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DOI: 10.3791/50159-v
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Complessi proteici catalizzano le funzioni cellulari fondamentali. Caratterizzazione funzionale e strutturale dettagliata di molti complessi essenziali richiede la produzione ricombinante. MultiBac è un sistema di celle di baculovirus / insetto particolarmente adattato per esprimere proteine eucariotiche e dei loro complessi. MultiBac è stato implementato come una piattaforma open-access, e le procedure operative standard sviluppati per massimizzare la sua utilità.
L'obiettivo generale di questa procedura è quello di produrre complessi proteici utilizzando il sistema di cellule di insetto del virus del baula multiplo. Ciò si ottiene generando prima il costrutto multi-gene, codificando il complesso proteico di scelta. Il secondo passo consiste nel creare un virus composito della baula che contenga il costrutto multigenico trasformando le cellule batteriche e lo screening per i corretti medi posteriori.
Successivamente, isolare il genoma virale della baula e utilizzarlo per infettare le cellule degli insetti su piccola scala in una piastra a sei pozzetti dopo aver testato la produzione di proteine. Il complesso proteico scelto viene espresso su scala più ampia e purificato. In definitiva, il complesso proteico purificato viene utilizzato per scoprire la sua struttura e funzione e potenzialmente per la scoperta di farmaci.
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