L'angiogenesi nel polmone del ratto ischemica

L'obiettivo generale di questa procedura è legare l'arteria polmonare sinistra. Ciò si ottiene intubando e ventilando prima un ratto anestetizzato. Successivamente, viene eseguita una toracotomia e viene legata l'arteria polmonare sinistra.

Dopo la legatura, il torace viene chiuso e il ratto può riprendersi. In definitiva, l'entità della neovascolarizzazione nel polmone sinistro può essere valutata misurando il livello di fluorescenza nel tessuto o con altri metodi istologici. Il vantaggio principale di questa tecnica è che offre l'opportunità di studiare lo sviluppo in vivo e la neovascolarizzazione della circolazione bronchiale nel polmone.

Ciò fornisce un'opportunità per studiare la complessa struttura 3D di questo nuovo sistema vascolare in un polmone ventilato. Ora, questo è molto diverso da ciò che viene attualmente fatto dalla maggior parte dei ricercatori che formano l'OMS, che eseguono studi in vitro che studiano la proliferazione delle cellule endoteliali e la chemiotassi o la formazione di tubi. In generale, gli individui che non conoscono questa procedura avranno difficoltà a cercare di eseguire la dissezione tra l'arteria polmonare sinistra e il bronco sinistro.

L'unico consiglio che posso dare è di esercitarsi, di essere pazienti e di guardare frequentemente questo video per vedere se ci sono piccoli aggiustamenti nell'approccio chirurgico. A dimostrare questa procedura è John Jenkins, un tecnico del mio laboratorio. Per iniziare, posizionare un ratto anestetizzato su una tavola chirurgica e collegare un cono nasale per la continuazione dell'anestesia, intubare l'animale con un catetere di plastica e collegare il ratto a un ventilatore.

Dopo aver applicato l'unguento sugli occhi, posiziona il topo sul lato destro e fissa le appendici con del nastro adesivo. Rimuovere i peli sopra l'area chirurgica e preparare la pelle con scrub ripetuti di Betadine e alcol. Quando è pronto, praticare un'incisione trasversale attraverso la pelle.

Successivamente, seziona gli strati di grasso e tessuto per rivelare la gabbia toracica. Una volta esposto, identificare il terzo spazio intercostale e utilizzare una pinza per praticare un'incisione smussata tra la terza e la quarta costola. Inserire i separatori di costole nell'apertura e aprire delicatamente le costole fino a quando il polmone non è visibile.

Fissare l'apertura. Per prima cosa, sposta indietro il polmone sinistro con la mano destra. Quindi, con una pinza dritta, afferrare l'arteria polmonare sinistra e le vie aeree con la sinistra.

L'arteria polmonare sinistra dovrebbe trovarsi sopra le vie aeree e la pinza dovrebbe essere perpendicolare al tavolo. Una volta allineato, utilizzare correttamente una pinza intagliata per separare l'arteria dal bronco dello stelo principale sinistro ai loro bordi naturali. Questa linea di separazione appare sottile e bianca tra le due singole strutture.

Facendo attenzione a non passare attraverso l'imbarcazione. Far scorrere le punte della pinza lungo la separazione. Continuare in questo modo fino a quando l'arteria polmonare sinistra non si trova sulla curva del forcipe.

Con la mano sinistra rilascia delicatamente la pinza dritta e afferra un pezzo di sutura pretagliata. Apri la pinza curva, cullando l'arteria quanto basta per afferrare la sutura. Tirare delicatamente la sutura con un movimento verso l'alto rispetto alla curva della pinza.

Una volta attraversata, stringere la sutura per occludere l'arteria polmonare sinistra e tagliare via l'eventuale sutura rimanente tenendola insieme con una pinza. Sutura le costole. Facendo attenzione a non suturare la pelle in modo allentato.

Fai un nodo quadrato che poi chiuderà le costole. Ipergonfiare il polmone occludendo brevemente la linea espiratoria del ventilatore, quindi stringere la sutura. Fissare la sutura facendo un altro nodo completo prima di tagliare via le estremità.

Rimuovere la pressione di fine espirazione e osservare per 30 secondi per assicurarsi che i polmoni non collassino. Infine, applica cinque gocce. Bupivacaina, chiudere la pelle con colla per tessuti.

Spegnere il gas isof, ma continuare a ventilare il ratto per uno o due minuti all'aria ambiente fino a quando la respirazione spontanea non torna a uno stato stazionario. Quindi, scollegare il tubo tracheale dal ventilatore e assicurarsi che il ratto respiri spontaneamente prima di rimuoverlo. Somministrare periodicamente un analgesico locale nelle prossime 24 ore.

Infine, pulisci l'unguento dagli occhi e monitora l'animale fino a quando non si riprende al momento desiderato. I punti dopo l'ischemia possono essere iniettati microsfere. Per valutare l'entità della perfusione bronchiale, viene utilizzata una pompa per infusione di piccolo volume per erogare microsfere marcate nell'arteria carotide sinistra a una velocità costante.

Collegare il catetere a un ago smussato calibro 25 e a un rubinetto a quattro vie. Per iniziare seguire i preparativi chirurgici dimostrati in precedenza. Quando è pronto, praticare un'incisione sulla linea mediana lungo lo smussato del collo.

Sezionare il tessuto per rivelare la trachea e l'arteria carotide sinistra. Una volta isolati oltre due suture sotto l'arteria carotide, legare saldamente la sutura prossimale. Quindi, praticare un piccolo taglio nell'arteria e inserire un catetere riempito di soluzione salina.

Fissarlo in posizione con la sutura a monte. Questo calco vascolare fornisce una notevole visualizzazione dell'angiogenesi bronchiale nel polmone. 28 giorni dopo la legatura dell'arteria pary sinistra qui, viene mostrata una sezione delle vie aeree dal polmone sinistro tre giorni dopo l'azione.

Si notino i due vasi bronchiali prominenti pieni di globuli rossi situati all'interno della parete delle vie aeree. L'inserto è colorato per mostrare la proliferazione delle cellule endoteliali dell'arteria bronchiale. Questo esempio mostra una sezione polmonare sinistra prelevata 14 giorni dopo la legatura.

Si noti l'aumento delle dimensioni dei vasi bronchiali in questo momento e la fluorescenza dell'arteria polmonare avvizzita utilizzata per valutare l'entità della perfusione sistemica non è stata praticamente rilevata nel polmone sinistro dei ratti naïve. Tuttavia, c'era un livello sostanziale, significativo e coerente misurato nel polmone sinistro dai ratti. Studiato 14 giorni dopo la legatura Una volta padroneggiato.

Questa tecnica può essere eseguita in meno di un'ora se eseguita correttamente. Dopo aver visto questo video, dovresti avere una buona comprensione di come intubare il ratto, eseguire la toracotomia e legare con successo l'arteria polmonare. A seconda della variabile di esito, dovresti essere in grado di incannulare l'arteria carotide sinistra e infondere microsfere marcate per l'analisi della perfusione.