Generazione di linee cellulari umane stabili con tetraciclina-inducibile (Tet-on) shRNA o espressione di cDNA

L'obiettivo generale di questa procedura è quello di generare linee cellulari umane stabili con espressione inducibile da tetraciclina, S-H-R-N-A o CDNA. Per prima cosa trasfettare le cellule bersaglio con il plasmide di espressione tatara e selezionare il lato blaster in resistenza. Quindi scegli le singole colonie e cerca cellule che esprimano stabilmente la proteina repressore del Tet.

Successivamente, trasfettare il clone che esprime il miglior teta con plasmidi progettati per modulare l'espressione genica bersaglio sotto il controllo della coltura dell'elemento di risposta Tet. Le cellule trasfettate sotto doppia selezione selezionano quindi singole colonie e selezionano i cloni di Teton desiderati mediante western blotting. In definitiva, i cloni di Teton risultanti possono essere utilizzati per esaminare l'impatto di bersagli specifici su parametri biologici selezionati.