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Il MultiBac Protein Complex Piattaforma di produzione al EMBL
Il MultiBac Protein Complex Piattaforma di produzione al EMBL
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JoVE Journal Biology
The MultiBac Protein Complex Production Platform at the EMBL

Il MultiBac Protein Complex Piattaforma di produzione al EMBL

Full Text
16,661 Views
13:51 min
July 11, 2013

DOI: 10.3791/50159-v

Imre Berger1, Frederic Garzoni1, Maxime Chaillet1, Matthias Haffke1, Kapil Gupta1, Alice Aubert1

1EMBL Grenoble Outstation and Unit of Virus Host Cell Interactions (UVHCI) UMR5322

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Please note that some of the translations on this page are AI generated. Click here for the English version.

Complessi proteici catalizzano le funzioni cellulari fondamentali. Caratterizzazione funzionale e strutturale dettagliata di molti complessi essenziali richiede la produzione ricombinante. MultiBac è un sistema di celle di baculovirus / insetto particolarmente adattato per esprimere proteine ​​eucariotiche e dei loro complessi. MultiBac è stato implementato come una piattaforma open-access, e le procedure operative standard sviluppati per massimizzare la sua utilità.

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di produrre complessi proteici utilizzando il sistema di cellule di insetto del virus del baula multiplo. Ciò si ottiene generando prima il costrutto multi-gene, codificando il complesso proteico di scelta. Il secondo passo consiste nel creare un virus composito della baula che contenga il costrutto multigenico trasformando le cellule batteriche e lo screening per i corretti medi posteriori.

Successivamente, isolare il genoma virale della baula e utilizzarlo per infettare le cellule degli insetti su piccola scala in una piastra a sei pozzetti dopo aver testato la produzione di proteine. Il complesso proteico scelto viene espresso su scala più ampia e purificato. In definitiva, il complesso proteico purificato viene utilizzato per scoprire la sua struttura e funzione e potenzialmente per la scoperta di farmaci.

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