Name: Luso di chemostati in Biologia microbica Sistemi (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2013-10-14T20:45:00.000+00:00
Duration: 13 min 19 s
Description: Scopri l'uso dei chemostati in biologia microbica per controllare la crescita cellulare e studiare la regolazione fisiologica. Questo metodo consente analisi sistemiche dell'evoluzione adattativa.

ai_agent_IP

ai_agent

maintenance

instantTrialDurationMinutes

isBiopharma

enableNewMyJoveSectionDesign

educationFeatures

seoMetaApi

ai_copilot_institution_blacklist

ai_chat_institution_blacklist

freeAccessWindow

ssoRoleCapture

scheduledMaintenanceBanner

joveLabsFeatures

disable_autoplay_for_bots

extended_trial_duration

5 minutes

Questo lavoro è stato sostenuto da start up fondi dalla New York University. Ringraziamo Maitreya Dunham e Matt Brauer che ha inizialmente sviluppato l&#39;uso di bioreattori Sixfors come chemostati.

Il principio di coltura continuo utilizzando un chemostat può essere realizzato in una varietà di implementazioni. In tutti chemostati è essenziale per avere 1) metodi per mantenere la sterilità di tutti i componenti, 2) una cultura ben miscelato, 3) aerazione adeguata del recipiente di coltura e 4) in modo affidabile Inoltre media e rimozione cultura. Qui, descriviamo l&#39;uso di un bioreattore Sixfors (Infors Inc) come chemostat utilizzando metodi che possono essere facilmente adattato alle configurazioni alternative. 1. Montaggio delle navi chemostato <ol><li> Accendere i Sixfors utilizzando l&#39;interruttore principale. </li><li> Sciacquare accuratamente la nave chemostato, assemblaggio agitatore, e il tubo attaccato con acqua deionizzata (DI). Controllare tutti i tubi e anelli di tenuta e sostituire eventuali pezzi usurati cercando. </li><li> Assicurarsi che la base di supporto albero motore è rivolto verso l&#39;alto nel recipiente di vetro e che la parte superiore dell&#39;albero motore viene agganciato nella sua sede sul gruppo agitatore. Impostare il stirreassembly r nel recipiente di vetro garantendo fondo dell&#39;albero motore è seduto nel supporto dell&#39;albero motore. Utilizzare il morsetto per fissare il gruppo agitatore nel recipiente di vetro. </li><li> Riempire il serbatoio con circa 300 ml di acqua deionizzata. </li><li> Rimuovere i tappi da un ossigeno disciolto (DO 2) sonda e controllare il livello di elettroliti svitando il carter inferiore e fare in modo che il corpo inferiore è riempita a metà con soluzione elettrolitica. Riavvitare il carter inferiore e inserire nella porta sulla nave chemostato. Avvitare fino a stringerla. </li><li> Prendete una sonda pH e rimuoverlo dal suo buffer di memoria (3 M KCl). Rimuovere il tappo sonda pH e allegare al fermentatore 1. Utilizzando la schermata di controllo Sixfors, accedere al menu dei parametri fermentatore e selezionare &quot;calibrare pH&quot;. Posizionare la sonda pH in un buffer standard di pH 7 e la lettura record come Alta Read. Ripetere con pH 4 e la lettura record come Low lettura. Staccare la sonda pH dal fermentatore, lavare con acqua deionizzata e inserire la sonda into la porta sulla nave chemostato. Avvitare fino a stringerla. </li><li> Posizionare il vaso chemostato nel rack. Nota sulla nave che fermentatore (1-6) la sonda pH è stato collegato e calibrato. Mettere il tappo sonda pH sulla sonda pH. Utilizzando un foglio di coprire ermeticamente la parte superiore della sonda DO 2. </li><li> Piegare un foglio sopra le estremità del tubo attaccato alla nave chemostato. </li><li> Ripetere i passaggi 1,2-1,8 per tutte le navi. </li><li> Sterilizzare i vasi da essi autoclave per 15 minuti su un ciclo liquido. </li></ol> 2. Preparazione del supporto <ol><li> Stabilire la gamma di limitazione delle concentrazioni di una sostanza nutritiva crescendo culture lotti in diverse concentrazioni di nutrienti. Il nutriente è limitante nell&#39;intervallo in cui la densità cellulare finale è una funzione lineare della concentrazione iniziale di nutrienti (Figura 4). Seleziona una concentrazione di nutrienti ben all&#39;interno della gamma di limitazione. Esempi di composizione supporti standard per studi con Saccharomyces cerevisiae sono disponibili in 7-11. </li><li> Autoclave una damigiana vuota che viene ricoperto con un tappo di gomma contenente un ingresso e l&#39;uscita dei media dopo la prima garantire che l&#39;estremità del tubo supporto è coperto in un foglio. </li><li> In un recipiente separato preparare 10 L di media. </li><li> Attaccare una tazza di filtro da 500 ml per una bottiglia da 100 ml media. Rimuovere il filtro in cotone con una pinza sterilizzati in etanolo e collegare immediatamente alla porta filtrazione su damigiana media. </li><li> Fissare la damigiana media per una sorgente di vuoto e filtro sterilizzare i media aggiungendo alla coppa del filtro. </li><li> Quando la filtrazione dei media è completa, chiudere la porta di filtrazione con una fascetta di metallo. </li></ol> 3. Calibrazione DO 2 sonde e configurazione chemostato <ol><li> Dopo i vasi chemostato sono stati sterilizzati in autoclave e lasciato raffreddare luogo della nave nel suo corrispondente giacca calore. Collegare la sonda di temperatura, sonda pH, e DO sonda 2. Lasciate che ilnave sedersi con l&#39;alimentazione per almeno 6 ore per consentire DO 2 sonde per polarizzare. </li><li> Posizionare l&#39;estremità di ogni tubo effluenti in un recipiente di raccolta separata. Collegare l&#39;aria attraverso un filtro di autoclave e accendere il flusso d&#39;aria. L&#39;acqua in ogni nave deve fuoriuscire dei tubi effluenti, che indica che tutte le guarnizioni siano adeguatamente formate. </li><li> Regolare l&#39;altezza del tubo effluente secondo il volume di lavoro desiderata (ad esempio 300 ml). Usiamo un righello contrassegnato con posizionamenti tubo calibrato ai diversi volumi di lavoro. </li><li> Collegare la damigiana supporto alla nave chemostato. Utilizzare etanolo al fine di mantenere le estremità del tubo sterile come possibile. Infilare il tubo della pompa attraverso la pompa e pinza aperta. Premere manualmente la pompa fin quando si inizia a fluire nel recipiente chemostat. Rilasciare il tubo dalla pompa, media dovrebbero fluire liberamente nel vaso chemostato. Quando i media raggiunge il tubo effluenti, riattaccare il tubo alla pompa e pinza. </li><li> Inizia running il programma di base con girante impostato a 400 rpm e la temperatura impostata a 30 ° C. </li><li> Per calibrare fare 2 sonde, spegnere alimentazione dell&#39;aria e passare a gas azoto. Attendere almeno un&#39;ora e registrare il valore di misura come &quot;basso read&quot;. Tornare alla alimentazione dell&#39;aria (ossia con concentrazione di ossigeno ambiente), attendere almeno un&#39;ora supplementare e misura record come &quot;high lettura&quot;. </li><li> Avviare la registrazione dei dati utilizzando il software Iris. </li></ol> 4. Inoculazione <ol><li> Utilizzare etanolo al 70% per sterilizzare la parte superiore del recipiente di coltura. </li><li> Rimuovere la vite sulla parte superiore della nave e pipetta 1 ml di una cultura durante la notte nel vaso chemostato. Stringere nuovamente la vite. </li><li> Indicare il tempo di inoculazione in Iris. </li><li> Attendere circa 24 ore per le culture di raggiungere presto fase stazionaria. Come la cultura cresce, ossigeno disciolto e pH diminuisce. Nel caso di mezzi di glucosio-limitante, ossigeno disciolto tornerà ~ 100% in PHA stazionariaSE. Per altre limitazioni nutrienti ossigeno disciolto rimarrà &lt;100% in fase stazionaria. </li></ol> 5. Avvio Pompe e raggiungimento dello stato stazionario <ol><li> Il tasso di diluizione viene calcolata dividendo la portata (quante con fluido nel recipiente per ora) dal volume di coltura. Ad esempio, utilizzando un volume di 300 ml, un tasso di diluizione di 0,1 significa che 30 ml di supporto vengono aggiunti alla coltura ogni ora. Poiché il sistema è sotto pressione positiva lo stesso volume viene rimossa dal recipiente garantire che la cultura è continuamente diluito. Una gamma di tassi di diluizione (D) può essere usata che non superano il tasso massimo di crescita (μ max) delle cellule, oltre il quale le cellule verranno lavate fuori della chemostato. </li><li> Scegliere le impostazioni della pompa, che specificano il numero di secondi la pompa è accesa e spenta, per stabilire la portata desiderata. La pompa fornisce supporto ad una velocità di circa 0,11 ml / sec. </li><li> Definire un programma con l&#39;int Sixforserface che specifica la fasatura della pompa, la temperatura e la velocità girante. Avviare il programma. </li><li> Svuotare i recipienti di raccolta di liquido e registrare il tempo. </li><li> Dopo almeno due ore, utilizzare un cilindro graduato per misurare quanto i media è stato rimosso dal vaso. Questo sarà uguale al volume che è stato aggiunto al recipiente chemostat. Calcolare il tasso di diluizione (D = V effluenti / V cultura / tempo). Regolare le impostazioni della pompa se il tasso di diluizione calcolato non corrisponde alla percentuale di diluizione desiderata. </li><li> Allo stato stazionario, densità cellulare nel chemostato non cambia nel tempo. Questo può essere misurata senza perturbare la cultura campionando il deflusso. Noi definiamo operativamente il raggiungimento dello stato stazionario come misurazioni della densità delle cellule identiche che sono separati da almeno un raddoppio della popolazione. Raggiungere stato stazionario richiederà circa otto generazioni la cultura dopo l&#39;inizio della diluizione cultura. Allo stato stazionario, le cellule crescono in modo esponenziale (i.e. tasso di crescita costante nel tempo) in condizioni di nutrienti limitato. Il tempo di raddoppio della popolazione (tempo di generazione) è ln (2) / D. </li><li> Continua misurare periodicamente volumi di effluenti per la durata dell&#39;esperimento per garantire che un tasso di diluizione è mantenuta costante. </li></ol> 6. Applicazione 1: Studiare Cells crescendo a diversi tassi in condizioni di stato stazionario <ol><li> Allo stato stazionario nel chemostato, il tasso di crescita della popolazione di cellule è pari al tasso di diluizione. Alterando sistematicamente il tasso di diluizione è possibile coltivare cellule a velocità diverse. Ciò consente lo studio sistematico di parametri fisiologici che variano con il tasso di crescita compreso il volume delle cellule, stadio del ciclo cellulare e la resistenza allo stress. Inoltre, i profili steady-state di mRNA globale, proteine ​​e livelli dei metaboliti possono essere analizzati in cellule in crescita a ritmi diversi. Ci sono due modi per acquisire campioni: </li><li> I piccoli campioni possono essere passivamente obmantenuta inserendo l&#39;estremità del tubo effluente in una provetta da 1,5 ml o 15 ml. Un campione di 1-5 ml può essere ottenuta in pochi minuti (a seconda della portata). Molti parametri fisiologici possono essere misurati da questi campioni. </li><li> Espressione genica, o metabolita analisi richiedono grandi campioni che devono essere ottenuti più rapidamente possibile. Posizionare l&#39;estremità del tubo effluente in un tubo da 15 ml. Allentare la vite che fissa la fine del metallo del tubo effluenti e spingere delicatamente verso il basso. Un campione di 10 ~ ml sarà rapidamente riempire il vostro tubo. Tenete a mente che il volume nel recipiente chemostato è cambiato. Se vengono prese molti campioni consecutivi può essere necessario per ridurre il flusso di mantenere un tasso di diluizione costante. </li></ol> 7. Applicazione 2: Misura precisa delle differenze nei tassi di crescita tra i genotipi in ambienti controllati mediante saggi Concorso basati Citometria a Flusso <ol><li> Chemostati possono essere utilizzati per quantificare con precisione l&#39;effetto della concentrazione di nutrientisulle differenze nei tassi di crescita (cioè fitness) tra i diversi background genetico. Da ceppi co-coltura marcati con proteine ​​fluorescenti differenti il ​​tasso di variazione relativa abbondanza durante la crescita esponenziale è determinata. L&#39;esecuzione di questo test a diverse velocità di diluizione (D) permette lo studio degli effetti della concentrazione di nutrienti (s) sulle differenze di fitness. </li><li> Stabilire culture stato stazionario dei due ceppi di navi chemostato separate con tassi di diluizione identici e un volume di 300 ml. </li><li> Passivamente campione 1 ml di ciascuna nave. Spin le cellule, risospendere in tampone fosfato (PBS), e posto a 4 ° C. Questi campioni contengono campioni di cellule omogenee, che sono controlli per la successiva analisi di citometria a flusso. </li><li> Posizionare il tubo effluenti da una nave in un cilindro graduato autoclave. Allentare la vite che fissa la fine del metallo del tubo effluenti e spingere delicatamente verso il basso per espellere le cellule dal chemostato. Quandoil volume raggiunge 150 ml, di ritorno alla fine metallo del tubo effluenti nella sua posizione originale (300 ml). Ripetere con il secondo recipiente, utilizzando un cilindro graduato differente. </li><li> Utilizzare etanolo al 70% per mantenere la sterilità durante la rimozione vite sulla parte superiore del recipiente chemostat. Mettere imbuto in apertura e versare 150 ml dalla altra cultura nel vaso chemostato. Stringere nuovamente la vite. Ripetere con la seconda sezione, utilizzando il secondo imbuto. Ogni nave chemostato ora contiene una miscela dei due ceppi. </li><li> Ottenere un campione di 1 ml da ogni nave con campionamento passivo ogni 2-6 ore. Spin le cellule, risospendere in PBS e conservare a 4 ° C. Continua il prelievo di campioni per 2-3 giorni con attenzione registrando il tempo di ogni campione è stato preso. </li><li> Alla fine dell&#39;esperimento, ultrasuoni e diluire campioni a ~ 2 x 10 6 cellule / ml. Citometria a flusso, misurare la proporzione dei due ceppi in ciascun campione. Poiché entrambi i ceppi sono in crescita esponenziale, la differenza di tasso di crescita relativa èdeterminata mediante regressione lineare di ln (strain1/strain2) contro il tempo (misurato in generazioni). La pendenza della regressione è proporzionale alla differenza nel tasso di crescita (cioè il vantaggio fitness) di un ceppo rispetto all&#39;altro. </li><li> Come la coltura mista può richiedere un certo tempo per raggiungere un nuovo stato stazionario, punti di tempo iniziale possono adattarsi male alla regressione. Questo problema viene risolto meglio, consentendo 2-3 generazioni che deve trascorrere prima di iniziare il campionamento o rimuovere i primi punti che sono valori anomali chiare. Invece, una volta un ceppo ha outcompeted dall&#39;altro i dati non sono più utili e questi punti devono essere esclusi. </li></ol> 8. Applicazione 3: Evolution Sperimentale <ol><li> Evoluzione sperimentale eseguita in chemostati seleziona per mutanti che sono aumentati in palestra nell&#39;ambiente di nutrienti limitato. La selezione viene generalmente eseguita su centinaia di generazioni. </li><li> Stabilire una cultura chemostato steady-state utilizzando un ceppogenotipo di nota (e di sequenza del genoma, preferibilmente noto) e un nutriente-limite definito. </li><li> Per mantenere un &quot;fossile&quot; della popolazione che adegua passivamente Campione chemostato ogni 2-3 giorni e memorizzare il campione in 15% glicerolo a -80 ° C. </li><li> Monitorare il serbatoio media e ricostituire con mezzi freschi se necessario. </li><li> Mantenere la coltura in crescita esponenziale per diverse centinaia di generazioni. </li><li> Dopo il completamento della piastra di selezione di un campione di cellule su piastre di agar solido. Dopo che le cellule sono cresciute in colonie, raccogliere un campione imparziale delle colonie con stuzzicadenti e inoculare cloni in singoli pozzetti di una piastra a 96 pozzetti contenente 100 ml di media. Permettere ai campioni clonali di crescere durante la notte, aggiungere 100 ml di 30% di glicerolo e conservare in -80 ° C. </li><li> Caratterizzare cloni per intero sequenziamento del genoma e l&#39;esecuzione di analisi fenotipiche tra cui la valutazione di idoneità, utilizzando un ceppo di riferimento comune fluorescente, come descritto nella domanda 2. &lt;/ Li&gt; </ol>

<ol><li>Ingraham, J. L., Maaloe, O., Neidhardt, F. C. Growth of the Bacterial Cell. , Sinauer Associates, Inc. (1983).</li>
<li><a target="_blank" href="http://scholar.google.com/scholar?hl=en&safe=off&q=%22Cell+Growth%3A+Control+of+Cell+Size%22">Cell Growth: Control of Cell Size</a>. Hall, M. N., Raff, M. C., Thomas, G. , CSHL Press. (2004).</li>
<li>Monod, J. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((La+technique+de+culture+continue%2C+theorie+et+applications%5BTitle%5D)+AND+%22Ann.+Inst.+Pasteur%22%5BJournal%5D)">La technique de culture continue, theorie et applications.</a> Ann. Inst. Pasteur. 79, 390-410 (1950).</li>
<li>Novick, A., Szilard, L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Description+of+the+chemostat%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Description of the chemostat.</a> Science. 112, 715-716 (1950).</li>
<li>Kjeldgaard, N. O., Maaloe, O., Schaechter, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+transition+between+different+physiological+states+during+balanced+growth+of+Salmonella+typhimurium%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Gen.+Microbiol%22%5BJournal%5D)">The transition between different physiological states during balanced growth of Salmonella typhimurium.</a> J. Gen. Microbiol. 19, 607-616 (1958).</li>
<li>Maaloe, O., Kjeldgaard, N. O. Control of macromolecular synthesis. , W.A. Benjamin. (1966).</li>
<li>Saldanha, A. J., Brauer, M. J., Botstein, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Nutritional+Homeostasis+in+Batch+and+Steady-State%5BTitle%5D)+AND+%22Culture+of+Yeast.+Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Nutritional Homeostasis in Batch and Steady-State.</a> Culture of Yeast. Mol. Biol. Cell. 15, 4089-4104 (2004).</li>
<li>Boer, V. M., Crutchfield, C. A., Bradley, P. H., Botstein, D., Rabinowitz, J. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-limiting+intracellular+metabolites+in+yeast+growing+under+diverse+nutrient+limitations%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Growth-limiting intracellular metabolites in yeast growing under diverse nutrient limitations.</a> Mol. Biol. Cell. 21, 198-211 (2010).</li>
<li>Boer, V. M., de Winde, J. H., Pronk, J. T., Piper, M. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+genome-wide+transcriptional+responses+of+Saccharomyces+cerevisiae+grown+on+glucose+in+aerobic+chemostat+cultures+limited+for+carbon%2C+nitrogen%2C+phosphorus%2C+or+sulfur%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol.+Chem%22%5BJournal%5D)">The genome-wide transcriptional responses of Saccharomyces cerevisiae grown on glucose in aerobic chemostat cultures limited for carbon, nitrogen, phosphorus, or sulfur.</a> J. Biol. Chem. 278, 3265-3274 (2003).</li>
<li>Brauer, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Coordination+of+growth+rate%2C+cell+cycle%2C+stress+response%2C+and+metabolic+activity+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Biol.+Cell%22%5BJournal%5D)">Coordination of growth rate, cell cycle, stress response, and metabolic activity in yeast.</a> Mol. Biol. Cell. 19, 352-367 (2008).</li>
<li>Gresham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Adaptation+to+diverse+nitrogen-limited+environments+by+deletion+or+extrachromosomal+element+formation+of+the+GAP1+locus%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Adaptation to diverse nitrogen-limited environments by deletion or extrachromosomal element formation of the GAP1 locus.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 107, 18551-18556 (2010).</li>
<li>Regenberg, B., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth-rate+regulated+genes+have+profound+impact+on+interpretation+of+transcriptome+profiling+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Genome+Biol%22%5BJournal%5D)">Growth-rate regulated genes have profound impact on interpretation of transcriptome profiling in Saccharomyces cerevisiae.</a> Genome Biol. 7, R107(2006).</li>
<li>Castrillo, J. I., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Growth+control+of+the+eukaryote+cell%3A+a+systems+biology+study+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Biol%22%5BJournal%5D)">Growth control of the eukaryote cell: a systems biology study in yeast.</a> J. Biol. 6, 4(2007).</li>
<li>Cipollina, C., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Revisiting+the+role+of+yeast+Sfp1+in+ribosome+biogenesis+and+cell+size+control%3A+a+chemostat+study%5BTitle%5D)+AND+%22Microbiology%22%5BJournal%5D)">Revisiting the role of yeast Sfp1 in ribosome biogenesis and cell size control: a chemostat study.</a> Microbiology. 154, 337-346 (2008).</li>
<li>Gresham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((System-level+analysis+of+genes+and+functions+affecting+survival+during+nutrient+starvation+in+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Genetics%22%5BJournal%5D)">System-level analysis of genes and functions affecting survival during nutrient starvation in Saccharomyces cerevisiae.</a> Genetics. 187, 299-317 (2011).</li>
<li>Levy, S. F., Ziv, N., Siegal, M. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Bet+hedging+in+yeast+by+heterogeneous%2C+age-correlated+expression+of+a+stress+protectant%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Biol%22%5BJournal%5D)">Bet hedging in yeast by heterogeneous, age-correlated expression of a stress protectant.</a> PLoS Biol. 10, e1001325(2012).</li>
<li>Kao, K. C., Sherlock, G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Molecular+characterization+of+clonal+interference+during+adaptive+evolution+in+asexual+populations+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Genet%22%5BJournal%5D)">Molecular characterization of clonal interference during adaptive evolution in asexual populations of Saccharomyces cerevisiae.</a> Nat. Genet. 40, 1499-1504 (2008).</li>
<li>Gresham, D., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((The+repertoire+and+dynamics+of+evolutionary+adaptations+to+controlled+nutrient-limited+environments+in+yeast%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">The repertoire and dynamics of evolutionary adaptations to controlled nutrient-limited environments in yeast.</a> PLoS Genet. 4, e1000303(2008).</li>
<li>Wenger, J. W., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Hunger+Artists%3A+Yeast+Adapted+to+Carbon+Limitation+Show+Trade-Offs+under+Carbon+Sufficiency%5BTitle%5D)+AND+%22PLoS+Genet%22%5BJournal%5D)">Hunger Artists: Yeast Adapted to Carbon Limitation Show Trade-Offs under Carbon Sufficiency.</a> PLoS Genet. 7, e1002202(2011).</li>
<li>Dunham, M. J., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Characteristic+genome+rearrangements+in+experimental+evolution+of+Saccharomyces+cerevisiae%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Characteristic genome rearrangements in experimental evolution of Saccharomyces cerevisiae.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 99, 16144-16149 (2002).</li>
<li>Ronen, M., Botstein, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transcriptional+response+of+steady-state+yeast+cultures+to+transient+perturbations+in+carbon+source%5BTitle%5D)+AND+%22Proc.+Natl.+Acad.+Sci.+U.S.A%22%5BJournal%5D)">Transcriptional response of steady-state yeast cultures to transient perturbations in carbon source.</a> Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 103, 389-394 (2006).</li>
<li>Kresnowati, M. T. A. P., et al. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((When+transcriptome+meets+metabolome%3A+fast+cellular+responses+of+yeast+to+sudden+relief+of+glucose+limitation%5BTitle%5D)+AND+%22Mol.+Sys.+Biol%22%5BJournal%5D)">When transcriptome meets metabolome: fast cellular responses of yeast to sudden relief of glucose limitation.</a> Mol. Sys. Biol. 2, 49(2006).</li>
<li>Tu, B. P., Kudlicki, A., Rowicka, M., McKnight, S. L. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Logic+of+the+yeast+metabolic+cycle%3A+temporal+compartmentalization+of+cellular+processes%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Logic of the yeast metabolic cycle: temporal compartmentalization of cellular processes.</a> Science. 310, 1152-1158 (2005).</li>
<li>Tzur, A., Kafri, R., LeBleu, V. S., Lahav, G., Kirschner, M. W. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Cell+Growth+and+Size+Homeostasis+in+Proliferating+Animal+Cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Cell Growth and Size Homeostasis in Proliferating Animal Cells.</a> Science. 325, 167-171 (2009).</li>
<li>Conlon, I., Raff, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Size+control+in+animal+development%5BTitle%5D)+AND+%22Cell%22%5BJournal%5D)">Size control in animal development.</a> Cell. 96, 235-244 (1999).</li>
<li>Conlon, I. J., Dunn, G. A., Mudge, A. W., Raff, M. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Extracellular+control+of+cell+size%5BTitle%5D)+AND+%22Nat.+Cell+Biol%22%5BJournal%5D)">Extracellular control of cell size.</a> Nat. Cell Biol. 3, 918-921 (2001).</li>
<li>Fussmann, G. F., Ellner, S. P., Shertzer, K. W., Hairston, N. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Crossing+the+hopf+bifurcation+in+a+live+predator-prey+system%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Crossing the hopf bifurcation in a live predator-prey system.</a> Science. 290, 1358-1360 (2000).</li>
<li>Cohen, E. P., Eagle, H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((A+simplified+chemostat+for+the+growth+of+mammalian+cells%3A+characteristics+of+cell+growth+in+continuous+culture%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Exp.+Med%22%5BJournal%5D)">A simplified chemostat for the growth of mammalian cells: characteristics of cell growth in continuous culture.</a> J. Exp. Med. 113, 467-474 (1961).</li>
</ol>

Gli autori dichiarano di non avere interessi finanziari in competizione.

Chemostati permettono la coltivazione di microbi in condizioni di steady-state di crescita controllata. Le cellule crescono continuamente ad una velocità costante risultante in un ambiente esterno invariante. Questo è in contrasto con i metodi di coltura batch in cui l&#39;ambiente esterno è in continua evoluzione e il tasso di crescita delle cellule è determinata dalla complessa interazione di ambiente e genotipo. Pertanto, un vantaggio importante di coltura microbi in chemostati oltre colture in lotti è la capacità di...

La crescita delle cellule è regolata da complesse reti di interazione dei fattori genetici e ambientali 1,2. La regolazione multifattoriale della crescita cellulare richiede un approccio a livello di sistema allo studio. Tuttavia, lo studio rigoroso della crescita cellulare regolamentato è contestata dalla difficoltà di controllare sperimentalmente la velocità con cui le cellule crescono. Inoltre, anche nelle condizioni più semplici esperimenti extracellulari sono frequentemente dinamico e complesso come cellule alterano continuamente il loro ambiente mentre proliferano. Una soluzione a questi problemi è fornita dal chemostat: un metodo di coltura di cellule che consente il controllo sperimentale dei tassi di crescita delle cellule in ambienti definiti, invarianti e controllati. Il metodo di coltura continuo utilizzando un chemostat è stato descritto in modo indipendente da Monod 3 e Novick &amp; Szilard 4 nel 1950. Come originariamente concepito, le cellule sono coltivate in un volume fisso di supporto che è constantemente diluita con l&#39;aggiunta di nuovi media e la rimozione simultanea di vecchi media e cellule (Figura 1). Accoppiate equazioni differenziali ordinarie (Figura 2) descrivono il tasso di variazione della densità delle cellule (x) e la concentrazione di una sostanza nutritiva (s) crescita limitativo nel recipiente chemostat. È importante sottolineare che questo sistema di equazioni prevede un unico (diverso da zero) stabile allo stato stazionario (Figura 3) con l&#39;implicazione notevole che allo stato stazionario, il tasso di crescita specifico delle cellule (cioè il costante tasso di crescita esponenziale), è pari al tasso alla quale la coltura è diluito (D). Variando la velocità di diluizione è possibile stabilire popolazioni steady-state di cellule a tassi di crescita diversi e in diverse condizioni di scarsità di nutrienti. Il controllo sperimentale del tasso di crescita utilizzando chemostati è stato fondamentale per lo sviluppo di una comprensione di come i cambiamenti fisiologia cellularecon tassi di crescita 5,6. Tuttavia, questo ex pilastro dei metodi microbiologici divenne sempre più oscuro durante l&#39;esplosione nella ricerca di biologia molecolare nel corso del tardo ventesimo secolo. Oggi, rinnovato interesse nel controllo della crescita in entrambi i microbi e organismi multicellulari e l&#39;avvento di metodi genoma scala per analisi a livello di sistema ha rinnovato motivazione per l&#39;uso di chemostati. Qui, descriviamo tre applicazioni che capitalizzano il controllo preciso dei tassi di crescita delle cellule e l&#39;ambiente esterno che sono unicamente possibile con chemostati. In primo luogo, si descrive l&#39;uso di chemostati per studiare come l&#39;abbondanza di migliaia di biomolecole - come trascrizioni e metaboliti - sono coordinatamente regolato con il tasso di crescita. In secondo luogo, si descrive come chemostati possono essere utilizzati per ottenere stime precise delle differenze di tasso di crescita tra i diversi genotipi in ambienti nutrienti limitata con esperimenti di competizione. In terzo luogo, si descrive come chemostati puòessere usato per studiare l&#39;evoluzione adattativa di cellule che crescono in ambienti poveri di nutrienti costanti. Questi esempi esemplificano i modi in cui i chemostati stanno consentendo indagini sistemi a livello di regolazione della crescita delle cellule, geni da interazioni ambientali e l&#39;evoluzione adattativa.

<table><tbody><tr><td>Infors-HT Sixfors Chemostat</td><td>Risorse tecniche appropriate, Inc.</td><td></td><td>&nbsp;</td></tr><tr><td>Bottiglia di vetro 9,5 L</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-887-1</td><td>Per recipiente per media e</td></tr> tubo flessibile <tr><td></td><td>Fisher Scientific</td><td>05-867</td><td>Per tubo flessibile e tappo per tubi</td></tr><tr><td>, misura 12, neoprene verde</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-62991-42</td><td>Per tubo flessibile</td></tr><tr><td>e connettore diritto</td> per tubi flessibili <td>Cole-Palmer</td><td>EW-30703-02</td><td>Per media vessel e tubo</td></tr><tr><td>flessibile Generale fascette 4 in</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9557052</td><td>per recipienti per fluidi e tubi flessibili</td></tr><tr><td>, B000FMWTDE in gomma siliconica</td><td></td><td></td><td>per recipienti e</td></tr><tr><td>tubi flessibili, silicone, 3/8 in OD</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-587-1Q</td><td>per recipienti per fluidi e</td></tr><tr><td>tubi flessibili, silicone, 7/32 in OD</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-587-1E</td><td>per recipienti per fluidi e tubi flessibili</td></tr><tr><td>Tubi, acciaio inossidabile, 3/16 pollici OD</td><td>McMaster-Carr</td><td>6100K164</td><td>Per recipienti per fluidi e tubi flessibili</td></tr><tr><td>, acciaio inossidabile, 3/8 pollici</td> OD <td>McMaster-Carr</td><td>6100K161</td><td>Per recipienti per fluidi e connettori per ganci per tubi flessibili</td></tr><tr><td></td><td>Fisher</td><td>Scientific 14-66-18Q</td><td>Per recipiente per fluidi e tubo flessibile</td></tr><tr><td>Morsetto a cricchetto</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-06403-11</td><td>Per recipiente per fluidi e tubo flessibile</td></tr><tr><td>Luer, femmina</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-45512-34</td><td>per recipiente multimediale e tubo</td></tr><tr><td>Luer, maschio</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-45513-04</td><td>per recipiente multimediale e tubo flessibile</td></tr><tr><td>Millipore Aervent MTGR05010 filtro da 62 mm, 0,2 &; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>MTGR05010</td><td>per recipiente per media e tubi flessibili</td></tr><tr><td>PTFE Acrodisc CR 13 mm, 0,2 &mu; m</td><td>Fisher Scientific</td><td>NC9131037</td><td>per recipiente per fluidi e tubi flessibili</td></tr><tr><td>Tubo di flusso a lettura diretta per aria</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-32047-77</td><td>Per configurazione di azoto gassoso</td></tr><tr><td>Tubo di flusso a lettura diretta per azoto</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-32048-63</td><td>Per configurazione di azoto gassoso</td></tr><tr><td>Dosatore di gas Telai multitubo</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-03218-50</td><td>Per configurazione</td></tr> <tr><td>di azoto gassosoRegolatore, analitico a due stadi</td><td>Airgas</td><td>Y12-N145D580</td><td>per l'installazione del gas di azoto</td></tr><tr><td>Adattatore per tubo flessibile, acciaio inossidabile</td><td>Airgas</td><td>Y99-26450</td><td>per l'installazione del gas di azoto</td></tr><tr><td>Adattatore maschio</td><td>Airgas</td><td>WES544</td><td>per l'installazione dell'azoto gassoso</td></tr><tr><td>Tubi in norprene</td><td>US Plastics</td><td>57280</td><td>Per l'installazione dell'azoto Gas</td></tr><tr><td>Base per treppiede</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-03218-58</td><td>Per l'impostazione dell'azoto gassoso</td></tr><tr><td>Cartucce per valvole</td><td>Cole-Palmer</td><td>EW-03217-92</td><td>Per l'installazione dell'azoto gassoso</td></tr><tr><td>Damigiana 10 L</td><td>Fisher Scientific</td><td>02-963-2A</td><td>Per la preparazione dei terreni</td></tr><tr><td>Filtri sterili per flaconi sottovuoto Steritop, 1.000 ml, membrana in PES; per collo da 45 mm</td><td>Fisher Scientific</td><td>SCGP-T10-RE</td><td>Per la preparazione dei terreni</td></tr><tr><td>Flacone per terreni da 100 ml, collo</td> <td>da 45 mmFisher Scientific</td><td>FB-800-100</td><td>per la preparazione dei terreni</td></tr><tr><td>cloruro di calcio&middot; 2H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>C79-500</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>Cloruro di sodio</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP358-1</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>solfato di magnesio&middot; 7H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>230391</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>fosfato di potassio monobasico</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC424205000</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>solfato di ammonio</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC423400010</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>cloruro di potassio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9541</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr>acido<td>borico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>B6768</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>solfato di rame&middot; 5H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td></td><td>209198 Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>ioduro di potassio</td><td>Sigma Aldrich</td><td>60400</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni cloruro ferrico&middot; 6H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>I88-100</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>solfato di manganese&middot; H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>230391</td><td>Media Reagenti</td></tr><tr><td>molibdato di sodio&middot; 2H2O</td><td>Sigma Aldrich</td><td>M7634</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>solfato di zinco&middot; 7H2O</td><td>Fisher Scientific</td><td>Z68-500</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>biotina Fisher</td><td>Scientific</td><td>BP232-1</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>pantotenato di calcio</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC24330-1000</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni acido folico</td><td>Sigma Aldrich</td><td>F7876</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni inositolo (noto anche come mio-inositolo)</td><td>Fisher Scientific</td><td>AC12226-1000</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>niacina (alias acido nicotinico)</td><td>Sigma Aldrich</td><td>N4126</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>acido p-aminobenzoico</td><td>Fisher</td><td>Scientific AC14621-2500</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni piridossina HCl</td><td>Sigma Aldrich</td><td>P9755</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni riboflavina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>R4500-25G</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni tiamina HCl</td><td>Fisher Scientific</td><td>BP892-100</td><td>Reagenti</td></tr><tr><td>per terreni Leucina</td><td>Sigma Aldrich</td><td>L8000-100G</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>Uracil</td><td>Sigma Aldrich</td><td>U0750</td><td>Reagenti per terreni</td></tr><tr><td>Destrosio</td><td>Fisher Scientific</td><td>DF0155-08-5</td><td>Reagenti per terreni</td></tr></tbody></table>

l&#39;uso di chemostati in biologia microbica sistemi

The Use of Chemostats in Microbial Systems Biology

Le cellule regolano il loro tasso di crescita in risposta a segnali dal mondo esterno. Con la crescita della cellula, diversi processi cellulari devono essere coordinati tra cui la sintesi macromolecolare, metabolismo e infine, l&#39;impegno per il ciclo di divisione cellulare. Il chemostato, un metodo per controllare sperimentalmente tasso di crescita cellulare, fornisce un potente mezzo di sistematicamente studiare come impatti tasso di crescita processi cellulari - tra l&#39;espressione genica e del metabolismo - e le reti di regolazione che controllano il tasso di crescita delle cellule. Quando mantenuta per centinaia di generazioni chemostati può essere usato per studiare l&#39;evoluzione adattativa di microbi in condizioni ambientali che limitano la crescita cellulare. Descriviamo il principio di culture chemostato, dimostriamo loro funzionamento e fornire esempi delle loro varie applicazioni. Dopo un periodo di inattività dopo la loro introduzione a metà del XX secolo, la convergenza delle metodologie genoma scala con una rinnovata nelteresse nella regolazione della crescita cellulare e la base molecolare della evoluzione adattativa è stimolare una rinascita nell&#39;uso di chemostati nella ricerca biologica.

Uno dei principali vantaggi di chemostati è la capacità di controllare la velocità di crescita delle cellule sperimentalmente variando il grado di diluizione. Nel lievito erba, Saccharomyces cerevisiae, la morfologia di una cellula è informativo della fase del ciclo di divisione cellulare. Popolazioni con tassi di crescita contengono una percentuale maggiore di divisione attivamente cellule come determinato misurando la frazione di cellule unbudded (Figura 5A). Analisi di espressione mRNA globale di cul...

Il tasso di crescita delle cellule è un processo regolato e un determinante fondamentale della fisiologia cellulare. Coltura continua utilizzando chemostati consente il controllo estrinseco di crescita cellulare mediante limitazione nutritiva facilitare lo studio delle reti molecolari che controllano la crescita cellulare e come tali reti evolvono per ottimizzare la crescita cellulare.

L&#39;uso di chemostati in Biologia microbica Sistemi

Cells regulate their rate of growth in response to signals from the external world. As the cell grows, diverse cellular processes must be coordinated ...

Gli obiettivi generali della seguente presentazione sono descrivere il principio del chemostato, dimostrarne il funzionamento e fornire esempi di applicazioni che utilizzano i chemostati. Questo viene ottenuto innanzitutto assemblando il reattore del chemostato, inoculandolo e quindi aggiungendo continuamente nuovo mezzo mentre si rimuovono vecchio mezzo e cellule a un tasso costante. Un modello matematico descrive la variazione della densità cellulare e la variazione della concentrazione di un nutriente limitante per la crescita all'interno di ciascun chemostato.L'utilizzo di queste equazioni consente la previsione di un singolo stato stazionario stabile non nullo, in cui le concentrazioni cellulari e dei nutrienti sono costanti e la velocità specifica di crescita delle cellule è uguale alla velocità con cui le cellule vengono rimossi. Combinando il controllo preciso della crescita cellulare e dell'ambiente all'interno dei chemostati con altre tecnologie, è possibile ottenere risultati che permettono indagini a livello di sistema sulla regolazione della crescita cellulare, sui cambiamenti genetici e sull'evoluzione adattativa. Il principale vantaggio di questo metodo di coltura ce

the-use-of-chemostats-in-microbial-systems-biology

Research

Ricerca

JoVE Journal

Biology

Biologia

Abbiamo sviluppato e validato un piccolo ingombro serie di chemostati in miniatura costruito da prontamente parti disponibili per basso costo. Risultati evoluzione fisiologiche e sperimentali sono stati simili a chemostati volumi più grandi. La matrice Ministat fornisce una piattaforma compatta, poco costoso, e accessibile per gli esperimenti chemostato tradizionali, genomica funzionale, e le applicazioni di screening chimici.

Progettazione e utilizzo di matrici chemostato multiplexing

Descriviamo un morbidostat configurabile a basso costo che consente la caratterizzazione della resistenza ai farmaci antibiotici regolando dinamicamente la concentrazione del farmaco. Il dispositivo può essere integrato con una piattaforma microfluidica multiplexata. L'approccio può essere ampliato per studi di laboratorio sulla resistenza ai farmaci antibiotici.

Progettazione e l&#39;uso di un basso costo, Automated Morbidostat per Adaptive Evolution di batteri sotto antibiotici selezione dei farmaci

Qui, vi presentiamo un protocollo per ottenere adattativa evoluzione laboratorio di microrganismi in condizioni che utilizzano la cultura chemostat. Inoltre, l'analisi genomica del ceppo evoluto è discusso.

Procedura per l&#39;Adaptive Laboratorio evoluzione dei microrganismi Utilizzando un chemostat

Abbiamo progettato una apparecchiatura per le colture in continuo per l'uso con i sistemi optogenetic per illuminare le culture di microbi e regolarmente celle di immagine negli effluenti con un microscopio invertito. La coltura, il campionamento, l'imaging, e l'analisi delle immagini sono completamente automatizzati in modo che le risposte dinamiche a illuminazione possono essere misurati per diversi giorni.

Progettazione e Realizzazione di un Illuminating automatizzato, Coltura, e di campionamento per microbica optogenetic Applicazioni

Qui si descrive un protocollo per l'estrazione di metaboliti da Staphylococcus aureus e la loro successiva analisi mediante cromatografia liquida e spettrometria di massa.

Un approccio Tandem HPLC-MS-based per analisi dei metaboliti di<em&gt; Staphylococcus aureus</em

Un protocollo dettagliato per il funzionamento simultaneo di 48 colture parallele sotto varie condizioni in un sistema di microbioreactor è presentato. Processo di coltura cellulare, raccolta e analisi di titolo dell'anticorpo successivi sono descritti.

Uso di High-Throughput Microbioreactor sistema automatizzato per la produzione del modello IgG1 in cellule CHO

Il Framework eVOLVER consente una coltura microbica continua ad alta produttività con alta risoluzione e controllo dinamico sui parametri sperimentali. Questo protocollo illustra come applicare il sistema per condurre un esperimento di fitness complesso, guidando gli utenti a programmare il controllo automatizzato su molte culture individuali, misurando, raccogliendo e interagendo con i dati sperimentali in tempo reale.

Progettare esperimenti di crescita cellulare automatizzati, ad alta produttività e continui utilizzando eVOLVER

Viene presentato un protocollo per la generazione di paesaggi chimici dinamici mediante fotolisi all'interno di configurazioni microfluidiche e millifluidiche. Questa metodologia è adatta per studiare diversi processi biologici, tra cui il comportamento motile, l'assorbimento di nutrienti o l'adattamento alle sostanze chimiche dei microrganismi, sia a livello di singola cellula che di popolazione.

Generazione di paesaggi chimici dinamici e controllati per studiare il comportamento microbico

Presentato qui è il protocollo per un saggio chemiotaxis in situ, un dispositivo microfluidico recentemente sviluppato che consente studi di comportamento microbico direttamente nell'ambiente.

In Situ Chemotaxis Assay per esaminare il comportamento microbico negli ecosistemi acquatici

Il controllo optogenetico del metabolismo microbico offre un controllo dinamico flessibile sui processi di fermentazione. Il protocollo qui mostra come impostare fermentazioni regolate dalla luce blu per la produzione chimica e proteica a diverse scale volumetriche.

Fermentazioni a controllo leggero per la produzione chimica microbica e proteica

Presentiamo un protocollo per il dispositivo di coltura millifluidica continua (MCCD), che consente la coltivazione di popolazioni batteriche in condizioni costanti di bassi nutrienti (fino a centinaia di concentrazioni nanomolari) o fluttuazioni temporali dei nutrienti su una scala temporale di tempo.

Un dispositivo millifluidico in coltura continua per lo studio di Escherichia coli in condizioni nutritive basse e fluttuanti

Scopri l'uso dei chemostati in biologia microbica per controllare la crescita cellulare e studiare la regolazione fisiologica. Questo metodo consente analisi sistemiche dell'evoluzione adattativa.

L'uso di chemostati in Biologia microbica Sistemi

Esplora altri video