'aria. Una chiusura ermetica è importante per mantenere una pressione adeguata durante il processo di decellularizzazione. A questo punto, scaldare un becher da quattro litri contenente tre litri di soluzione di tripsina bilanciata con sale in preparazione del processo di decellularizzazione.Innanzitutto, impostare la pompa su una portata di 400 millilitri al minuto e assicurarsi che sia selezionata la dimensione corretta del tubo. Avviare la pompa e sciacquare il cuore con acqua di tipo uno per 15-25 minuti, il cuore dovrebbe gonfiarsi e diffondere il sangue dai ventricoli, la soluzione fresca dovrebbe essere sostituita ogni 5-10 minuti o secondo necessità. Dopo aver rimosso il sangue, arrestare la pompa e trasferire il cuore in un becher separato riempito con due XPBS.Immergere il tubo. Aumentare la portata a 700 millilitri al minuto e avviare la pompa. Lasciare il cuore in soluzione per 15 minuti, cambiando la soluzione ogni cinque minuti.Quando è pronto, trasferire il cuore in acqua di tipo uno per 10 minuti e aumentare la portata a 750 millilitri al minuto. Per iniziare il processo di decellularizzazione, trasferire il cuore nel becher contenente la soluzione di tryin per l'equilibrio salino caldo. Aumentare la velocità a 1200 millilitri al minuto e avviare la pompa.Posizionare una barra di agitazione sul fondo del becher per la circolazione e lasciare il cuore in questa soluzione per tre ore. La velocità di perfusione viene aumentata lentamente per condizionare il tessuto e prevenire la rottura dei vasi. Dopo un'ora, aumentare la velocità della pompa a 1500 millilitri al minuto.Dopo un'altra ora, la velocità della pompa viene aumentata a 1800 millilitri al minuto. Il cuore dovrebbe gonfiarsi e quasi raddoppiare di dimensioni. Il tessuto dovrebbe perdere il suo colore naturale progredendo dagli atri all'apice.Dopo ogni perfusione in soluzione, viene eseguito un risciacquo in due fasi per rimuovere i detriti cellulari, i residui chimici e favorire la lisi cellulare Dopo i viaggi bilanciati con il sale e la soluzione, perfondere acqua a 1900 millilitri al minuto e poi due XPBS a 1950 millilitri al minuto per 10 minuti ciascuno. Quindi, trasferisci il cuore in una soluzione di bilancia salina a temperatura ambiente di Triton X 100. Aumentare la velocità della pompa a 2000 millilitri al minuto e perfondere per un'ora.Dopo aver riempito con soluzione fresca, aumentare la velocità della pompa a 2100 millilitri al minuto e perfondere per un'altra ora e mezza. Quindi, risciacquare il fazzoletto come dimostrato in precedenza, ma a velocità di pompa maggiori. La successiva perfusione è con deossicoato di sodio al 4% a temperatura ambiente.Aumentare la velocità della pompa a 2200 millilitri al minuto e perfondere per tre ore. Dopo tre ore, ripetere le fasi di risciacquo, cambiando le soluzioni dopo cinque-10 minuti per ogni soluzione. Dopo la perfusione finale, trasferire il cuore in una soluzione di acido paracetico allo 0,1%, etanolo al 4% e perfondere per 1,5 ore a 2200 millilitri al minuto alla stessa velocità della pompa, perfondere il tessuto con un XPBS per 15 minuti, seguito da due lavaggi di cinque minuti in acqua di tipo uno.Ripetere ancora una volta per completare la procedura di perfusione della soluzione, spegnere la pompa e rimuovere il cuore dalla soluzione. Taglia i lacci dall'aorta. Togliete tutti i tubi e mettete il cuore in un bicchiere vuoto a scolare per un'ora.Rimuovere periodicamente il liquido in eccesso dopo un'ora. Appoggiare il cuore su un tampone assorbente per drenare ulteriormente. Dopo aver rimosso la maggior parte dell'acqua, registra il peso finale del cuore.Il cuore può perdere circa il 20-25% del suo peso iniziale durante il processo di decellularizzazione. Alla fine di questo processo, il cuore dovrebbe apparire bianco o traslucido indicando la perdita di materiale cellulare. Successivamente, il setto ventricolare e i ventricoli destro e sinistro vengono separati e riservati al DNA.La quantificazione e l'elaborazione istologica congelano i campioni a meno 80 gradi Celsius per almeno due ore prima della liofilizzazione. Il successo della decellularizzazione è dimostrato qui dalla significativa diminuzione del contenuto di DNA rispetto ai ventricoli nativi. Questo gel mostra che è rimasto poco DNA residuo nei ventricoli decellularizzati rispetto a una matrice vescicale urinaria o UBM.In questo esempio, la colorazione con ematodina ed eosina mostra la completa rimozione di materiale nucleare dai ventricoli. La colorazione di Masson conferma ulteriormente la perdita di fasci muscolari cardiaci e la ritenzione di reti di collagene durante il tentativo di questa procedura. È importante ispezionare visivamente il tessuto e le coronarie frequentemente.

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Perfusione cardiaca ex situ: una tecnica per preservare la funzione cardiaca suina isolata

Questo metodo consente di decellularizzazione di un organo solido complesso utilizzando un semplice protocollo basato su shock osmotico e l'aspersione di detergente ionico con rottura di matrice minimal organo. Si compone di una tecnica di decellularizzazione romanzo per cuori umani all'interno di una custodia pressurizzata con monitoraggio in tempo reale del deflusso di detriti cellulari e dinamiche flusso.

Decellularizzazione di cuore umano intero all'interno di una custodia pressurizzata in un orientamento invertito

Normotermica ex situ cuore aspersione (ESHP), conserva il cuore in uno stato di semi-fisiologico, palpitante. Quando eseguito in una modalità di lavoro, ESHP offre l'opportunità di eseguire valutazioni sofisticate del donatore attuabilità di funzione e organo di cuore. Qui, descriviamo il nostro metodo per la valutazione delle prestazioni del miocardio durante ESHP.

Normotermica Ex Situ cuore aspersione in modalità di lavoro: valutazione della funzione cardiaca e il metabolismo

Qui, descriviamo un modello preclinico di grandi animali (porcine) di trapianto ortotopico del cuore che è stato saldamente stabilito e utilizzato per studiare nuove strategie cardioprotettive.

Un modello pre-clinico di trapianto di cuore ortotopico

Abbiamo sviluppato un metodo semplicie per isolare le singole cellule cardiache del topo di alta qualità con la tecnica della perfusione antegrada. Questo metodo è privo di Langendorff e utile per isolare miociti ventricolari e atriali o cellule interstiziali, come fibroblasti cardiaci o progenitori.

Un metodo di perfusione antegrada per l'isolamento dei cardiomiociti dai topi

Presentiamo un protocollo per l'utilizzo di un sistema di perfusione sanguigna normotermica ex vivo per la somministrazione di terapie a un intero allotrapianto cardiaco in un modello di trapianto di cuore eterotopico suino.

Un protocollo di trapianto di cuore eterotopico suino per la somministrazione di terapie a un allotrapianto cardiaco

Il protocollo descrive l'approvvigionamento chirurgico e la successiva decellularizzazione dei lembi suini vascolarizzati mediante la perfusione di detergente dodecilsolfato di sodio attraverso la vascolarizzazione del lembo in un bioreattore di perfusione personalizzato.

Approvvigionamento e perfusione-decellularizzazione di lembi vascolarizzati suini in un bioreattore di perfusione personalizzato

Lo screening per la malattia coronarica potrebbe aumentare l'approvvigionamento di cuori di donatori con criteri estesi. Un protocollo per l'esecuzione di un'angiografia coronarica riproducibile durante la perfusione cardiaca ex-situ è descritto qui in un modello suino.

Angiografia coronarica durante la perfusione cardiaca ex-situ in un modello suino

Il protocollo qui descrive un modello suino ad alta fedeltà di trapianto di cuore dopo la donazione dopo la morte circolatoria utilizzando la perfusione ex vivo dell'allotrapianto.

Un modello suino ad alta fedeltà di trapianto di cuore ortotopico dopo donazione dopo morte circolatoria

Impara la decellularizzazione cardiaca mediante perfusione coronarica retrograda su cuore di suino integro. Questo metodo produce scaffold di matrice extracellulare specifici per il sito per applicazioni in ingegneria tissutale cardiaca.

Procedura per decellularizzazione del Cuore di suino da retrograda perfusione coronarica

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